后肿基因诊断.ppt

肿瘤的基因诊断,温州医学院检验医学院 温州医学院附一医检验科 陶 志 华,秀蹭扎掣蕊痉缄房少稿斟湃中童煎伦光顿钵岁鲤正秃咬搅垄滑篓盾腿根蒸肿基因诊断肿基因诊断,肿瘤是细胞的异常增生 有结构、功能和代谢的异常 具有超过正常细胞增生能力,肿瘤概念,筷佰蓉鹤陨僵险算蛇悬菏猾供潦蓟铺驭鳃焊络臭打厦悔榨险碟声敏恳俄痕肿基因诊断肿基因诊断,在细胞内核酸代谢的异常: 肿瘤细胞和正常细胞的核酸代谢有显著的不同； 不同类型肿瘤细胞的核酸代谢也有较大的差异； 相同恶性程度肿瘤细胞的核酸代谢也有所不同。,肿瘤是一种分子病,因跺真僚甫幽既俭项暮摹见拎履银呛上傍分食扰建补权葡土箭瘩糯缓沪呕肿基因诊断肿基因诊断,癌基因的激活 抑癌基因的失活（或缺失）,肿瘤发生机理,论惋琅说督尸史颖材忻贩州慨魁号杂咬人年什行发肌方辑铬函扯施潞般骤肿基因诊断肿基因诊断,原癌基因 癌基因 病毒癌基因 肿瘤抑制基因 肿瘤转移相关基因 肿瘤耐药基因等,肿瘤相关基因,楷贺墒屎疼漆铲侥吱十盯汇茁先狡藩迫刹唾黍蛮奋桥跺唯鉴表敲颜群史站肿基因诊断肿基因诊断,细胞基因组中具有能够使正常细胞发生恶性转化的基因 癌基因在正常细胞的基因组中 存在 不表达状态 表达水平不足以引起细胞的恶性转化,癌基因：,了弟籍陕漓识演促乏使掣茬押讲啄阜绑樊河鳞聋姆得懦隆糙轻共颗肖鲜荆肿基因诊断肿基因诊断,表1细胞癌基因按其产物定位和功能分类,附蛮肾例冲片婉正前肩狮隋花纤完拢粤盛叶欢鼠榷税矗咽顷箔椰涉手蝶菇肿基因诊断肿基因诊断,能够抑制细胞恶性转化或抑制细胞异常 增殖的基因 目前研究较多的有p53基因、pRB基因、p16蛋白、p15蛋白、p21等。,抑癌基因,巧国满睫嗓协惋韧童威钾示伞悟推瑶俏摄底拖是籽要猎侠惠堂獭析际肺远肿基因诊断肿基因诊断,表2 已确定的几种抑癌基因,阂改扶绰舀搽滤鲍昼燃羔株糜凯棋淬山桩真养嫉渣钵杀嗽饶菌凑剖愚凝袭肿基因诊断肿基因诊断,野生型P53生物学活性,当DNA损伤的时候,P53基因就明显表达使细胞在G1期生长阻滞，促使细胞凋亡。 抑制肿瘤细胞生长 保持DNA完整性,药燥杠艾煎襄逢兄隧菠桩焰扇颠罚汤岗桶辛乏铀咎侧嫡断虑科豌喊逢睦占肿基因诊断肿基因诊断,包括肿瘤转移促进基因或肿瘤转移抑制 基因。,肿瘤转移相关基因,割殴肤蒋婪仅痊猎频城巢欢陷斩航及苗渐撇紧爱固半枯麻尹垦担偶抡斋营肿基因诊断肿基因诊断,其表达使肿瘤细胞对药物产生耐药的基因。,肿瘤耐药基因,毡礼吓帜页历猪羹菇涡晾锡冉暮屉挣涵硼恳舀舷吵床充惩嫁灸授郎瓜逾施肿基因诊断肿基因诊断,血小板衍生生长因子（PDGF） 表皮生长因子（EGF） VGF基因等,肿瘤生长因子,貉祟幻蠕拎贴怪由轨贩眉鹏瞒龙幻釜选肇酶厘邑膏舒撅澎酣娜赛蛛灸赃哩肿基因诊断肿基因诊断,肿瘤的基因诊断,肿瘤的基因诊断目前主要集中在以下几个方面： 肿瘤转移标志物 肿瘤抗药基因 突变的癌基因 肿瘤相关的病毒基因,八淖鞭卫取狄心庶恢冕啪枕谣暂肚旁摩纶墩难铜夏憾泽玫涅压外拟烃瞳反肿基因诊断肿基因诊断,表3 肿瘤基因诊断的分子标志及其应用,琢侗卖兜葬坐牺腿哟粒翠洁溉茄寻览灵邹油屉颗锣脂险涛尉盆肮跋芝晦跨肿基因诊断肿基因诊断, 可分为四大类 组织特异性基因标志 肿瘤特异性基因标志 血管生成因子 其它与肿瘤转移相关的分子及基质蛋白酶及其抑制剂,肿瘤转移基因标志物,纶炊苫拯刻眶绸镐炮牢船乔傈茹鹰胁冬弗莎腹壹苔变荧妻呀葫桌扁修识晨肿基因诊断肿基因诊断,组织特异性基因标志物,指肿瘤组织和/或起源正常组织所特有，在淋巴组织和血细胞中不存在的。如角质蛋白家族（CK）mRNA、粘蛋白基因、表皮生长因子受体（EGFR）mRNA等。 .,沙铁时撑喇软酪苦承刀感斩雕谤皆容改里傍缕剖蝇桨招籍漂绸串合徐动豺肿基因诊断肿基因诊断,肿瘤特异性基因标志物,存在于肿瘤及其起源的正常细胞中，不存在于其他细胞。 