实验四病源性球菌与杆菌xiugai.ppt

病源性球菌与杆菌,一、实验目的 1.掌握链球菌、脑膜炎双球菌、结核杆菌、白喉杆菌的形态特征和染色特性。 2.熟悉肠道杆菌培养特征、生化反应及动力学等特性。 3.了解三种葡萄球菌产生的色素。 4.了解乙型溶血型链球菌在血琼脂平板上的菌落特点及溶血性。 5熟悉抗“o”试验的方法及临床意义。,二、实验内容 1.自己动手观察链球菌、脑膜炎双球菌的形态;示教观察结核杆菌、白喉杆菌的形态。 2.观察肠道杆菌的双糖发酵，鉴别培养基（ss培养基）的生化反应。 3.化脓性球菌的鉴定 三种葡萄球菌的色素观察 乙型链球菌的溶血现象观察 抗“O”实验。,三、作业： 1.镜下绘出4种形态图 2.根据生化特性及产生色素，葡萄球菌分为哪几种类型？,Salmonella -Shigella Mediun,主要成分 基础营养 乳糖 指示剂 抑制剂,分解乳糖,不分解乳糖,产酸,PH,指示剂变红色,红色大菌落,大肠杆菌等,无明显变化,无色半透明小菌落,志贺菌等,大肠杆菌,痢疾杆菌,结核分枝杆菌,抗酸染色,乙型溶血性链球菌,溶血环,白喉棒状杆菌,异染颗粒,实验四 病原性球菌,1. 五类病原性球菌的形态、排列及染色性 2. 葡萄球菌、链球菌的培养物 3. 血浆凝固酶试验-玻片法 试管法 4、抗链球菌溶血素”O”（ASO）乳胶试验 5、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定,（操作，1人/组）,（操作，1人/组）,肺炎球菌特殊染色可见的荚膜,G+球菌：,金葡菌,链球菌,肺炎双球菌,1. 五类病原性球菌的形态、排列及染色性,G-球菌：,淋球菌,脑膜炎球菌,2. 葡萄球菌、链球菌的培养物,普通琼脂平板 血平板 菌落形状 色素 溶血性 金葡 圆形凸起光滑中等大小 金黄色 + 柠葡 同上 柠檬色 - 白葡 同上 白色 -,表1,血平板 甲型链球菌 针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环 乙型链球菌 针尖小菌落、透明宽大溶血环,巧克力血平板 脑膜炎双球菌 菌落透明似露滴状,表2,表3,3. 血浆凝固酶试验-玻片法,（操作，1人/组）,原理：,方法：,兔血浆 兔血浆 生理盐水,1,2,3,金葡 白葡 金葡,+ + +,凝集（+）,不凝集（-）,不凝集（-）,4、血浆凝固酶试验（试管法）,金葡菌 白葡菌 + + 兔血浆 兔血浆 3730水浴观察,凝集为阳性,不凝集为阴性,凝固酶实验（试管法）,五、抗链球菌溶血素“O”（ASO） 快速胶乳法 高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平 的抗体后，还有多余ASO，这些多余抗体即与SLO胶乳 试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。,（操作，1人/组）,原理：,阳性对照 阴性对照 待测血清 各加溶血素“O” 1滴轻摇1min 再加SLO胶乳1滴轻摇3min,观察结果,方法：,稀释度 ASO （IU/ml） 1：15 400 1：30 800 1：60 1600,ASO250 IU/ml 阴性,结果判定：,注意事项：,液体量要一样，菌量一样。 血浆多挑几环（一滴的量），菌少挑点， 不能干。 3. 涂菌时间一样，出现凝集为阳性，再涂 凝集物可被涂散，变阴性。,肠道杆菌,一、肠道杆菌的形态及染色性 二、肠道杆菌的培养特性 三、肠道杆菌的生化反应特点 四、Widal实验,肠道杆菌的形态及染色片,肠道菌的菌落形态,EMB 大肠：菌落呈紫黑色，有金属光泽。 伤寒 痢疾：菌落无色半透明。 SS D大肠：大而不透明的红色菌落。 伤寒 痢疾：中等大小淡黄色菌落。,大肠杆菌（EMB培养基）,肠道致病菌（SS培养基）,粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定,生化反应1单糖发酵,葡萄糖及乳糖发酵 一）实验目的与原理 了解糖发酵试验方法 二）实验材料 1、菌种：大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌培养物 2、培养基：乳糖及葡萄糖发酵管 三）实验方法 、用接种环将大肠杆菌、伤寒杆菌分别各接种于葡萄糖及乳糖发酵管中（方法同前）。 2、37孵育1824小时，取出观察结果。,动力检测,常见肠道杆菌的生化反应鉴别表,铁质双糖琼脂基上各种肠道杆菌的生长情况,肠道杆菌在KI培养基上的培养特性,Indol实验,生化反应2Indol实验,2. 肠道杆菌在SS培养基上的生长现象,大肠杆菌 伤寒杆菌 SS平板 红色大菌落 无色透明小菌落,基础培养基，乳糖(底物)，胆盐、煌绿(抑制非致病菌)，中性红（指示剂）。,SS培养基：,3. 五类肠道杆菌的生化反应及动力,大肠杆菌 - - + + + / 变形杆菌 - + + +/- + - / 乙型副伤 寒杆菌 - + - - + -/ 伤寒杆菌 + - +/- - - + -/+ 痢疾杆菌 + - - - +/- - -/+,葡萄糖 乳糖 H2S 尿素 靛基质 动力 双糖铁,4. 肠道杆菌未知菌1和未知菌2的鉴定,（操作，2人/组）,未知菌,双糖铁培养基(乳糖/固体/上，葡萄糖/半固体/下),生化反应,葡萄糖发酵 乳糖发酵 尿素酶试验 H2S试验 靛基质试验（蛋白胨水液体培养基） 动力试验（半固体培养基）,（微量发酵管）,方法：,血清学鉴定（玻片凝集反应）,（3