自动生化分析仪分析技术人卫.ppt

卫生部“十二五” 规划教材 全国高等医药教材建设研究会规划教材,南方医科大学 曾方银 中南大学湘雅医学院 唐爱国,学习要求,了解自动生化分析仪的分类及系统完整性的要求,熟悉自动生化分析仪的分析原理、分析技术,掌握自动生化分析仪的日常操作、性能检定,第一节 自动生化分析仪概述,自动生化分析仪的发展 分立式自动生化分析仪的分析原理 干式自动生化分析仪的分析原理 全自动化实验室构建,一、自动生化分析仪的发展,按照反应装置：连续流动式、离心式、分立式和干片式 按照测定项目：单通道和多通道 按照自动化程度：全自动和半自动 按照仪器的复杂程度：小型、中型、大型及超大型 按照程序可否更改：程序固定和程序可变型,自动生化分析仪的分类,二、分立式自动生化分析仪,顺序分析示意图,分立式自动生化分析仪的基本结构,样品处理系统,样品架与试剂盘：圆盘状、传送条带状、轨道式及链式进样 加样装置：定量吸量器与加样针 混匀装置：搅拌混匀与超声混匀,检测系统,1.光路系统,前分光光路,后分光光路,分光装置,比色杯,硬质石英玻璃 硬质玻璃 丙烯酸塑料 光径0.51cm，自动冲洗备用,恒温装置,干式（空气浴式） 水浴循环式 恒温液循环间接加热式,工作原理 多层薄膜固相试剂技术 测定方法：反射光度法、差示电位法,干化学式自动生化分析仪,干化学式自动生化分析仪,分类： 反射光度法技术分析仪 胶片涂层技术分析仪 袋式分析仪,干片试剂结构示意图,全自动化实验室构建,前处理系统 标本运送系统 样本分析系统 实验数据/结果处理系统（包括LIS系统） 样本保存系统和计算机硬件,一、生化分析仪常用分析方法 终点分析法（平衡法） 固定时间法 连续监测法 比浊测定法,第二节 自动生化分析仪的分析技术,一点终点法,(一) 终点分析法（平衡法）,两点终点法,A,A1,A2,(二) 固定时间法,（三）连续监测法,(一) 波长的选择原则 待测物质在该波长下的光吸收最大 其吸收峰宜较宽而钝 常见干扰物在该波长下的光吸收最小,二、分析参数设置,单波长 双波长 多波长,波长的选择,有25、30、37三种温度 一般固定为37,温度的选择,最小反应液总体积为80500l SVF=Vs/Vt SVF越大，线性范围越窄，但灵敏度越高 随意改变SVF不尽可靠，尤其是酶活性测定,样品量与试剂量,试剂的选择,单试剂法 双试剂法,其他参数设置,测定方法的选择 分析时间的选择 线性范围的选择 校正方法的选择：一点、两点、多点,三、生化分析仪的校准,校准品：配套校准品、第三方校准品 酶活性测定的校准：理论K值与校准K值 校准频率：更换试剂(批号)、重要仪器部件的保养维护和更换、质控结果失控及其它纠正措施无效时、每6个月,计量部门对仪器进行的计量学检定或校准,波长 反应温度 加样(试剂和样本)精度 吸光度准确性(半峰宽) 基线漂移,一、安装及使用前准备 （一）工作环境 周围有足够空间，避免阳光直射，防尘、烟雾和振动 电源电压波动应小于10%，可靠接地 电源频率、功率应符合要求，应使用UPS 远离强烈电磁场 温度1832之间（波动小于2），湿度40%80%之间；空调出风口不宜直对仪器,第三节 自动生化分析仪的日常操作,（二）实验用水,超纯水一般要求电阻率10 M-cm 总有机碳（TOC）应50ppb 使用0.5m或更细的滤膜过滤除菌，细菌水平5cfu/ml 干扰元素越少越好,仪器简介 仪器的工作原理 仪器工作环境要求 授权操作人 开机程序 室内质控程序 常规样本检测程序 样本检验结果的处理程序 工作后保养与关机程序 其他支持性文件：如校准程序、维护与保养程序等,（四）操作程序文件的主要内容,二、基本操作步骤,仪器自检 加试剂、取样和混匀 保温反应与吸光度检测 计算、显示或打印结果,（一）操作前检查,检查试剂注射器、样品注射器等有无渗漏 检查纯水是否正常或足量、各种清洗剂是否足够 检查各项分析试剂是否充足、 检查试剂针、加样针等是否需要特别清洁处理 检查样品运行通道是否通畅无障碍,（二）质控品测定,检测频率：每批次 质控品个数：单、双、三水平 质控规则：出现12s为警告，出现13s、22s、R4s、41s、10x为失控,（三）患者标本的测定,项目录入： 手工录入：逐项录入，组合项目录入， 批量录入 条形码识别 急诊优先检验,三、主要的维护保养,1.每天维护 检查样品针、试剂针、搅拌棒有无明显磨损，位置是否正确，需否特殊清洁 添加或更换试剂 添加清洗剂 清洗ISE单元：用CLEAN液 执行每日清洗程序，然后关机,2.