气相色谱法在中国药典中的应用.ppt

气相色谱法（GC）在2019版 中国药典中的应用,孙仁爽 单位：通化师范学院 电话QQ：804590217,一、气相色谱仪的配置,气源的配置 配FID检测器需购买N2、H2和Air三种气体。 提供气体两种方式：钢瓶（需提前准备好）和气体发生器（购买仪器的时候从厂家订购）。钢瓶纯度高，但氢气钢瓶易泄露发生危险，可购买氢气报警器或放室外小房子。发生器气体纯度稍低，安全性高。通化购买不到高纯气体，一般到长春购买。标配为氮气用钢瓶，氢气和空气用发生器。目前有氮氢空一体机，FID和TCD可满足要求，ECD达不到要求。 气体净化装置：脱氧管、脱水管、脱烃管。 进样系统：包括样品引入装置和气化室（进样口）。 样品引入装置：10uL微量注射器、自动进样器和顶空进样器（做溶剂残留、树脂残留需配置）。 进样口：标配为前进样口为填充柱进样口、后进样口为分流不分流进样口。,柱子的选择（填充柱和毛细管柱） 根据标准要求购买，购买的时候明确柱子型号最好，毛细管柱主要为聚硅氧烷类和聚乙二醇类。开发新方法时，首选非极性固定相，柱效高，对氧不敏感、最高使用温度高、柱寿命长优点。 检测器 标配为I（大多数有机化合物）/TCD（微量水分测定）和CD（有机氯农残）。氮磷检测器（有机磷农药残留方法已被05药典附录收载，但具体品种的检验尚未开展） 工作站：厂家自带工作站，可要求厂家安装。N2000。 通化师范学院有气相、顶空、分流、农残检测器，药典标准要求的气相条件已完全具备，可以委托做样和开发方法。,仪器标准配置,气源：氮气钢瓶、氢气发生器和空气发生器。 净化装置：无ECD可不配。 进样口：填充柱进样口和分流/不分流进样口 样品引入装置：手动进样器（10uL）和顶空进样器 柱子：根据标准要求。 检测器：FID和ECD（农残） 工作站：厂家工作站或N2000,需要购买仪器的情况 无气相色谱仪：一般为委托检验。 建议：根据样品和药典、局颁标准和企业标准按标配配齐，节省成本。 现有标准无法满足标准要求如有GC，未配置分流不分流进样口和顶空、ECD， 建议：对仪器进行升级。 任务重，GC不够用。建议：买同型号（可替换）或不同型号（方法学验证）均可。,二、合格的GC操作者应具备的知识,1. 保管好安装光盘和说明书，熟悉配件。 2.使用纯度合乎要求的气体，防止检测器和柱子被污染。 购买要告诉气体生产厂家要五个9气体或高纯气体。填充柱以FID为检测器也可以用四个9气体。气体剩下0.2Mpa就不要再用，如果有管路泄露或气体用尽，钢瓶易被污染，灌装前需净化处理，需要几百元费用，而一瓶气体一般价值几百元，因此定期用肥皂水做泄露检查。,3.使用性能可靠的二级减压阀（氧气表） 。气体发生器不需要，一般需药厂自己准备好，避免工程师调试的时候无法安装，要求高，一般在外地购买，氧气表右边的表显示钢瓶气体压力，左边表显示减压输出后气体压力。 4.定期更换气体净化器填料（气源与仪器之间，配ECD检测器最好配置）变色硅胶变红时需要活化，140加热2h。分子筛等吸附有机物的净化器就不好用肉眼判断了，须定期更换。空气压缩机有机杂质高一些，最好3个月更换一次，马福炉400600加热4-6h。,5.会测定气体的流速和计算分流比 气体的流速单位一般用mL/min表示，一般用皂膜流量计测定。氢气的流速30-40之间，空气的流速一般在300-400之间，载气的流速根据样品和色谱柱的种类决定，测完氢气、空气、尾吹气的流速减掉载气流速。隔膜吹扫（用途）一般是1。尾吹气（用途）是20-30之间。分流出口流量根据需要测定。分流比=（分流出口流量+柱流量）/柱流量。氮气：氢气：空气=1:1:10FID灵敏度最高。 6.进样口的维护 能更换进样口隔垫、清洗进样口衬管（玻璃毛）、衬管上端的O形硅橡胶密封圈、清洗分流平板。,每6-12个月或当指示型捕集阱颜色改变时 更换时间取决于捕集阱的容量与气体纯度,每1-2年校准一次,每3个月 当发现注射器中有明显的清洗不掉的污染物, 或推杆难以抽动, 或当推杆粘连时, 或进样口隔垫穿刺出现异常, 或当针头被堵塞时,每60针样品 裂口, 进样口衬管内有碎屑, 保留时间偏移, 柱压降低等等,每月 与衬管一起更换, 或视磨损情况更换,每周 经常检查, 当衬管内有可见的污染物或色谱性能下降时更换,每月 经常检查, 当有划痕, 腐蚀或非挥发性组分造成堵塞, 污染时更换,每次更换色谱柱, 进样口/检测器部件时更换,GC消耗品更换时间表,7. 及时清洗注射器，取样的时候会排气泡，注射速度越快越好，且每次注射的过程重现性要好，取样之前用溶剂洗3次（每次抽满2/3），样品溶液洗3次，然后取样。 8. 会更换柱子（插入进样口和检测器的深度，用换下的隔垫插到柱子上。换下的柱子堵上盲堵，第一次没有方向，一般让牌子从正面看到，用过一次就有方向）。,柱子安装 进样口端使色谱柱穿过垫圈伸出4-6mm，把隔垫向上滑到柱螺帽将柱插入进样口，把柱上的螺帽和垫圈向上滑到进样口底部，用手拧紧柱螺帽至柱固定，调节色谱柱的位置，使柱上隔垫正好在柱螺帽底部扳手拧紧1/4-1/2圈。 检测器一端：将柱螺母和垫圈插入到检测器接头底部，接头用手拧紧，再将柱子下拉1mm，扳手拧紧-1/4圈，检漏。 （液相柱区别）,切割柱子、切割铜管，及时更换毛细管柱密封垫。安装完色谱柱做泄露检查，尤其是连检测器的一端。准备一份色谱柱测试标样，做柱效测定，看色谱柱是否合格以及确定问题是否在色谱柱。柱子牌子信息：长度、内径、固定液厚度、温度范围。柱子的老化（40-50/10/min升至最高使用温度2-3h，不连接检测器，不用氢气作为老化载气。何时老化？新柱子和长时间未用的柱子或色谱峰异常）。老化目的除去填充物中残留挥发性成分，并使固定液再一次均匀牢固地分布在载体表面上。,9.检测器的维护 点火线圈的更换、喷嘴的清洗、注意不要烫伤。开机先开载气，检测到柱子流量后再升温，否则将破坏柱子和检测器。FID检测器温度达到150度才能点火，判断是否已经点着火。关机是先关氢气和空气，再降温度，最后关载气（保护检测器和柱子）。热导检测器注意通电之前，确保载气通过了检测器，否则，铼钨丝易被烧断。关机先关检测器电源，然后关载气。注意铼钨丝易被氧化。电子捕获注意放射性危害，不允许自己拆卸，厂家工程师或专业人员，ECD出口排到室外。,10.会数据处理 内标法（内标校正因子法和内标工作曲线法） 可消除进样量不准确误差，GC进样量一般为1uL，液相是10uL、20uL，GC更易出现进样误差，自动进样器准确度可满足要求，手动进样最好用内标法定量。需要内标物。,广藿香,注意结果要求：mg/g、每片含、标示百分含量,对照品溶