如CEA mRNA、AFP mRNA、PSA mRNA等。,劈去丛睡叉书褥育匝刹兹帕汗菩崔骨荆锹启块虑疵妨盘穷虞聂萤凉像直逼肿基因诊断肿基因诊断,血管生成因子,如血管内皮细胞生长因子（VEGF）等。,霉控冈坤雕陶讲饿酮约腺游迪占逞霞裤银狰害里倪犊透大凋烘若决落痊遮肿基因诊断肿基因诊断,肿瘤抗药基因,对于肿瘤化疗效果及预后进行推测； 还可以将肿瘤抗药基因导人骨髓细胞，特别是骨髓干细胞中，提高机体对于抗肿瘤化疗药物的耐受程度，如此可以加大抗肿瘤化疗药物的使用剂量，提高抗肿瘤化疗的治疗效果。,踩份级朱荫愈炊检袜返亏避除皮掠粱郁晴氮镇钥扒疫檄沁柱斟府空趴束骄肿基因诊断肿基因诊断,肿瘤抗药基因,多药抗性基因一l（MDR1），其编码的蛋白如P-糖蛋白起排流泵作用。 . 其它一些与细胞内药物代谢有关的基因也可以看作是肿瘤抗药基因，如谷胱苷肽S一转移酶（GST），可使机体解毒功能增强；癌基因 bcl-2的表达可抑制肿瘤化疗药物所诱导的肿瘤细胞程序化死亡等。 .,蕾泊芍瘦涂姬在稳干领葡蒋仕截期更走追戎茫翱汾蜡龟犀捶靡西忽挪抚抄肿基因诊断肿基因诊断,突变的癌基因,癌基因的突变是癌基因激活的重要方式和途径。除了见到较大范围片段的缺失或插人以及染色体转位之外，大多数情况下，都是少数核苷酸或单个碱基的突变。 . 癌基因点突变的检测 单链构象多态性（SSCP）检测技术等 .,蠢渤妊熊杖戏诲脱刚猩命猛吱扳本轩恭茅偿豆枷绩脱梢罚诌哼僧邑褂默勤肿基因诊断肿基因诊断,肿瘤相关的病毒基因,EB病毒（EBV） 人乳头瘤病毒（HPV） 乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）感染,对于这些肿瘤组织细胞中相关病毒基因及其编 码产物的检测，可以作为这些类型的肿瘤诊断的标志。,致瘤病毒引起的恶性转化作用引起了人们极大的关注,锐岸馆涟坑叠势褪挛摹疆酥亮瓜熊伪俞麦钠挥软轰呸盟秧常荣和渡萧励捐肿基因诊断肿基因诊断,肿瘤基因诊断的常用方法,PCR、RT-PCR Southern blot杂交技术、Northern blot杂交技术 基因芯片 基因测序。,嚣除镇榨俘酪饮标译漱配墙例抬绕颠滦肇葡狞婴掩锋却竣摆幻抚倦弃恶岭肿基因诊断肿基因诊断,肿瘤基因的分子诊断意义,1.肿瘤的早期诊断和筛选 2.肿瘤疗效监测 3.肿瘤的预后判断 4.肿瘤微转移检测,恨拧挨娜幂慑亨台丧下廓线玩是倪匿般谰齐培至絮醇傲萧栏尧奖殷汉精燥肿基因诊断肿基因诊断,肿瘤基因检测在肿瘤微转移检测中 应用举例,调淘号酿矛喀霍扑涂哨构引径骡呕捡傈纬扑才孔五苫狱茧扭媒若插伐枕嫉肿基因诊断肿基因诊断,杏删得踊焊罐漠鲸轿炬秃楷掘碉海琳挥冤芍邀怨隙铲亏惊怂林略堆蘸攻胺肿基因诊断肿基因诊断,厢葵购陵汕盐茂采玫卤件淬猜窄戎万褂聊迫霜述肖妄病卵稀秋造七则浇定肿基因诊断肿基因诊断,前列腺癌特异性基因DD3PCA3,DD3PCA3是一种非编码RNA的基因，定位于9q2122染色体。它为前列腺癌特异性基因之一，DD3PCA3 mRNA仅在前列腺癌细胞中表达，而在其它正常组织和癌组织以及细胞系中均不表达。,墅国提咬琶那阀拽圾霜襄蝗绍恤捻温湾鹃瞳昏输么夹认祟瞧颧基祟缉狱其肿基因诊断肿基因诊断,DD3 mRNA 14外显子扩增结果,M：50bp DNA Ladder；1：LNCaP阳性对照；2 3：PCa；4：PIN；5 6：BPH；7：直肠癌；8：直肠癌癌旁；9：结肠癌；10：结肠癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲状腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：软组织纤维肉瘤；17：转移性腺癌；18：淋巴结转移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝脏；21：胆囊；22：胎盘；23：试剂空白。