每周维护,执行比色杯清洗程序对比色杯进行清洗 对比色杯进行空白吸光度检查，了解透光性的改变情况 清洗样品探针、试剂探针、搅拌棒、电极管道 清洗恒温水槽,3.每月维护,对清洗装置本身、纯水桶、供水过滤器、散热器过滤网等进行清洗 清洗电极模块,4.不定期维护,检查进样注射器是否需要更换、各冲洗管路是否畅通、各机械运转部分是否工作正常 彻底清洗比色杯和比色杯轮盘，检查比色杯是否需要更换 更换光源灯 更换样品探针和试剂探针、搅拌棒 更换电极、蠕动泵管,一、生化分析仪的性能检定 1.杂散光 50g/L亚硝酸钠溶液直接加入比色杯，测定波长340nm的吸光度 * 吸光度应不小于2.3,第四节 自动生化分析仪性能检定与统完整性,2温度准确度测定,比色杯中加入500l去离子水，温度稳定，测温仪每隔30s读数一次，连续20次。求出平均温度和20次中最大值与最小值之差-波动度。 * 温度应在设定值的0.3内，波动度不大于0.2,3吸光度线性范围检定,将色素原液稀释成11个浓度梯度，各梯度液重复测定5次吸光度，计算平均值。以稀释比例为横坐标，吸光度平均值为纵坐标，画出散点图，用最小二乘法先对前4个点进行线性拟合，并计算511点的相对偏倚。 * 各测定值的相对偏倚在5%范围内的最大吸光度应不小于2.0。,4吸光度稳定性检定,340nm吸光度为0.5的重铬酸钾标准溶液，600nm700nm波长范围内任一波长的吸光度为0.5的硫酸铜标准溶液。设定最小试剂量、最小样本量，最长反应时间或10min，读数间隔为仪器的测定周期或30s，测定上述溶液的吸光度值 * 最大与最小值吸光度之差应不大于0.01,5.吸光度准确度检定,以蒸馏水空白，340nm处吸光度分别约为0.5和1.0的重铬酸钾标准溶液，重复测定3次，计算3次测量的算术平均值与标准值之差 * 吸光度为0.5的允许误差为0.025，吸光度应为1.0的允许误差应为0.07,6吸光度重复性检定,吸光度为0.5的重铬酸钾标准溶液同时作为样品和试剂，加入量为分析仪标称的最小反应体积，反应时间为分析仪最长反应时间或10min，340nm连续测定20条反应曲线的最后一个读点的吸光度值 * 该吸光度的变异系数CV应不大于1.5%,7试剂加样精确度与重复性检定,采用称量法：恒温、恒湿的实验室内，带盖容器在高精度电子天平调零。控制试剂针或样本针往该容器中加入规定量除气蒸馏水，盖盖再称重。每种规定加入量重复称量20次，求出实际加入量(l)，计算加样误差 * 仪器的最小、最大试剂加样量，准确度误差应不超过%，变异系数应不超过2%。,8.样品加样准确性与重复性检定,称量法 比色法,9样品携带污染率检定,以去离子水为试剂，以高浓度orange G原液和去离子水为样品，样品的加入量为分析仪最大样品量，按照原液、原液、原液、去离子水、去离子水、去离子水的顺序为一组，测定上述样品反应结束时的吸光度，共进行5组测定，按照相应公式计算携带污染率 * 5组的平均携带污染率，其值应小于0.5%,10临床项目批内与批间精密度检定,双水平质控血清，测定不同的检测项目采用某种试剂时的批内与批间平均值、SD值及CV值。 不同项目不同浓度水平的CV有不同要求,二、生化分析系统的完整性和有效性,（一）生化测定结果的量值溯源 生化分析系统的概念 一个完整和有效的生化分析系统，是指生化分析仪、试剂、校准品、及相关的操作程序、质量控制程序、设备维护程序等的组合；若是手工操作，还包括具体的操作人员。,生化分析仪的测定结果的溯源性,（二）保证生化分析系统的完整性与有效性的方法,分析系统的性能核实（demonstration） 分析系统的性能确认（validation or verification） 分析系统的性能评价（evaluation）,小 结（1）,自动生化分析仪是临床生化检验最常用的设备，目前以分立式最为普遍。现代生化分析仪已能达到很高的精度。既可采用比色杯作为反应和检测的载体，也可采用干片试剂进行检测，还可采用透射比浊法测定更加微量的标志物。 两点终点法结合双波长测定等能有效消除样品溶血、黄疸和脂浊等造成的光吸收干扰。连续监测法以时间-吸光度曲线中线性反应期的单位时间内吸光度变化值（A/min）乘以K值来计算结果，采用校准K值常优于理论K值和实测K值。,小 结（2）,分析仪的基本参数设置包括试验名称、分析方法、主波长、次波长、样品量、R1量、R2量、稀释液量、读数时间、线性范围、校准参数和质控参数