溶出度方法的选择及验证.ppt

溶出度,概念与适用范围 溶出度方法的建立 影响溶出度的因素 溶出度的比较 问题,溶出度概念： 指制剂（片剂、胶囊剂或颗粒剂等固体制剂）中有效成分在规定介质中溶出的速度与程度。 是反映制剂生物有效性的体外测定方法。,适用范围 溶解度在微溶以下的药物 溶解度虽在略溶以上，但处方与工艺造成阻溶的制剂 治疗剂量与中毒剂量接近的制剂 缓释制剂、控释制剂、肠溶制剂、透皮贴剂等 易溶于水或极易溶于水的药物，也应考察溶出度 标准中未列溶出度项：如果全部企业样品均在15分钟内溶出85以上，则可以不将溶出度列入标准 标准中已列溶出度项：不要轻易删除溶出度项,体内外相关性 溶出度体外药物指标成分的溶出方法 生物利用度体内血药浓度，尿药浓度法,概念和适用范围 溶出度方法的建立 影响溶出度的因素 溶出度的比较 问题,中、美、英、日四国药典收录情况,凡检查溶出度的制剂，不再进行崩解时限的检查。 第一法 转篮法 第二法 搅拌桨法（浆法） 第三法 小杯搅拌桨法（小杯法）,第一法 转篮法,除另有规定外，量取经脱气处理的溶剂900ml，注入每个操作容器内, 加温使溶剂温度保持在370.5，调整转速使其稳定。取供试品6片(个),分别投入6个转篮内，将转篮降入容器中，立即开始计时，除另有规定外，至45分钟时，在规定取样点吸取溶液适量，立即经不大于0.8m微孔滤膜滤过，自取样至滤过应在30秒钟内完成。 取滤液，照各药品项下规定的方法测定，算出每片(个)的溶出量。,转篮分篮体与篮轴两部分， 均为不锈钢金属材料制成。 转篮旋转时， 摆动幅度不得超过1.0mm。,适用范围 胶囊、丸剂、片剂 漂浮的制剂 转篮与转轴：不锈钢或其他隋性材料 溶出杯：硬质玻璃或其他隋性材料 先降转篮，再开电机,优点 应用广泛 装置简单、成熟 缺点 制剂在篮中的位置对测定有影响 篮下流体力学死区 逸出气体对测定有影响 粘性物质易堵塞网孔 自动化比较困难,第二法 搅拌桨法,溶剂处理同第一法。取供试品6片(个),分别投入6个操作容器内，立即启动旋转并开始计时，其它同第一法测定。 用于胶囊剂测定时，如胶囊上浮，可用一小段耐腐蚀的金属线轻绕于胶囊外壳或装入沉降篮(呈圆柱形，内径为12mm，长25mm，由10根不锈钢丝(丝径为1mm0.1mm)焊接而成。周围以间隔为3.5mm的不锈钢丝螺旋缠绕，上下两端以2根不锈钢丝十字形固定，一端可开关 。,首选方法 先降浆，再投药，后开电机 适用范围 片剂、胶囊、丸剂,优点 广泛应用，适用性强 易于自动化 缺点 流体动力学复杂，制剂在 杯中的位置（下沉或漂浮） 影响药物溶出 桨底易形成“锥形堆积” 漂浮制剂不适用 对搅拌桨和溶出杯几何尺寸的精度要求较高，搅拌轴方向的微小改变会引起溶出结果的明显偏离,由不锈钢金属材料制成。 旋转时摆动幅度A、B不得超过0.5mm。,第三法 小杯搅拌桨法,除另有规定外，量取经脱气处理的溶剂100250ml注入每个操作容器内，以下操作同第二法。,适用范围 小剂量的片剂、胶囊、丸剂 仅供UVVIS测定 HPLC测定应采用篮法或桨法,流池法,桨碟法,方法建立过程,1、明确溶出度的目的 2、主药和辅料性质 3、溶出介质的选择 4、溶出仪器的选择 5、转速的选择 6、方法学的验证 7、溶出曲线的绘制,1、确定测定溶出度的目的,仿制：与被仿药物一致 创制：明确期望的溶出速率 急救药：数分钟内迅速溶出，如：硝酸甘油片 抗生素：根据抗生素后效应，采用脉冲给药，快速溶出，使血药浓度迅速达MIC或MBC，减少不良反应，减少微生物变异； 如：-内酰胺类、大环内酯类、氟喹诺酮类 抗生素一般不推荐缓释剂型 普通降血压、降糖制剂：先快速，后中低速 治疗慢性病的药物：慢速、恒速 