GB-T22286-2008动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB/T22286-2008dt WritrtA fr + &fi+ p-E Atr dtfriJW,HEHtilUE &fEEi* HHtriHtEDetermination of p-agonists residues in foodstuff of animal origin-Liquid chromatography with tandem-mass spectrometric method2008-08-12犭之 布200g -101实施扉串皙嬲髯篱警攒髀发 布GB/T222862008曰本标准的附录为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位 :中华人民共和国上海出人境检验检疫局 、 上海市疾病预防控制 中 b 、上海水产大学 、 中华人 民共和国浦江出人境检验检疫局。本标准主耍起草人 :郭 德华 、 汪国权 、 金玉娥 、 李波 、 王锡 昌、 钟一亮 、 邓哓军 、 靳海彤 、 杨景贤。亠刚GB/T22286-2008动物源性食品中多种9-受体激动剂残留量的测定 液 相色谱串联质谱法1 范围 本标准规定 了动物 源性食 品 中沙丁胺醇 (s a l b u t a m o l )、特布他林 (t e r b u t a l i n e )、塞曼特罗 (o m a t -eroD 、塞布特罗( cimbuterol) 、莱克多巴胺( ractompamlne) 、克仑特罗( clcnbutcrol) 、溴布特罗( brmbuteroD 、苯氧丙酚胺( oo邓upone) 、马布特罗( mabuter。l) 、马贲特罗( mapcntcrl) 、溴代克仑特罗( bromh l r b u t e r o l )残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法 。本标准适用于猪肝和猪 肉中沙丁胺醇 、 特布他林 、 塞曼特罗 、 塞布特罗 、 莱克多巴胺 、 克仑特罗 、 溴布特罗 、 苯氧丙酚胺 、 马布特罗、 马贲特罗 、 溴代克仑特罗残 留量的检验 。本方法中沙丁胺醇 、 特布他林 、 塞曼特罗、 塞布特罗、 莱克多巴胺 、 克仑特罗、 溴布特罗、 苯氧丙酚胺 、马布特罗 、 马贲特罗、 溴代克仑特罗的检出限均为0.5u g /k g 。2 规范性引用文件下列文件 中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注 日期的引用文件 ,其 随后所有的修改单 (不 包括勘误的内容)或 修订版均不适用于本标准 ,然而 ,鼓励根据本标准达成协议 的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。凡是不注 日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。G B / T 6 6 8 2 分析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法( G B / T 6 6 8 2 - 2 0 0 8 , I s o 3 6 9 6 : 1 9 8 7 , M O D )3 原理试样 中的残留物经酶解 ,用高氯酸调节 p H值,沉 淀蛋 白后离心 ,上 清液用异丙醇-乙酸 乙酯提取 ,再用 阳离子交换柱净化 ,液 相色谱-串联质谱法测定 ,内标法定量 。4 试剂和材料除另有规定外 ,所 有试剂均为分析纯 ,试验用水应符合GB/T6682一级水的标准。41 甲醇 :液 相色谱纯 。4 . 2 乙酸钠( C H 3 C ooN a3 H 2 0 ) 。 4 3 0 . 2 mol/ L 乙酸钠缓冲液: 称取1 3 6 g乙酸钠, 溶解于5 0 0 mL 水中, 用适量乙酸调节pH 至5 2 。4 , 4 高氯酸: 7 0 % 7 2 % 。4 . 5 0 , 1 ml/ L 高氛酸: 移取8 7 mL 高氯酸, 用水稀释至1 0 0 0 mL 。么 4.6 氢氧化钠 。4.7 10m o l /L氢氧化钠溶液 :称取如g 氢 氧化钠 ,用适量水溶解冷却后 ,用水稀释至100m L。48 饱和氛化钠溶液。49 异丙醇-乙酸乙酯 :(6十 4,体积 比)。410 甲酸水溶液 :2%。