课件：中药分析学.ppt

本章学习要求要求,1,杂质,杂质：无治疗作用，影响药物疗效和稳定性，甚至 对人体健康有害。 杂质检查：保证药物的安全、有效、均一和纯度 杂质来源：主要来源于药物的加工、生产和贮藏三 个环节。,有害物质,内源性有害物质：中药本身含具有毒副作用的化学成分，如马兜铃酸、乌头碱、吡咯里西啶类生物碱。 外源性有害物质：残留农药、有机溶剂、大孔树脂，重金属及有害元素，微生物和黄曲霉毒素等。,第一节 中药杂质及有害物质检查的一般要求,限量检查,杂质限量,不影响疗效和不发生毒性的前提下，药物中可能存在的杂质，允许还有一定量，最大允许量为杂质限量。,药物中杂质的检查一般只检查是否超过限量，这种方法称杂质的限量检查。通常用百分之几（%）或百万分之几（ppm）或mg/kg来表示。,杂质限量=,杂质限量,杂质最大允许量,样品量,杂质及有害物质的限量检查,含量测定法,比较法,最大限度量待检杂质或待检物对照品（或标准品）溶液，与供试品溶液，在相同条件下实验，比较结果，以确定是否超过限量。,在供试品溶液中加入试剂，在一定条件下反应，观察有无阳性结果出现，以判断杂质是否超限。,取供试品一定量，依法检查，测定待测品的某些特征参数，与规定的限量比较，以判断是否超限。,用规定的方法测定杂质的含量，与规定的限量比较，以判断杂质是否超限。,限量检查方法,1.杂质检查 2.干燥失重（详见药典） 3.水分测定 4.灰分测定 5.色度检查（详见药典） 6.酸败度测定（详见药典）,第二节 中药杂质及常规检查方法,取规定量样品，摊开，用肉眼或放大镜（5-10倍）观察，将杂质检出。,将各类杂质分别称重，计算其在供试品中的含量（%），如丁香中杂质不得过2%，女贞子中杂质不得过3%,1.外观难以鉴别时，可进行显微或理化鉴别试验，证明其为杂质后，计入杂质重量中。 2.杂质检查所用的供试品量，除另有规定外，按药材和饮片取样法称取。 3.需采用特殊方法进行检查的杂质，应给出具体方法。,注意 事项,一、药材中混存杂质检查法,1,2,3,4,烘干法,二、水分测定法,甲苯法,减压干燥法,气相色谱法,甲苯法水分测定装置,适用于含挥发性成分的药品，不适用于微量水分的测定。因200ml甲苯可吸水0.1ml，故需预处理。甲苯先加少量水，充分振摇后放置，将水层弃去，甲苯经蒸馏后使用。,总灰分：中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化所遗留的无机物。 酸不溶性灰分：中药经高温炽灼得到的总灰分加盐酸处理，得到不溶于盐酸的灰分。,三、灰分测定及炽灼残渣检查,1,总灰分测定法,取适量供试品于炽灼至恒重的坩埚中，称定重量，缓缓炽热，避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500-600，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算总灰分的含量（%）。,2,酸不溶性灰分测定法,取总灰分，先用稀盐酸加热溶解，无灰滤纸滤过，再洗涤至洗液不显氯化物反应为止。干燥，炽灼至恒重，计算酸不溶性灰分的含量（%）。,3,注意事项,供试品需适量粉碎，使其能通过2号筛，将粉末混合均匀后再取样。 如供试品不易灰化，可将坩锅放冷，加热水或10硝酸铵溶液2ml，使残渣湿润，然后置水浴上蒸干，得到的残渣再按前法炽灼至坩锅内。,(一)灰分测定法,取供试品适量，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温；除另有规定外，加硫酸0.51ml使润湿，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在700800炽灼使完全灰化，移置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在700800炽热至恒重，即可。如需将残渣留作重金属检查，则炽热温度必须控制在500600。,(二)炽灼残渣检查法,中药经炽灼炭化，再加硫酸湿润，加热使硫酸蒸气除尽后，于高温炽灼至完全灰化，使有机物破坏分解变为挥发性物质逸出，残留的非挥发性无机杂质（多为金属的氧化物或无机盐类）成为硫酸盐，称为炽灼残渣。,重金属及 有害元素,重金属及有害元素包括铅（Pb)、镉（Cd)、砷（As）、汞（Hg）、铜（Cu）等。 其毒性作用主要是由于与体内酶蛋白上的-SH和-S-S-键牢固结合，从而使蛋白质变性，酶失去活性，组织细胞出现结构和功能上的损害。,检测方法,1.重金属总量用硫代乙酰胺或硫化钠显色反应比色法 测定。 2.砷盐的检测用古蔡法或二乙基二硫代氨基甲酸银法 3.单个铅（Pb)、镉（Cd)、砷（As）、汞（Hg）、铜 （Cu）元素的测定使用原子吸收光谱法和电感耦合 等离子体质谱法进行测定。