缓释剂型：先快速，后恒速,1、确定测定溶出度的目的,确定溶出条件 仿制：与被仿药物标准一致 创制：研究选择方法 溶出条件、介质、含量测定方法 结果分析 仿制：溶出曲线比较 创制：确定取样点数、取样时间与溶出限度，进行体内外相关研究,2、主药和辅料性质,一是药物在不同pH条件下的溶解度，或在不同介质中的溶解度，二是药物在溶液状态下的药物的稳定性,2、主药和辅料性质,漏槽条件 漏槽条件是指药物所处释放介质的浓度远小于其饱和浓度，一般释放介质的体积为药物饱和溶液所需介质体积的37倍。 漏槽条件即做溶出的最佳条件,3、溶出介质的选择,溶出介质的选择部分是根据药物溶解度和制剂规格确定的，以保证符合漏槽条件 溶出介质首选水 ，其次是0.1mol/L盐酸、缓冲液（pH值38）、人工胃液或人工肠液；若介质中加适量有机溶剂如异丙醇、乙醇或加分散助溶剂如十二烷基硫酸钠（0.5%以下）等，应有文献依据，并尽量选用低浓度。,3、溶出介质的选择,对于普通口服制剂的溶出行为考察需在pH1.26.8范围内进行。在方法的建立阶段，尚有必要对溶出前后的pH是否发生变化进行检查。,对于药物可以在胃部快速溶解和通透性高的，胃排空时间可能是吸收的限速步骤，对于这类药物，溶出度检查主要是证明药物在胃液条件下可以快速溶出。 对于药物主要在肠道溶出的，如难溶性药物、弱酸，选择较高的pH范围（如pH6.8的人工肠液）可能是适宜的介质。,水最常用，良好脱气水的pH值为5.07.0 适用于溶解度对pH值不敏感的药物,盐酸溶液模拟酸性胃液的介质 适用于酸中稳定的药物 浓度一般为0.10.01mol/L，pH值一般为1.02.2,醋酸盐缓冲液模拟中等酸性胃液的介质 浓度一般为0.05mol/L，pH值一般为3.46.0 醋酸易挥发，导致pH值变化，溶出速率变化、测定时间长的药物不宜采用醋酸盐缓冲液作介质,磷酸盐缓冲液(PBS)模拟中等酸性至弱碱性胃液或肠液的介质 浓度一般为0.05mol/L，pH值一般为4.57.6,介质的pH值 原则：根据体内吸收部位的pH值环境 药物溶解度对pH值的敏感性 药物的稳定性来选择介质的pH值 胃的pH值范围：1.27.6 十二指肠为3.16.8 小肠为5.26.0 胃内快速溶解并快速吸收的药物，选择低pH值，如盐酸溶液 肠道溶出的药物，一般选择较高pH值，如pH值6.8的PBS,介质的pH值 介质的pH值一般不超过7.6 如需使用更高pH值的介质，则应进行验证，证明其体内外溶出的相关性 肠溶制剂：建议先用酸性介质，然后添加适宜温度的缓冲溶液，再用酸或碱调节至所需的pH值 该法的优点是操作简便、易于自动化，但应注意调节pH值时产生热对介质温度的影响,表面活性剂 不建议添加表面活性剂 必须加时：一般应 0.5 常用的表面活性剂：聚山梨酯2080、十二烷基硫酸钠等 推荐：聚山梨酯2080，表面活性类似胃液 日本：表面活性剂只允许使用吐温，不得用有机溶剂,3、溶出介质的选择,大杯法（第一、二法）常用体积 为5001000ml 小杯法（第三法）常用体积 为100250ml,4、溶出仪器的选择,转篮法常用于胶囊，也可用于片剂； 桨法常用于片剂，也可用于胶囊； 对于小规格制剂的溶出度检查，可考虑选用小杯法，介质体积可选择200ml； 对于片剂或胶囊溶出过程中转篮筛网被堵塞的，溶出度检查建议改为桨法 ； 漂浮的制剂选转篮法。,5、转速的选择,各国药典中收载的溶出度测定方法中的转速，大部分在50100转/分。转篮法以100转/分为主；桨法以50转/分为主，小杯法以35转/分为主。 转篮法100转/分 桨法50转/分 小杯法35转/分,6、方法学验证内容,溶出度测定常同含量测定，采用HPLC、UV方法。 