植物有丝分裂过程的观察.ppt

实验一 植物有丝分裂过程的观察,一、实验目的 1. 学习并掌握根尖或叶片材料处理、染色、压片及制片观察的方法。 2. 观察有丝分裂各时期染色体的形态变化，了解有丝分裂全过程,二、实验原理 有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物根尖或茎尖的分生组织中。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是有规律地进行。各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的，并随科属种的不同而具有一定的特征。,三、实验材料、器具与试剂,（一）实验材料 蚕豆（Vicia faba）根尖。 （二）实验器具 显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、滴瓶、切片架、切片盒、凹面玻片、青霉素瓶、大培养皿、纱布、吸水纸、铅笔、吸管。 （三）药品试剂 卡诺氏固定液（95%乙醇3份，冰醋酸1份）、0.1%秋水仙素溶液；解离液(95%乙醇和浓盐酸等量混合).石碳酸品红的配制:称取0.3克碱性品红溶于10ml70%乙醇中,然后加入90ml5%的石碳酸水溶液,再加11ml冰醋酸和11ml37%的甲醛即成染色有染色液 、1N HCl、95%乙醇。,四、实验步骤 （一）材料准备 选取蚕豆（或小麦、玉米等）种子放在烧杯中，放清水浸泡过夜，使种子吸水胀大后倒出，再用清水洗几次，用多层纱布包好种子，放进2025培养箱内培养。当根尖长13cm 时，即可以进行预处理。 （二）预处理 为利于有丝分裂中染色体的观察和计数，固定之前进行预处理，这样可改变细胞质的粘度，抑制或破坏纺锤丝的形成，促使染色体缩短和分散等。一般在分裂高峰前处理1.5小时以上，方法如下： 秋水仙素水溶液 常用浓度为0.050.1%，室温下处理24小时。对抑制纺锤体活动的效果明显，易于获得较多的中期分裂相，并且染色体收缩较直，有利于对染色体结构的研究。,（三）固定 通常采用的是卡诺氏固定液。目的是用化学的方法把细胞迅速杀死，使蛋白质变性，并尽量保持原来的分裂状态，同时更易于着色。固定时，将根尖投入固定液中室温处理324小时。材料若不及时用，可经过90%酒精和70%酒精浸洗一次，再换入新的70%酒精中，置于冰箱内04保存备用。 （四）解离 目的是使分生组织细胞之间的果胶质层解掉，并使细胞壁软化，便于压片。解离的时间视根尖的粗细老嫩不同而有差异。方法是：将固定后（或保存后）的根尖分装到青霉素小瓶子内，用清水洗几次，吸干水，加入1N HCl溶液，在60下水解820 min（洋葱用8min，蚕豆侧根用10min，玉米用20min），解离成功的根尖，分生组织发白，伸长区已呈半透明，似烂状。解离后的根尖用水轻洗23次，以利于着色。 （五）染色、压片 将解离后的根尖放在凹面玻片内（根尖较长的切除伸长区部位），滴加改良苯酚品红染色液染色10分钟左右。制片时，取一根尖放在洁净的载玻片上，用刀片切取1mm左右的生长区，其余部分弃掉，加半滴染色液，加盖玻片。用镊子在材料的地方轻压几下，使生长区的细胞分散开来，再在盖玻片上覆盖一层吸水纸，用解剖针或铅笔上的橡皮头敲击根尖部位，重复几次，力一次比一次大，以盖玻片不破裂为准。 （六）观察 将制好的标本片，置于显微镜下先作低倍观察，选取不同分裂时期的典型细胞，换高倍镜