用ModFit软件分析DNA倍体和细胞周期.ppt

DNA倍体和细胞周期分析,细胞周期和DNA倍体分析的原理,1、正常细胞DNA含量稳定在2C水平,2、性细胞DNA含量为1C,3、处于增殖期至分裂期细胞由 2C增加至4C,4、凋亡细胞DNA断裂,含量2C,细胞经荧光染料(碘化丙啶，PI)染色，用流式细胞仪测定细胞DNA含量，可得到细胞周期三个时相(G0/G1、S和G2/M期)的DNA含量（），可以反映细胞的增殖状态和非二倍体（异倍体）的DNA含量,Diploid: 100.00 % Dip G1: 54.38 % at 46.90 Dip G2: 15.91 % at 91.61 Dip S: 29.71 % G2/G1: 1.95 %CV: 5.23,G0/G1,S,G2/M,DNA检测的常用术语,表示流式分析中DNA含量的分辨率或精确度。 通常由G0/G1峰的CV来反映【 %CV=（SD/mean）x 100】。 影响CV的因素主要包括两方面：仪器因素（如液流、光路、机器调试等）和样本制备及染色过程对标本的人为影响。,1. 变异系数（Coefficient of Variation，CV）,DI指的是肿瘤样本G0/G1峰的平均道数与人正常二倍体G0/G1峰的平均道数之间的比值。 DI为1 意味着二倍体（2c）（一般正常范围为0.91.1）。 倍体（Ploidy）：原指染色体数目。流式中用来描述总的DNA含量。 二倍体细胞有正常细胞的DNA含量但不除外染色体异常。 DI为1.9-2.1 的细胞为四倍体（CV为5%时）。在二倍体和四倍体区域之外的统称异倍体。,2. DNA指数（DNA index，DI）和倍体（Ploidy）,DNA检测的常用术语,结果分析,CellQuest、WinMDI等软件均可以进行分析，但需要手工进行参数统计和计算； 推荐使用ModFit分析软件（分析如下：） 1、打开软件； 2、在FL2-W/FL2-A散点图中设定单个细胞门（R1），去除聚集细胞，必要时可以设两个门。 3、在FL2-A直方图中显示R1中细胞的DNA含量直方图 注：该软件可以自动分析，也可手动分析；可以分析凋亡、异倍体、各期比例等；结果均自动计算。,ModFit分析,ModFit分析,ModFit分析,ModFit分析,ModFit分析,ModFit分析,File analyzed: qq.003 Date analyzed: 3-Jun-2009 Model: 1DA0A_DSF Analysis type: Manual analysis Diploid: 100.00 % Dip G1: 63.02 % at 44.61 Dip G2: 18.55 % at 86.71 Dip S: 18.44 % G2/G1: 1.94 %CV: 6.12 Total S-Phase: 18.44 % Total B.A.D.: 5.45 % Apoptosis: 15.11 % Mean: 19.05 Debris: 6.04 % Aggregates: 1.72 % Modeled events: 2775 All cycle events: 2166 Cycle events per channel: 50 RCS: 6.238,ModFit分析,ModFit分析,【重要参数】,DI（DNA指数, 判断倍体数）=（标本G0/G1期细胞峰的平均荧光道数）/（正常二倍体细胞G0/G1期细胞峰的平均荧光道数） PI(增殖指数, 表示细胞的增殖活性)（%）（S + G2M）/（G0/G1 + S + G2M）100% SPF(S期细胞比率, 表示细胞的增殖活性)（%）= S /（G0/G1 + S + G2M）100%,【倍体和细胞周期分析】,发现DNA异倍体(二倍体峰DI1.1 或2.1 或15%的S期细胞，并伴有G0/G1峰的CV9%，提示为肿瘤或增生旺盛的病变 ； 如无明显异倍体，但G0/G1峰的CV增大，并伴有10% 15%的S期细胞和一个突出的4倍体峰，诊断为可疑肿瘤或增生旺盛的病变。,发现癌前病变，协助肿瘤早期诊断 在肿瘤的诊断、预后判断和治疗中的作用 在指导肿瘤化疗中的作用,【临床意义】,乳腺癌DNA异倍体患者生存率,乳腺癌肿瘤细胞异倍体患者长期生存率显著下降,【临床病例】,Diploid: 46.75 % Dip G1: 97.54 % at 46.06 Dip G2: 0.58 % at 92.12 Dip S: 1.88 % G2/G1: 2.00 %CV: 2.26 Aneuploid 1: 47.55 % An1 G1: 93.05 % at 49.83 An1 G2: 0.00 % at 99.67 An1 S: 6.95 % G2/G1: 2.00 %CV: 2.13 DI: 1.08 Aneuploid 2: 5.70 % An2 G1: 94.97 % at 55.72 An2 G2: 5.03 % at 103.44 An2 S: 0.00 % G2/G1: 1.86 %CV: 4.52 DI: 1.21,AL 骨髓,Diploid: 64.50 % Dip G1: 92.45 % at 49.24 Dip G2: 2.30 % at 98.48 Dip S: 5.26 % G2/G1: 2.00 %CV: 3.21 Aneuploid 1: 35.50 % An1 G1: 97.69 % at 58.53 An1 G2: 0.00 % at 123.89 An1 S: 2.31 % G2/G1: 2.12 %CV: 3.14 DI: 1.19 Total Aneuploid S-Phase: 2.31 % Total S-Phase: 4.21 % Total B.A.D.: 0.35 % Debris: 1.14 % Aggregates: 0.00 % Modeled events: 3567 All cycle events: 3526 Cycle events per channel: 47 RCS: 2.356,MM 骨髓,宫颈脱落细胞,Diploid: 97.61 % Dip G1: 97.74 % at 49.78 Dip G2: 0.02 % at 99.57 Dip S: 2.25 % G2/G1: 2.00 %CV: 6.49 Aneuploid 1: 2.39 % An1 G1: 84.90 % at 75.79 An1 G2: 15.10 % at 109.99 An1 S: 0.00 % G2/G1: 1.