课件：德州检验会.ppt

北京东方志禾商贸有限公司 李保昌,临床检验项目的合理选择与配伍,0,1,Torch检测的内容包括,Toxoplasma gondii：弓形虫 Others：梅毒，B19细小病毒 Rubella virus：风疹 Cytomegalo virus：CMV Herpes Simplex virus ：单纯疱疹病毒,2,ToRCH检测方法,印迹法： a.蛋白印迹，westernblot， b.将纯化的抗原印迹于膜上Euroimmune ） 金标法 酶标法（a.间接法 b.捕获法） 化学发光法（a.间接法 b.捕获法） 化学发光法酶标法（捕获法）印迹法、酶标间接法金标法 定量定性,3,CMV概述,人类感染面最广的病毒之一 传播途径多样 直接接触：唾液，性接触, 垂直传播：经胎盘母婴传播 血液传播：输血（白细胞） 移植 潜伏部位常在唾液腺、乳腺、肾等 影响因素 - 年龄 - 种族 - 职业 - 社会经济条件 影响后果： 健康人（机会性感染）：无临床症状，单核细胞增多症 免疫系统受损的病人：肺，心，肝和肾的多系统损伤 胎儿：先天性CMV感染,核内包涵体呈“猫头鹰眼”状,4,先天性CMV感染-Congenital infection,-孕妇初次感染 primary infection (对胎儿的影响严重） 孕妇再次感染 re-infection （J Clin Virol. 2009 Dec;46 Suppl 4:S6-10. Epub 2009 Oct 2. Congenital cytomegalovirus (CMV) epidemiology and awareness. ） （占先天性CMV的3/4）,90%无症状 10%出生有症状,几个月或几年后有 后遗症（10-15%） 无症状,先天性 CMV感染 （0.2-2.5%）,先天性CMV感染 来源于孕妇的CMV急性感染,感染,感染后果,5,先天性CMV感染胎儿不良后果神经发育方面疾病为主,出生后有症状 出生后无症状但以后发病：neurological problems（ unilateral or bilateral sensory neural hearing loss 单或双侧感觉神经性听力丧失）,Indian J Pediatr. 2010 Jan;77(1):77-9. Neonatal cytomegalovirus infection: diagnostic modalities available for early disease detection.,小头畸形 (70%), 智力缺陷 (35%), 听力障碍 (60%), 肝脾肿大 (70%), 黄疸 (68%), 血小板减少症 (65%), 低体重 (65%), 肺炎 (2-5%) 先天性心脏病 (5%).,6,1.IgM阳性就是近期感染吗？！-仅有IgM+是不能下结论的。 2.原发感染与复发感染的临床处理不同，如何鉴别-亲和力 3.该如何做：IgG/IgM/Avidity合理配伍，灵活选择应用。,伴IgM由-转+则为复发感染,巨细胞病毒CMV感染状况的实验检测方案,7,导致孕妇 CMV IgM 检测阳性结果原因众多,初次急性感染 继发急性感染,交叉反应 (疱疹病毒家族) 患者体内IgM持续阳性 免疫系统的多克隆刺激,单独检测CMV IgM导致假阳性，一定加入IgG检测,8,多克隆激活,多克隆激活示意图 T、B细胞可通过多克隆激活剂直接被激活,Preferential retroviral-mediated transduction of EBV- and CMV-specific T cells after polyclonal T-cell activation. Sauce D, Mercier P, Battini JL, Ferrand C, Certoux JM, et al Gene Ther. 2004 Jun;11(12):1019-22.,9,CMV IgG avidity 检测 ：引入细胞免疫，确定感染时间,CMV avidity 检测,B细胞在淋巴组织生发中心会经历克隆选择，生成高亲合力抗体的浆细胞才会选择性存活，而非高亲合力的则凋亡。