,第三节 重金属及有害残留物分析,一、重金属及砷盐总量检查法,pH3.5 CH3CSNH2H2O CH3CONH2H2S Pb2H2S PbS（黑色）2H,原理,方法,第一法硫代乙酰胺法,取纳氏比色管两支，甲、乙两管中按照规定分别制成对照品、供试品溶液；同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。,2019/8/31,13,可编辑,1,供试品如有色,应在加硫代乙酰胺试液以前在对照溶液管中滴加少量稀焦糖液，使之与供试品溶液管的颜色一致，然后再加硫代乙酰胺试液比色。如仍不能使两管颜色一致时，可取两倍量供试品加水溶解后，分成两等份，在一份中加入硫代乙酰胺试液，经滤膜滤过（除去金属硫化物沉淀），加入规定量的标准铅溶液作为对照溶液，再与另一份供试溶液按规定方法处理后比较。,2,供试品如含高铁盐,影响重金属检查时，可先加抗坏血酸0.5-1.0g，并在对照液中加入相同量的抗坏血酸，再照上述方法检查。,3,供试品为铁盐,可在相对密度1.103-1.105的盐酸（盐酸9ml加水6ml）中，使大部分Fe3+生成HFeCl62（六氯合铁离子）,用乙醚提取除去；再加氨试液使溶液呈碱性，用氰化钾掩蔽残留的微量铁盐后，加硫化钠试液检查铅盐。,4,药物本身也能生成不溶性硫化物,干扰重金属的检查时，应作特殊处理。,供试品的处理,将供试品炽灼破坏后，加硝酸加热处理，使有机物分解破坏完全后，再按一法进行检查。,原理,方法,取炽灼残渣项下遗留的残渣，按照规定分别制成对照品、供试品溶液；照一法检查，即得。,第二法炽灼后硫代乙酰胺法,炽灼温度对重金属检查影响较大，温度越高，重金属损失越大，应控制在500600炽灼使完全炭化。 炽灼残渣加硝酸加热处理后，必须蒸干除尽氧化氮，否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。如使用盐酸超过1ml（或与盐酸1ml相当的稀盐酸），或氨试液超过2ml，以及用硫酸与硝酸进行有机破坏或其他试剂处理者，除另有规定外，对照品溶液应取同样量试剂在磁皿中蒸干。 含钠盐或有氟的有机药物在炽灼时能腐蚀瓷坩锅而引入重金属，应改用铂坩锅或硬质玻璃蒸发皿。,注意事项,二、农药残留量测定方法,农药分类(从化学成分角度) 杀虫剂可分成有机氯化合物、有机磷化合物、氨基甲酸酯、有机氮化合物、拟除虫菊酯、有机氟化合物、有机锡化合物、特异性杀虫剂等。 杀菌剂又可分成有机氯杀菌剂、有机磷杀菌剂、有机硫杀菌剂、有机汞杀菌剂、无机杀菌剂、抗菌素等。,农药危害,1.有机氯类农药：易在脂肪中蓄积，造成慢性中毒。 2.有机磷类农药：抑制生物体内胆碱脂酶的酶活性，从而引发中毒。 3.氨基甲酸酯类农药：使胆碱酯酶丧失对乙酰胆碱的水解能力，造成一系列中毒症状。 4.拟除虫菊酯类农药：影响细胞色素C和电子传递系统，可直接作用于神经末梢和肾上腺髓质。,农药的污染途径,1.环境对药材的污染 2.中药栽培中农药的污染 3.采收、加工、贮存、运输过程中的污染。,常用的方法有漂洗法、振荡法、组织捣碎法、冷浸法、索氏提取法、超声法、固相萃取法、超临界萃取法等。 提取溶剂的选择 考虑提取溶剂的纯度、极性,提取,检测,常用气相色谱法对残留农药进行定性和定量。 测定有机氯农药时，使用电子捕获检测器（ECD） 测定有机磷农药时，使用火焰光度检测器（FPD）,中药中残留农药的提取和纯化,毛细管柱顶空进样程序升温法,第二法,有机溶剂残留量的检查常采用气相色谱法，现行中国药典收载有3种方法。,第一法,第三法,毛细管柱顶空进样等温法,溶液直接进样法,三、有机溶剂残留物测定法,一类不带离子交换基团的多孔交联聚合物,可通过物理吸附从溶液中选择性吸附有机物质，在中药的分离纯化中被广泛应用。,其制备过程中使用了苯乙烯和二乙烯苯等作为原料,并加入了一定比例的致孔剂,残留物有正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1，2-二乙基苯和二乙烯苯,气相色谱法，采用聚乙二醇为固定相的弹性石英毛细管柱，氢火焰离子化检测器，外标法。,四、大孔树脂残留物测定法,22,第四节、黄曲霉毒素及微生物学检查,一、 黄曲霉毒素测定 黄曲霉毒素（aflatoxin）是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，是一类结构相似的化合物，基本结构都有二呋喃和香豆素（氧杂萘邻酮），有较强毒性。,第四节、黄曲霉毒素及微生物学检查,黄曲霉素性质 耐热，在280时可发生裂解。低浓度毒素B1易受紫外线破坏。遇氧化 性物质、氢氧化钠和氨水等均可被破坏。在水中溶解度很低，易溶于油 及一些有机溶剂，如氯仿、丙酮、甲醇等，但不溶于乙醚、石油醚和己烷 中。,黄曲霉毒素的测定方法,1.微柱法,本法做中成药中黄曲霉毒素筛选用，不能分辨黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2等。测得结果为黄曲霉毒素的总量。 将样品提取液通过氧化铝-硅镁型吸附剂填充的微柱，样品中的杂质被氧化铝吸附，黄曲霉毒素则被硅镁型吸附剂吸附。在紫外光灯下观察荧