4l l 氨水 甲醇溶液 :5%。4,12 0,1%甲酸水溶液-甲醇溶液 :(95+5,体积比)。4 . 1 3 阡葡萄糖醛甙酶/ 芳基硫酸酯酶( 阡G l u c u r 【, n l d a s a r y l s u l f a t a s : 1 0 0 0 0 u n l t m g 。4 l 0 o a s i s M C X 阳离子交换柱: s O m g / / 3 m L , 使用前依次用3 m L 甲醇和3 m L 水活化。注:Oa “ s MCX阳离子交换柱是由Wa t e r s 公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可。如果其他产品能有相同的效果,则可使用这些等效的产品。1GB/T22286-2008415 沙丁 胺 醇(CAs :18559949)、特 布 他 林 半 硫 酸 盐(CAs :230s 1-32与)、塞 曼 特 罗 (CAs :542393D、塞 布 特 罗(CAs :54239七D、莱 克 多 巴 胺 盐 酸 盐(CAs :9027421)、克 仑 特 罗 盐 酸 盐(CAs :3714279)、溴布特罗( C A s : 4 1 9 3 7 0 2 4 ) 、苯氧丙酚胺盐酸盐( C 灬: 5 7 9 - 5 6 - 6 ) 、马布特罗( C A s : 弘2 4 0 3 6 7 ) 、马贲特罗从s : 9 5 6 5 6 8 - 1 ) 、溴代克仑特罗从s : 3 7 1 5 5 2 - 9 ) 标准品: 纯度大于9 8 % 。4.16 标准储备溶液:准确称取适量的沙丁胺醇、 特布他林、 塞曼特罗、 塞布侍罗、 莱克多巴胺、 克仑特罗、 溴布特罗、 苯氧丙酚胺、 马布特罗、 马贲特罗、 溴代克仑特罗标准品,用 甲醇分别配制成l O0u g /m L的标准贮备液 ,保存于-18冰箱 内,可使用1年 。4.17 混合标准储备溶液(1u g /m L):分别准确m L沙丁胺醇 、 特布他林 、 塞曼特罗、 塞布特罗 、 莱克多巴胺 、 克仑特罗、 溴布特罗 、罗、 溴代克仑特罗至100m L容量瓶中,用 甲醇稀释至刻度 ,-184,18 同位素 内标物 :克仑特罗419 同位素 内标储备溶配制成100阝酽m L的标准贮备液,保存于-184, 同 位素 内标工作当稀释 。5 仪器和设备lJ5.15.25354555,657585.9高效液相色均质器 。旋涡混合器离心机 :5氮吹仪 。水平振荡器真空过柱装p H计。超声波发生6 样品制备61 提取称取2g (精确到o冲液,充分混匀,再加50u L阡葡萄糖醛甙酶6r loo FL 1o nglml荡1 5 min, 离心1 0 min(5000 而o ,取4m L上清液加氛酸调节 p H值 到1士o .3。5 0 0 0 r / m l n 离心1 0 m h 后, 将全部上中,用 10n l 【 ,l /L的氢氧化钠溶液调节 p H值到11。加人 10m L饱和氯化酸乙酯(6十 4)混合溶液,充分提取 ,在5 0 0 0 r/ 血n下离心1 0 min。转移全部有机相,在 40水浴下用氮气将其吹干。加人 5m L乙酸钠缓冲液,超声混匀,使残渣充分溶解后备用。6,2 净化将阳离子交换小柱连接到真空过柱装置。将上述残渣溶液上柱,依次用2m L水、 2m L2%甲酸水溶液和2m L甲醇洗涤柱子并彻底抽干,最后用2m L的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分.流速控制在0.5m L/m i n 。洗脱液在40水浴下氮气吹干。准确加人 0阝LO,1%甲酸/水-甲醇溶液(95+5),超声混匀。将溶液转移到15m L离心管中,1 5 0 0 0 r/ min离心1 0 min。2lJ(约 10m L)转移到 m L量的克仑特罗-D9、沙丁品于50m f 离 b 管中,加人酶 ,混匀后 ,37水浴水解12h 。于待测样品中。加盖置于0川凵弘GB/T22286-2008上清液供液相色谱串联质谱测定 。7 液相 串联质谱测定71 液相色谱-串联质谱条件a ) 色谱柱:Wa t e r s ATLANTICs C1:柱,150m m 2.1m m (内径),粒度5u m ;b ) 流动相 :A:01%甲酸/水 ,B:01%甲酸/乙 腈 ,梯 度淋洗见表1;表1 梯度淋洗表注:方法中所列色谱柱仅供参考,给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可。