,10,卫生部临检中心CMV推荐检测方案,11,Liaison CMV panel,CMV IgG: IU/mL0.4 NEGATIVE 0.4IU/mL0.6 EQUIVOCAL IU/mL 0.6 POSITIVE CMV IgM: AU/mL 15 NEGATIVE 15 AU/mL 30 EQUIVOCAL AU/mL 30 POSITIVE avidity recommended CMV IgG avidity: Av 0.200 LOW AVIDITY 0.200 Av 0.300 MODERATE AVIDITY Av 0.300 HIGH AVIDITY,12,胎儿CMV感染的诊断标准（北美）,羊膜腔穿刺检测羊水CMV： CMV分离培养（金标准）&PCR检测 注意：在孕妇CMV感染后7周和孕21周后，检测过早往往导致假阴性 超声检查发现胎儿不良结果:,J Obstet Gynaecol Can. 2010 Apr;32(4):348-54. Cytomegalovirus infection in pregnancy.,13,确认CMV感染后的治疗,CMV hyperimmune globulin新生儿出生不良后果明显减少 抗病毒药物：丙氧鸟苷（ganciclovir DHPG）有防止CMV扩散作用；耐丙氧鸟苷的CMV感染可选用磷甲酸钠，但效果比前者差。 孕 妇伐昔洛韦 新生儿更昔洛韦、缬更昔洛韦 终止妊娠慎重，确诊胎儿CMV感染，同时与患者及家庭充分交流，不得已而为之的最后选择 CMV疫苗处于研发中？疫苗对CMV再次感染有效性等问题尚待评估？,14,弓形虫 Toxoplasma,15,怀孕期间弓形虫诊断,临床上常无明显症状：轻度发热，酸痛，淋巴结肿大，无力，皮疹，眼部感染等症状 对成人危害不大，但是，在孕妇可引起流产，早产和死胎。 对于未出生的胎儿，它可以侵袭大脑和眼睛，导致严重疾病。 主要的传染源是猫的排泄物，进食生的或半生的肉类也有可能感染。 实验室诊断方法:血清学检测及其他,16,弓形虫感染来源,生食感染的肉类 食入污染的蔬菜 肉类加工 食入生鲜海产品 猫等动物 等等,Clin Infect Dis. 2009 Sep 15;49(6):878-84. Risk factors for Toxoplasma gondii infection in the United States.,17,怀孕各阶段弓型虫的垂直感染率不同,在孕期的前三个月为约15%，进行治疗后，只有7%的新生儿发生了感染。 孕中期三个月的传染率为24-30% 孕期的后三个月，感染的发生率高达59%。 早期检测和治疗具有重要意义。,Mem Inst Oswaldo Cruz. 2009 Mar;104(2):389-92. Diagnosis of congenital toxoplasmosis: prenatal and neonatal evaluation of methods used in Toulouse University Hospital and incidence of congenital toxoplasmosis. Montoya J, Remington J. Management of Toxoplasma gondii infection during pregnancy. Clin Infect Dis 2008;47:55466.,垂直感染率随孕周越来越高 孕早期的感染导致的胎儿先天性不良后果较中后期更严重 早期检测和治疗具有重要意义。,2019/8/31,18,可编辑,弓形虫感染筛查流程,19,20,Liaison Toxoplasma,Liaison Toxo IgG II : Curve range 0- 400 IU/mL IU/mL 7.2 NEGATIVE 7.2IU/mL 8.8 EQUIVOCAL IU/mL 8.8 POSITIVE Liaison Toxo IgM: AU/mL 6.0 NEGATIVE 6.0 AU/mL 8.0 EQUIVOCAL AU/mL 8.0 POSITIVE Liaison Toxo IgG Avidity II Av 3 LOW AVIDITY 3 Av 4 MODERATE AVIDITY Av 4 HIGH AVIDITY,21,弓形虫感染确诊实验孕妇确诊，胎儿确诊,孕妇确诊： 血清学检测（确诊急性感染） Sabin-Feldman test Differential Agglutination (AC/HS) test IgG avidity test IgM，IgE ，IgA 胎儿确诊： 羊水检测（确诊感染） 羊水穿刺PCR：孕18周后/感染4周后做 （PCR结果阴性不能排除胎儿未被感染） 超声定期检查（确诊不良） 对于确诊感染的病例孕期每个月定期检查,22,孕妇弓形虫急性感染的治疗,孕18周前发生垂直感染-口服螺旋霉素 孕18周后发生垂直感染或确诊胎儿弓形虫感染-乙胺嘧啶，同时补叶酸,23,风疹 Rubella, 300，000,24,风疹病毒,孕期风疹感染会导致死胎、早产、及一系列新生儿先天性缺陷(congenital rubella syndrome CRS). 