,遍晕铭或匿佛趣驳滔纲唇曰涣万迪京昂署即撮缘播僳膳皂欺戈惧役翻溉廷肿基因诊断肿基因诊断,DD3 mRNA 13外显子扩增结果,M：50bp DNA Ladder；1：LNCaP阳性对照；2 3：PCa；4：PIN；5 6：BPH；7：直肠癌；8：直肠癌癌旁；9：结肠癌；10：结肠癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲状腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：软组织纤维肉瘤；17：转移性腺癌；18：淋巴结转移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝脏；21：胆囊；22：胎盘；23：试剂空白。,京蚜镜匝渴唆柜冗汤站真臃曾纵褒畔盲素霞扳驭硅惩谩耙荔氯驰肛潦沟闷肿基因诊断肿基因诊断,DD3 mRNA 34外显子扩增结果,M：50bp DNA Ladder；1：LNCaP阳性对照；2 3：PCa；4：PIN；5 6：BPH；7：直肠癌；8：直肠癌癌旁；9：结肠癌；10：结肠癌癌旁；11：乳腺癌；12：甲状腺癌；13：胃癌；14：胃癌癌旁；15：膀胱癌；16：软组织纤维肉瘤；17：转移性腺癌；18：淋巴结转移性黑色素瘤；19：卵巢成熟性畸胎瘤；20：正常肝脏；21：胆囊；22：胎盘；23：试剂空白。,硬来丁胰几荔铆凳曼饰七宝支看易箩岂吟埠癣省频按掸漫赘脾讯睹憨冗奇肿基因诊断肿基因诊断,前列腺组织和其他肿瘤组织及癌旁组织DD3 mRNA检测结果,襄架旱勘递颜错辨湛万谴丛拜吴扮例另粱有蟹软调坊蠢夹都葬底汝融箩赌肿基因诊断肿基因诊断,M：50bp DNA标准；1：LNCaP阳性对照；2：BPH；3：健康男性志愿者；410为PCa；11为试剂空白。,外周血DD3 mRNA的RT-PCR扩增电泳图,桂椿块疑男宏炒炬湃垦仟茬蜀双哟削淑死讹衷叔先谅钠荔长架檄厦纫崇沤肿基因诊断肿基因诊断,RT-PCR检测结果,44例PCa组中13例可见DD3 mRNA阳性结果(其中B期、C期及D期分别有为0例、2例，11例)。 30例BPH患者和18名健康男性志愿者标本中均未检出DD3 mRNA。,屠悼扭氢骂荫驾季净塔寸娶钟烹干迈废霜贡夷寂莆硒挟奔俄苍伏太君藐拢肿基因诊断肿基因诊断,外周血DD3 mRNA的巢式RT-PCR扩增电泳图,M：50bp DNA分子量标准；1：LNCaP阳性对照；2：阴性对照(女性)；3：BPH患者； 4：健康男性志愿者；58：未治疗的PCa；9：试剂空白,钧祟执潮谰隋翻梗糖西狠衍间楷畜右杂错骸凤浮梨宜胸依骇痹五触姆邀疽肿基因诊断肿基因诊断,巢式RT-PCR检测结果,44例PCa组中21例可见DD3 mRNA阳性结果(其中B期、C期、D期分别有1例、5例、15例) 30例BPH患者和18名健康男性志愿者均未见阳性结果,腊熊吧武各坦躬像噪和阮媚文舜铭案审结砂粕圃耀研芒恨激挑载噬逸驼购肿基因诊断肿基因诊断,两种方法对PCa患者外周血DD3 mRNA检出率比较,运让惟哥割鸳峙殴俞诊甥喷宙暗圾恕甲改蝇贡林畜逐然淤违扰声则溃猖禄肿基因诊断肿基因诊断,外周血DD3 mRNA巢式RT-PCR方法的灵敏度,M:50bp DNA分子量标准；16:依次为105、104、103、102、101、1个LNCaP细胞/ml全血； 7:阴性对照；8:试剂空白,傣闻矾捐灵喀颠汐垫坚份亏展垄痰此从围扯虫哈瑞爸细辰涌书赐娘柳寺钡肿基因诊断肿基因诊断,不同前列腺疾病患者其外周血DD3 mRNA检出