如果其他产品能有相同的效果,则可使用这些等效的产品。72 液相 色谱-串联 质谱 测 定按照6.1液相色谱-串联质谱条件测定样品和混合标准工作溶液,以色谱峰面积按内标法定量。 在上述色谱条件下沙丁胺醇、 特布他林、 塞曼特罗、 塞布特罗、 莱克多巴胺、 克仑特罗、 溴代克仑特罗、 溴布特罗、 苯氧丙酚胺、 马布特罗、 马贲特罗和同位素内标沙丁胺醇-D3、克仑特罗-D9的参考保留时间分别3时阃/n l t nB/%096 42/么: 丿丿: JJ!丨冫)冫2o 、21 22/ J2s r J./、952f f ;口 口众Looc)g)D DD节各气体流量 以丨叩/钵 晒 表被测物翔定量子蔺口 m /z 厂被 测 物艿子 z)碲50%) 2 0 % 5 0 %)10% 2o %l 0%允许的相对误差20%25%30%50%GB/T22286-2008附 录 A(资 料性附录)11种阡受体激动剂标准物质的多反应监测(MRM)色谱图ll Slsalbutamol D32,MRNl o f 8Ch a n n e l s Es +2衽3)1513 01e 钅6 00 B Ool O 00 12 00 14 00 16 0O 18 00l Oo9t6 1622 00 24 o o 26 0o MRM o f 8Cb n n c l s ES+2401462 73e 4oo o o2 002 004 0o6 006 00%l O 00 12 00 1衽 00 16 00 18 00 20 0oT e r b u t a l n e2 2 0 0 2 4 0 0 2 6 0 o M R M of8 C hanne s E s+2孔)1522 15e 8 0 0 2 o o 4 沅 o o 。 O 。 i 。 。 i 。 i 订: 。 i J 。 i 矿。 。 。 沆 , 9 沆 尻。 。 0 0 MRM o f 8Ch a n n e l s Es +l :| l :p呷| d MRs l f 。 c h a 犭j 铲居氵 蕾l 衽 00 】6 00 18 00 20 00 22 00 24 0o 26 o ol嘈耦湍禺榀塄呻嵛矿榀揣樱i: 言1 4 0 0 1 6 0 0 1 8 0 0 2 0 0 0 2 2 0 0 2 4 0 0 2 6 0 01导| 景骨:14 00 16 00 18 00 20 00 22 00 24 00 26 00 MRl v I o r 8Ch a n n e l s Es +2772035 52e 0o 0 0l O090l 4 00 16 0o16 52l98 0O l O 00 12 00Br ,m e h l o r b u ,c r o 118 00 20 00 22 00 24 00 26 00 MRM o f 8Ch a n n e l s Es +3232衽94 60e 400 006 0014 00 16 00 18 00o0 00l Oo9“l9%2 006 0o6 008 00 l O 00 12 0oB rt, mbulerol? 衽714 00 16 00 8 0o20 00 22 00 2衽 00 26 00 M R N lof8 C hannels E s+3672934 02e 420 00oo 0000 0o2 008 00 10 00 12 00Is o x s u p r i n e8 00 10 00 12 00Nl a b u 1e r o I18 72衽 00l 遮 0O 16 00 18 001(2 0 0 0 2 2 0 0 2 4 0 0 2 6 0 0 M R M Q f8 C hannels E s+311)2372 29e 410o9o4 00 6 00 8 00 10 0O 12 00 14 00 16 00 18 00 20 00Ma p e n t e r o l9 | | 9 | me2 00 衽 O0 6 00 8 0O l 0 0O 12 00 l 4 00 16 0O 18 00 20 00 22 00 2衽 00 26 00oo 0 0图A.1 沙丁胺醇、 特布他林 、 塞曼特罗、 塞布特罗、 莱克多巴胺 、 克仑特罗、 溴布特罗、 苯 氧丙酚胺 、马布特罗、 马贲特罗和溴代克仑特罗标准物质的多反应监测(MRM)色谱图巴0lN廴臼0中华人民共和国国家标准动物源性食品中多种 D 受体澈动剂残圈n 的 浏定