课件：病毒感染的检查方法与防治原则.ppt

第一节 病毒感染的检查方法,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶,电镜直接观察 光镜检查包涵体 分离培养,一、标本的采集与送检,原则基本与细菌相似，还特别注意以下原则： 采集急性期标本 使用抗生素：标本用“双抗”或两性霉素B处理 冷藏保存、快速送检 采集双份血清,二、病毒的分离与鉴定,（一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation）,二、病毒的分离与鉴定,一般程序：,标本,无菌处理,动物接种 鸡胚培养 细胞培养,指标阳性 指标阴性,病毒鉴定,盲传23代,指标阴性,病毒阴性,1. 细胞培养 根据生长方式分类： 单层细胞培养（monolayer cell culture） 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 从细胞来源、染色体特征及传代次数分类： 原代细胞（primary cell） 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line）,（一）病毒的分离培养,病毒的细胞培养,细胞培养瓶,单层细胞,1.细胞培养,（1）原代和次代细胞培养,组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞,剪碎 培养基,(原代细胞),单层细胞,(次代细胞),传代培养,蛋白酶,特点：对多种病毒敏感 生长能力有限, 获取成本高 可携带潜伏病毒,（2）二倍体细胞培养 体外分裂50100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。,特点：对多种病毒敏感 不带异种蛋白(人源性) 不带病毒，无致瘤潜能 可传50代左右,1.细胞培养,（3） 传代细胞培养,特点：对多种病毒敏感性高 繁殖能力高，传代时间长 有致癌危险，不能用于疫苗生产,1.细胞培养,病毒在培养细胞中增殖的指征： 致细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） 红细胞吸附（hemadsorption） 病毒干扰作用（viral interference） 细胞代谢改变,（一）病毒的分离培养,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落,（1）致细胞病变效应（CPE）,麻疹病毒感染细胞,呼吸道合胞病毒感染细胞,形成多核巨细胞或称融合细胞,（1）致细胞病变效应（ CPE）,形成包涵体(inclusion body),（1）致细胞病变效应（CPE）,腮腺炎病毒感染细胞,（2）红细胞吸附（hemadsorption）,病毒囊膜表面血凝素(HA) 红细胞表面HA受体,（3）干扰现象（interference）,风疹病毒猴肾细胞 病毒增殖，CPE(),埃可病毒猴肾细胞 病毒增殖，CPE(),猴肾细胞,风疹病毒 埃可病毒,埃可病毒被抑制，CPE(),（4）细胞代谢改变,2019/8/31,17,可编辑,2. 鸡胚培养 采用孵化914天的鸡胚 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity） 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒,2. 鸡胚培养,优点：易管理，不带微生物，成本较低 缺点：操作程序复杂,3.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒,（二）病毒的鉴定,1.形态学鉴定：电子显微镜 2.血清学鉴定：鉴定病毒种、型、亚型，免疫标记法、血凝抑制试验等。,血凝抑制试验 正粘病毒型与亚型鉴定 病毒鸡红细胞凝集（血凝试验） 病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集 （血凝抑制试验）,（二）病毒的鉴定,3.分子生物学鉴定：抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序,1.血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒） 2.50%组织细胞感染量（50 tissue culture infectious dose, TCID50）测定 3.空斑形成试验（plaque formation test）：空斑形成单位（ plaque formation unit，PFU）,（三）病毒数量与感染性测定,感染性病毒量,三、病毒感染的诊断,（一）形态学检查 电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查：包涵体,三、病毒感染的诊断,（二）病毒成分检测 1.病毒蛋白抗原检测：免疫标记技术 2.病毒核酸检测： 核酸扩增技术、 核酸杂交技术 、 基因芯片技术、基因测序,三、病毒感染的诊断,（三）病毒感染的血清学诊断 中和试验 血凝抑制试验 特异性IgM抗体检测 其他：早期抗原的抗体检测,第二节 病毒感染的特异性预防,生物制品：微生物及其代谢产物、 动物免疫血清、 免疫细胞、 细胞因子。 防治和诊断感染性疾病。,第二节 病毒感染的特异性预防,一、人工主动免疫常用生物制品,灭活疫苗（inactivated vaccine） 减毒活疫苗（attenuated vaccine） 重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine） 亚单位疫苗（subunit vaccine） 基因工程疫苗（genetically engineering vaccine） 核酸疫苗（nucleic acid vaccine）,第二节 病毒感染的特异性预防,二、人工被动免疫常用生物制品,免疫球蛋白：血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂： IFN-、 细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF,第三节 病毒感染的治疗,（一）抗病毒化学制剂 核苷类药物：阿昔洛韦、阿糖腺苷、齐多夫定（AZT） 非核苷类反转录酶抑制剂：奈韦拉平、吡啶酮