以下情况需重新方法学验证 测定所用的溶剂（溶出介质）不一致 测定浓度与不一致 测定制剂为胶囊剂或需去除糖衣、薄膜衣后测定含量的片剂，则均需重新进行溶出度测定方法验证。,6、方法学验证内容,回收率 精密度 专属性（辅料、胶囊壳等的干扰试验） 线性 耐用性,6、方法学验证内容,回收率（范围不同于含量测定法） 高、中、低常设为50、限度浓度、100,6、方法学验证内容,专属性胶囊壳干扰 UV法，如空胶囊干扰大于标示量的25%，实验无效，如干扰不大于标示量的2% ,可忽略不计。 取6粒空白胶囊壳进行试验，工作量大，且由于干扰不一，会给测定结果带来误差。 故空胶囊干扰较大时，采用HPLC法测定。,7、溶出曲线的绘制,均一性试验（ 考察同一批样品的溶出曲线） 重现性试验（ 考察至少3批样品的溶出曲线） 可间隔15分钟取样，或间隔5或10分钟取样，以产生足够的样本量，直至药物溶出85%以上或达到溶出平台，得到完整的溶出曲线,7、溶出曲线的绘制,对于溶出度检查10min或更靠前的时间点的各溶出数据的RSD大于20， 以及在其后的时间点的溶出数据RSD大于10，溶出结果就可以被认为具有高度变异性。,溶出结果的高度变异性使得处方、工艺等变化对制剂质量的影响无法进行测定和评估。 产生这种变异的原因可能有两种，一是制剂处方自身的原因，二是与溶出度检查方法有关的原因，如直接崩解后形成堆积物或片剂黏附于容器壁上等。,释放度,缓释制剂、控释制剂第一法 3个取样点 取样后补充相同体积液体,释放度,因为人体整个胃肠道系统pH值的复杂多变性，故对一种缓释产品或两种缓释产品进行体外释放行为的评价时,需采用三种以上不同pH值介质，常选用的pH介质为pH1.0、pH5.4、pH6.0和pH7.4。,硝酸异山梨酯缓释胶囊的限度 本品每粒在0.5小时、2小时和8小时时的释放量应分别为标示量的30%以下、30%65%和70%以上。,释放度,肠溶制剂第二法 酸中释放量 缓冲液中释放量 有些需测耐酸力,概念和适用范围 溶出度方法的建立 影响溶出度的因素 溶出度的比较 问题,影响溶出度测定的因素,1.仪器因素 1.1 仪器的工作环境 环境温度、气流、强光 处理方法：置无强光照射、气流稳定的位置 振动 振动的能量使样品溶出速率增加 振动频率50100 Hz时，影响较大 当仪器振动位移为0.025毫米时，溶出增加510 处理方法：远离振动源、底脚加减振海绵或橡胶隔垫,影响溶出度测定的因素,1.仪器因素 转轴的晃动 篮法：晃动在2.05.0mm时，水杨酸和泼尼松校正片溶出比晃动在2.0mm时增加5 桨法：晃动在1.02.0mm时，水杨酸和泼尼松校正片溶出比晃动在0.5mm时增加8和5 处理方法： 检测转轴杆的准直度 转轴杆实行双点固定 转轴杆应垂直挂放，不得横放，防止变形,影响溶出度测定的因素,1.仪器因素 仪器的水平度、转杆的垂直度 杯边高1mm，溶出量增加约3% 转杆倾斜 25，溶出量增大225% 处理方法：用水平尺调正杯板水平；用直角尺验证转杆与杯板垂直度 转杆与溶出杯中心度 中心偏离1mm，溶出量约增加3% 偏离2mm，约增加8% 处理方法：用中心盘调正转杆与溶出杯的中心,影响溶出度测定的因素,1.仪器因素 搅拌速度 速度快溶出快 允差4 转杆、桨叶、网篮的溶出干扰 桨杆、叶、篮在介质中溶出，带来低波长（200-230nm）处的吸收干扰 处理方法：镀钛，316L不锈钢，涂膜,影响溶出度测定的因素,1.仪器因素 篮轴盘排气孔无法排气，使溶出量大幅下降 处理方法：确保篮轴盘小孔通畅；转篮旋转着进入溶出介质；清洗篮轴盘：用 10% 稀硝酸煮沸或超声10分钟左右，再改用水或乙醇煮沸（应在水浴中）1015分钟左右 转篮干湿的影响 湿的篮体会使供试品提前接触到溶出介质，可能使溶出增加 处理方法：2005年版药典专门增加规定：用干燥的转篮，这在连续测定多批样品时应引起注意,影响溶出度测定的因素,2.