胎儿受累的严重程度与孕期何时感染病毒有很大关联 50%以上风疹初次感染的患者没有临床症状,孕前感染: 几乎没有风险 孕期0-12周: 胎儿先天性感染风险100%，导致大多数新生儿先天性异常 孕期13 - 16 周: 15%的耳聋及白内障等视网膜疾病 孕期16周后: 胎儿发育正常,极少数出现耳聋及视网膜疾病,25,天然获得性免疫&疫苗免疫,天然获得性风疹免疫具有高度保护性，天然感染之后发生再感染几率很低 注射疫苗获得性免疫保护时限16年左右 风疹IgG检测10-15IU/ml具有保护性,Reprod Toxicol. 2006 May;21(4):350-82. Epub 2006 Mar 27. Laboratory assessment and diagnosis of congenital viral infections: Rubella, cytomegalovirus (CMV), varicella-zoster virus (VZV), herpes simplex virus (HSV), parvovirus B19 and human immunodeficiency virus (HIV).,26,卫生部临检中心风疹推荐检测方案,？,？,27,IgG的亲和力约4-6周即可达到较高水平，相对快速，所以在确定感染时间上应用价值有限。,IgG亲合力受到多种因素影响-亲合力增加迅速,28,不建议做风疹IgG 亲合力检测- Dr Liliane Grangeot-Keros,Recommendation: Do not perform Rubella IgG Avidity testing but follow the variation of IgG and IgM antibody levels,29,HSV,30,HSV概述,HSV感染临床症状没有特异性 HSV-1 型感染率很高，主要通过非性接触；也可通过性传播，并且性传播的方式近年有增高的趋势 HSV-2 型主要通过性传播途径，HIV易感 女性感染率往往比男性要高 主要威胁在孕妇，导致胎儿和新生儿感染 孕妇初次感染HSV通过胎盘传给胎儿/新生儿的可能性远高于HSV复发的,Maternal and Neonatal Herpes Simplex Virus Infections N Engl J Med 2009;361:1376-85.,31,先天性和新生儿感染HSV的临床特点,先天性HSV (宫内感染） 流产，宫内发育迟缓，畸形 皮肤小囊泡，疤痕 眼部损伤(脉络视网膜炎，小眼畸形，白内障） 神经损伤（颅内钙化，小头畸形等）,新生儿 涉及皮肤，眼口部损伤， 脑炎 多系统功能衰竭,32,HSV孕妇血清学检测意义,孕妇的血清学表现 鉴别孕妇是否高风险 亚型辨别：对临床治疗和孕期指导意义有限,“the type-specific test is useful but not essential” Herpes simplex virus infection in pregnancy and in neonate: status of art of epidemiology, diagnosis, therapy and prevention. Virology Journal 2009, 6:40,33,Primary infection or non-primary first episode 30-34 WG,Acyclovir 200 mg five times daily Acyclovir 400 mg three times daily from 36 weeks to delivery,Genital Lesion +,Genital Lesion -,Caesarean Section,Vaginal Delivery,Primary infection or non-primary first episode 34 WG,Acyclovir 200 mg five times daily Acyclovir 400 mg three times daily from 36 weeks to delivery,Caesarean Delivery,Accidental Vaginal Delivery,Virus isolation in the mother and newborn Follow up,Virus isolation in the mother and newborn To consider neonatal therapy,Virus isolation in the mother and newborn To consider neonatal therapy,孕期初次HSV 临床方案,WG: weeks gestation,34,Recurrent infection,Acyclov