实验染色体组型分析.ppt

染色体核型分析,实验目的：,1观察人类中期染色体结构与数目。 2了解并掌握常规染色体的分类、分组标准。 3掌握非显带染色体的核型分析方法。,意义：可确定物种的特征，确定种属亲缘关系 临床应用（染色体疾病、产前诊断）,实验原理,定义：染色体核型是指将动物、植物、真菌等的某一个体或某一分类群（亚种、种、属等）的体细胞内的整套染色体，按它们相对恒定的特征排列起来的图像。,细胞（外周血等）,体外培养(加PHA）,秋水仙素处理,低渗,固定,制片并染色,显带染色体及其他技术,非显带染色体技术,染色体标本制作,染色体超螺旋,染色体的大小,中期染色体的典型形态结构：,1/2,5/8,7/8,8/8,近端,中央,亚中,染色体的类型： 按着丝粒在染色体长轴的位置，分成： 中央着丝粒染色体：1/25/8 亚中着丝粒染色体：5/87/8 近端着丝粒染色体：7/8至末端(8/8),生命科学中的“钓鱼” （FISH）技术,遗传及分子生物学实验新技术新方法系列讲座,发展历史,荧光原位杂交技术(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)问世于70年代后期,其曾多用于染色 体异常的研究,近年来随着FISH所应用的探针种类的不断增多,特别是全COSMID探针及染色体原位抑制杂交技 术的出现,使FISH技术不仅在细胞遗传学方面,而且还广泛应用于肿瘤学研究,如诊断、基因定位等,FISH的基本原理,很简单, 就是标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的DNA(玻片上的标本)退火杂交, 通过观察荧光信号在染色体上的位置来反映相应基因的情况.,荧光原位杂交（FISH）,FISH技术是常规染色体分析的辅助手段。它是用荧光素标记特异探针，与染色体做杂交后，根据特异的荧光信号来判断结果。 它可用于标记染色体的识别、特异融合基因的检测、新基因定位，用全染色体涂抹探针识别复杂的染色体结构异常。,FISH具有其不可比拟的优点：,1.操作简便，探针标记后稳定，一次标记后可使用二年。 2.方法敏感，能迅速得到结果。 3.在同一标本上，可同时几种不同探针。 4.不仅可用于分裂细胞染色体数量或结构变化的研究，而且还可用于静止期细胞的染色体数量及基因改变的研究。,FISH的技术特点：,FISH选用的标本可以是分裂期细胞染色体也可以是间期细胞。间期细胞可以是冰冻切片，也可以是细胞滴片或印片。 生物素（Biotin）地高辛（digoxigenin ）, dinitrophenyl(DNP)，aminoacetyl fluorene(AAF)均可用于探针标记。,染色体着丝粒荧光,染色体端粒荧光,比较基因组杂交（CGH）,CGH不需要制备患者的染色体标本, 只需采用肿瘤患者的基因组DNA和正常人的基因组DNA作为探针，与正常人的中期染色体分裂相进行杂交。比较两种探针所标的荧光信号的强度比率来判断肿瘤患者的DNA是否存在缺失、增加或复制。 因而CGH最适合于检测实体瘤, 淋巴瘤等不易得到高质量染色体标本的疾病. CGH另一无法替代的优点是, 它可在一次杂交中检测整个基因遗传 物质的增加或减少, 但精度有限, 对微小的扩增或缺失检测不出, 仅适用于对整个基因组进行筛查. CGH也无法发 现平衡染色体易位.,FISH的临床运用,在细胞遗传学检查中，重复序列的探针应用最多，它们是卫星DNA、卫星DNA和经典卫星DNA探针。 卫星DNA探针主要检测人染色体的着丝粒。 卫星DNA位于顶端着丝粒染色体及染色体的异染色质 周围。 经典卫星DNA有着AATGG短片段，位于染色体1、9、15、16和Y染色体长臂异染色质周围，后两处探针除了可用于染色体数目检查外，还可用于上述部位精细改变的检查。,FISH的临床运用,白血病检测中常用的FISH探针有单一序列探针, 着丝粒探针, 整条染色体探针, 常用方法有单标记FISH, 双 标记FISH, 比较基因组杂交(CGH), M-FISH 和Rx-FISH等.各种FISH探针及方法均在白血病的诊断, 治疗监测, 预后估计和微小残留病检测中起重要作用,应用实例,常规的染色体核型分析已广泛用于各类急、慢性白血病患者的骨髓染色体检查。如M3型的t（15；17）、M2b型的t（8；21）、CML和部分ALL的Ph染色体等。 FISH技术已成功地用于t（15；17），t (8；21) 和Ph染色体等的检测，并为人类基因组实验室发现的新基因进行了定位。利用染色体涂抹技术，结合常规核型分析和CGH技术，确诊了多例复杂的染色体异位。已用CGH技术，分别对高二倍体ALL的患者和CML患者进行了研究