介质的影响 介质的pH值 影响药物的溶出度 影响药物的吸收系数 影响药物的稳定性 水的pH值不确定性 泼尼松校正片(FDA 10mg片)以pH为6.0、6.6和7.4的水作介质，溶出结果有210%的变化 介质的温度 影响药物的溶出度，温度高溶出快 一般温度变化1，溶出速率变化约5 规定0.5 ,影响溶出度测定的因素,2.介质的影响 介质的体积 规定介质体积应准确至1% 量筒应标定，倒入杯时应控15秒 多次取样介质体积变化的影响 多次取样，累计取样量超过介质体积1%时，会引起结果的系统性偏差 处理方法 补液：取样前介质体积不变，修正取样体积中的药物量 不补液：取样前介质体积递减，修正介质体积+取样体积中的药物量 介质蒸发的影响 缓释、控释制剂试验时间长，介质蒸发引起系统性偏差 3237的环境中，不加杯盖3小时，900ml介质蒸发达1025ml，造成溶出度13%的误差 处理方法：溶出试验一定要加杯盖,影响溶出度测定的因素,2.介质的影响 脱气程度 气泡对药物溶出的影响复杂，因药物品种而异，使结果重现性不好 气泡的影响 影响流体力学效应 影响制剂与介质的接触面积 影响筛网的通透性 聚集崩解的颗粒 吸附在杯壁的气泡提供了崩解颗粒的聚集场所 泼尼松校正片在脱气的水中，溶出比未脱气的高约30%,影响溶出度测定的因素,3.流体力学的影响 溶出杯一致性 不同溶出杯，因内径偏差、半球底深度不一、内柱面不圆、内壁不光滑等因素造成流体力学效应不同，结果RSD偏大 处理方法：更换不良的溶出杯，使用成套溶出杯 取样探头、温度探头、光纤探头 探头直径超过7mm，溶出速率显著改变 探头直径小于1.5mm，溶出速率变化很小 不检测、不取样时探头取出,影响溶出度测定的因素,4.取样与过滤的影响 取样点高度 不同高度取样有明显差异 处理方法：使用取样针管定位装置 滤膜吸附 滤膜选择不当，会引起高达50%的吸附偏差 处理方法：进行验证，确定所用滤膜对样品是否有吸附；更换过滤材料；将滤膜在水中煮沸1小时以上，加大取样量，取续滤液 过滤效果 超细颗粒，用0.8m滤膜过滤，可能过滤不净 处理方法：选用0.45m、0.2m的滤膜或其他滤材,影响溶出度测定的因素,5.样品的影响 胶囊壳 胶囊壳质量差，会引起530% 的结果偏差 处理方法：进行干扰试验，确定空胶囊引起的吸光值作为校正值。如该值不大于标示量的25%，试验有效。如该值不大于标示量的2%，可忽略不计 用胶囊壳作空白校正 囊壳交联 处理方法：囊壳交联加1%胃蛋白酶,影响溶出度测定的因素,6.其他因素 自身对照法 取样量少，代表性差，溶解不完全 建议取样量：至少1个制剂重量 未排除胶囊壳与辅料的干扰 空胶囊校正 用专属更好的测定方法 取样至过滤时间超过30秒钟 使溶出结果偏高，颗粒中药物取样后继续溶出 含量测定方法 含量测定方法的准确性、重复性等,定义 溶出度方法的建立 影响溶出度的因素 溶出度的比较 问题,溶出度的比较,选择一定的溶出介质，进行溶出曲线的比较，审评的重点。,f2因子比较,样品量 每批样品至少采用12个剂量单位（如片剂为12片，胶囊为12粒）进行测定,f2因子比较,取样点 除0时外，一般至少选择3个时间点进行测定，如5、15、30、45min，或采用其他适宜的时间间隔取样，直到药物溶出90%以上或达到溶出平台，计算各时间点药物溶出百分比，绘制每批样品药物溶出曲线。,f2因子比较,数据要求 除0时外，第1个时间点的变异系数不得过20%，从第2个时间点至最后1个时间点的溶出结果的变异系数应小于10%,f2因子比较,当 f2数值在 50100 范围认为两条溶出曲线是相似的。