课件：药物半数致死量有效量测定.ppt

药物半数致死量（有效量）测定,Determination of 50% lethal (effective) dose of sodium pentobarbital,中山大学 中山医学院 林明栋,【实验目的】,应用随机、重复、对照的实验设计原则，进行设计及测定药物的质反应的量效关系。 掌握测定药物半数有效量（50）和/或半数致死量（50）的方法、原理、实验步骤、计算过程及意义 。 测出药物的50或50及相关参数，认识生物个体差异及评价急性毒性大小的方法。,【实验要求】,1、掌握小白鼠半数致死量或半数有效量测定的基本方法。 2、熟悉动物实验常用的随机分组和实验方法。 3、掌握Bliss 法等半数致死量或半数有效量的计算方法。,【实验原理】,半数致死量（50Lethal dose，简写为50）是指能够导致50%实验对象死亡的药物剂量。 戊巴比妥钠为镇静催眠药，随着剂量加大，相继出现镇静、催眠、抗惊厥、麻醉、死亡。,量效关系与相关概念的示意图,死亡,致死量,质反应量效关系曲线,思考：何意？何用？ 1 . LD50 /ED50的本质 2 . 治疗指数（TI）= LD50 /ED50,Fig.2-3 The frequency curve and cumulative frequency curve of a drug action in a quantal-effect experiment.,质反应量效关系曲线,曲线中实验动物数有50出现阳性结果（反应）所需的剂量，如以死亡为指标称为半数致死量，如以某种效应的有或无则为半数有效量（50Effective dose，50）表示。 50 /50为半数致死量与半数有效量的比值（倍数）称为治疗指数（therapeutic index，TI）。,治疗指数与安全范围,一般而言，治疗指数(TI)是表示药物安全性的指标。该数值越大，表明有效剂量与致死剂量 (或中毒剂量)间距离愈大，愈安全，但只适用于治疗效应和致死效应的量效曲线相互平行的药物，对于两种量效曲线不平行(斜率不同)的药物，还应参考安全范围（margin of safety，MS），即ED95与LD5之间的距离或安全指数SI(SI= LD5ED95)来评价药物的安全性。,质反应实验中，以对数剂量为横坐标、反应百分率为纵坐标绘图，形成一条对称的“S”形曲线。 半数有效量（ED50）：50的实验动物有效时对应的剂量。 半数致死量（LD50）：50的实验动物死亡时对应的剂量。 药物安全性的评价 治疗指数（TI）= LD50/ED50 安全系数（SF） LD5/ED95 可靠安全系数（CSF） LD1/ED99 三者数值大，说明药物安全性好。,质反应量效关系曲线与 药物安全性的评价,实验的观察指标：,50：规定的观察时间内记录动物的死亡数为指标，记录并统计动物的死亡率。 50：以翻正反射消失作为判断动物睡眠的指标。把受试小白鼠轻轻地置于仰卧位，如果在半分钟内不能翻正，即认为小白鼠处于睡眠状态。记录并统计动物睡眠发生率。,【实验试剂与器材】,小鼠罩 重量称 注射器（1.0ml）及针头 戊巴比妥钠 苦味酸（标记动物号用）,【实验方法与步骤】,预试：目的是找到0（min）和100（max）死亡的大致剂量范围。给药量：0.2ml/10g体重。 正式实验：在此剂量范围内安排个对数剂量实验组，便于用对数剂量对死亡数百分率作图和计算数据。 本实验备有：50, 40 ,32, 25.6 ,20.5,16.4 五个剂量组(组间公比=0.8)；昆明小鼠120只雌雄各半。 每个同学做45个连续的浓度，每浓度一只小鼠。 实施：规范操作，观察计时； 分工合作，统一计算,分组及给药,取小鼠50只（ 1822克 ）， 雌雄各半，不同性别动物按体重随机分成五组。每组各动物称重，标记后分别按设计的容积和浓度腹腔注射给药。50（或50 ）测定时是否要设对照组，应视药物性质等情况而定。 必须注意：正式实验如单人操作时宜从浓度偏高的剂量组开始给药！起效快和对后续实验有重要提示作用。思考！,2019/8/31,15,可编辑,观察与记录,记录观察时间内实验动物的症状、死亡（或有效）时间。 整个实验应记录的事项： 日期、药物名称、批号及制药单位、配药的溶剂、药液浓度、给药途径、给药容积及给药剂量、动物名称、性别及体重、实验时室温、给药时间、中毒症状及出现的时间、死亡表现及时间、各组死亡率、计算所得的50 （或50 ）。,预实验结果,40mg/kg 组：(0.2 ml/10g )腹腔注射给药 515分钟内，出现翻正反射消失(睡眠)；,实验分组、记录和统计,如增加记录起效和维持时间，翻正反射消失的深度可获得对量效关系和个体差异的更深刻认识。,Bliss法计算软件界面,Bliss法运算图形结果输出,Bliss法运算数据结果输出,【注意事项】,1. 本实验为定量药物效价测定，要求较高的精确性，在实验过程中要求实验者做到尽可能的精确程度。 2. 为了减少误差，需严格控制除药物剂量外的所有非处理因素，如最好由一人给药。 3. 动物种类、体重范围、给药途径、实验观察时间等因素对50及50的测定结果都有影响，在报告结果时都应加以注明。,国际对动物实验的3Rs原则： 即取代(Replacement)、精致(Refinement)和简约(Reduction)，要求生命科学研究应采取其他手段代替动物实验、改进实验方法、减少动物数量和痛苦，以符合道德方面的考量。 实验设计三大原则：随机、重复、对照 均衡随机法分组：先按易控制的因素（性别、年龄、体重等）均衡分档。 然后在每一档随机取出等量的动物分配到各组，使难控制的因素（活泼程度、饥饱、疲劳程度等）得到随机安排。,【注意事项】,作业：,实验测定的戊巴比妥钠ED50以及上述例子LD50有关数据求出： 治疗指数 TI LD50/ED50 安全指数 SI LD5/ED95 ,【讨论思考】,1ED50或LD50测定的原理是什么？ 2测定ED50或LD50有何意义？ 3为什么以前测定ED50或LD50时各组剂量常按等比级数安排？ 4药物的ED50或LD50测定，新药审批规定采用什么计算方法？为什么？,新药研究规定用Bliss 法,Bliss法又称正规机率单位法或50正规法。Bliss法通过将反应率转化为机率单位，并进行作业校正、加权直线回归、逐步逼近，是目前计算50 最精确的方法。 使用Bliss法有许多优点，如剂量设计不必按几何级数，各组动物数不必相等，最大剂量组死亡率不必为100， 最小剂量组死亡率不必为0。但计算过程复杂， 过去难以推广，现可用计算机程序运算。目前，计算急性毒性实验的半数致死量的软件很多，计算结果精确、简便实用，计算输出结果精细和作图。,实验报告点评：,实验报告点评：,谢谢！,如需联