,f2因子比较,取样时间点除 0 时外，至少有 3 个 每个处方样品至少采用 12 个剂量单位 计算时药物溶出达到 85%以上的时间点只能选取一个 从第 2 个时间点至最后 1 个时间点溶出结果的变异系数应小于10% 保证药物溶出 90%（80%）以上或达到溶出平台,概念和适用范围 溶出度方法的建立 溶出度的比较 问题,阿德福韦酯软胶囊,本品仅在质量研究中考察了样品的溶出行为，采用桨法，100rpm，选择含0.05%的十二烷基硫酸钠水溶液为介质；但是，已上市原剂型一般采用桨法，50rpm，0.01N盐酸溶液为介质，现溶出度检查条件不合理，可能无法分辨不同质量制剂的溶出行为的差异，也无法对本品与已上市原剂型的溶出行为进行比较。,法莫替丁口腔崩解片,本品是采用冻干技术制备的口腔崩解片，溶出行为应较普通片明显改善，而溶出曲线显示口崩片与普通片溶出行为无显著差异，溶出行为较普通片并未改善，现研究结果与本品的特性不符。 建议不予批准。,注意问题,滤膜吸附 取样过滤时，应注意可能存在的损失。因滤膜与药物间有一个吸附饱和过程，即滤膜只有吸附到一定量之后，方能达到饱和、不再吸附。,注意问题,滤膜吸附如何验证 (1)取溶出液过滤，舍去不同体积的初滤液后测定，观察响应值的变化，了解被测药物与滤膜的吸附情况。,注意问题,滤膜吸附如何验证 (2)取样后，一部分不过滤，直接采用高速离心，取上清液测定。另一部分采用过滤法，取所得的续滤液测定，考察两者间测定数据的差异。,注意问题,滤膜吸附如何验证 (3)取对照品溶液，经滤膜过滤后，与原溶液进行比较，观察测定前后数据的变化。,注意问题,滤膜吸附解决方案 如滤膜对药物有吸附，可将滤膜在沸水中煮沸1h，或加大初滤液体积等。 建议采用样品直接高速离心的方法,他克莫司,难溶于水，制成制剂时一般需进行微粉化等处理，使原料药粒径变小，比表面能变大，静电吸附能力增强，故与滤膜的吸附作用明显。,一些小规格制剂（如非那雄胺片）溶出液中主药浓度低，达到饱和所需的初滤液体积大大增加，干扰也较大 。 对滤膜进行预处理。,注意问题,设备清洁 应用转篮法试验时，应注意转篮的洁净程度，一般在阳光下观察转篮的空隙是否有堵塞。 如有，可采用超声或在稀硝酸中煮沸、再在水中煮沸的办法进行清理，否则将影响溶出度数据的准确性。 低转速时，影响更为明显。,注意问题,介质脱气 溶出度试验规定溶出介质试验前应进行脱气处理，因为介质中的气泡会影响样品的崩解、扩散和溶出。 脱气与否对转篮法的影响较明显，因为溶液中的气泡会堵塞转篮空隙，影响样品溶出。 对桨板法影响不大。,脱气方法 煮沸法：脱气效果好，但费时耗能 减压脱气：先加热至约41，再减压抽滤，脱气效果中，速度快 超声脱气：脱气效果差 氦气脱气：脱气效果好，速度最快，但成本高,生物等效性的豁免,生物等效性BE（Bioequivalence）定义 生物等效性是指两种制剂在相同试验条件 下，服用相同剂量，其活性成分在吸收程度和速度 上无显著性差异。 豁免意味着用体外的试验结果证明体内是否生物等效,对象：固体制剂 FDA对于等效性豁免的基本要求： 药物溶解度好；膜通透性高；治 疗剂量范围宽；药物可从固体中迅速溶出；药物在胃肠道中稳定；制剂使用的赋形剂种类和用量应符合FDA规定。,生物学分类系统,Biopharmaceuticals classification system（BCS） Class I 高溶解性 高渗透性 Class II 低溶解性 高渗透性 Class III 高溶解性 低渗透性 Class IV 低溶解性 第渗透性 ,高溶解性的定义,在pH