异烟肼片及葡萄糖注射液的鉴别.ppt

药物分析实验,目录,第一部分：药物分析实验目的及要求 第二部分： 实验一、异烟肼片及葡萄糖注射液的鉴别、杂质检查 和含量 测定 实验二、阿司匹林肠溶片的鉴别和含量测定 实验三、复方磺胺甲噁唑片的含量测定 实验四、三种中药制剂中黄芩的鉴别 实验五、高效液相色谱法测定天麻药材的天麻素含量,1,药物分析实验概述及要求,药物分析是一门综合性的应用学科。 药物分析实验是药物分析课程的重要组成部分，是理论联系实际的重要环节。,加深学生对药物分析基本理论与概念的理解 培养学生具有研究药品质量的基本思路和方法 获得从事药品质量分析研究与检验的基本操作技能,学生应达到以下要求：,1.全面了解药物分析工作的程序及各环节的要求。 2 .掌握药物分析常用方法的原理及操作技术。 3.能运用本课程基本理论及有关专业知识分析和解决 实验中的问题。 4.培养实事求是的科学态度和严谨认真的工作作风。,实验要求,学生实验前必须预习，明确实验目的，了解实验内容与方法，考虑实验中应注意的事项及安排实验的进程。 实验中应认真操作，仔细观察实验现象并加以分析，作好原始记录，认真分析实验结果，力求做出准确可靠的结论。 应遵守课堂纪律和实验室规则，注意安全、保持整洁。,实验报告的写作方法及要求,写作方法 结构完整、条理分明、 文字简练、书写工整、 措辞注意科学性和逻辑性，尽量使用科学术语。,实验题目 突出实验的主要内容 实验目的 言简意赅的说明实验预期达到的结果 实验药品及仪器 实验方法 按照实验教材上的步骤以及自己 实际操作的步骤书写（原始记录） 实验结果与讨论 实验报告最重要的部分，包括实验原始记录及实验后进过归纳的结果 思考题,原始记录,实验环境：日期、室温、湿度 实验药品： 实验方法：称量记录 滴定记录 实验现象：颜色 气泡 浑浊 沉淀 实验记录本 尊重实验事实及时做好完整确切的记录 钢笔或圆珠笔书写 字体端正 （手上 纸条 其他本子上 不能再脑子里暂记） 记录有误 不能涂改 双线划去,实验讨论： 应针对实验所观察的现象与结果，联系课堂讲授的理论知识进行分析和讨论，切不可离开实验结果去空谈理论，抓住重点。 判断实验结果是否为预期的，如果非预期应分析其可能的原因，应指出实验中的不足和存在的问题。,实验结论 （1）结论包括：检验依据 检验结果 （2）全项检验或部分项目检验结论 1.本品按 检验，结果符合规定（或不符合规定） 2.本品按 检验上述项目，结果符合规定（只检验少数项目） 3.本品按 检验，除xxxx项未检外，其他项目符合规定,如：阿司匹林肠溶片的鉴别和含量测定,一、实验目的 1. 掌握水杨酸类药物的鉴别反应实验原理。 2. 掌握比色法检查阿司匹林片剂中游离水杨酸的实验原理。 3. 掌握两步滴定法测定阿司匹林片剂中药物含量的实验原理。 二、实验原理（按以下三部分内容书写，不必拘泥于讲义，简炼、准确说明原理） 1. 阿司匹林肠溶片鉴别的原理： 2. 游离水杨酸杂质限量检查原理： 3. 阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量测定原理：,11,三、主要器材（写所用药品信息与最主要的仪器） 1 阿司匹林肠溶片的信息：生产厂家、规格、生产批号、生产日期、有效期 2 试剂： 名称 规格 2主要仪器：如分析天平、纳氏比色管、容量瓶、酸式滴定管、碱式滴定管、滴定台、水浴锅等。,四、实验方法（按以下三部分内容书写，不能照抄讲义，按实际操作情况书写） 1. 阿司匹林肠溶片鉴别的操作： 2. 游离水杨酸杂质限量检查的操作： 3. 阿司匹林肠溶片中阿司匹林含量测定的操作：,五、结果与分析（按以下四部分内容书写）,1. 阿司匹林肠溶片的鉴别结果：即说明样品管的变色情况。 2. 游离水杨酸杂质限量检查的结果：即说明样品管与对照管的颜色深浅情况。,3. 肠溶片中阿司匹林含量测定的结果与分析： 测定数据：V0 =？；V = ？ 结果计算：要求将各实验数据代入下列公式，计算出阿司匹林肠溶片的标示量百分数。 （误差较大的计算结果，即标示量百分数不在90%-110%范围内的结果，需要认真分析说明结果误差较大的原因 4. 通过鉴别、检查及含量测定实验得出完整的结论： （如本品为阿司匹林肠溶片, 杂质游离水杨酸的量低于限量，阿司匹林的含量与药品标示量基本一致。本品为合格产品。）,14,实验类型与学时要求,1.实验类型：验证性实验 设计性实验 2.实验学时：30学时 五次实验 3.教学方式：集中授课，分小组实验,药物分析实验,实验一：异烟肼的杂质检查和异烟肼片的含量测定,1 实验目的,2 实验原理,3 仪器与试剂,4 实验步骤,5 实验结果,6 注意事项,7 思考题,17,1,2,掌握薄层色谱检查杂质的实验原理和操作技能。,掌握溴酸钾法测定异烟肼含量测定原理和操作方法。,18,1.游离肼的检查 异烟肼是一种不稳定的药物，可能会在制备时由原料引入游离肼，或在贮藏过程中降解产生游离肼. 肼是一种诱变剂和致癌物质，因此应对其进行限量检查。 本实验采用薄层色谱法检查，利用药物与杂质利用异丙醇-丙酮（3 : 2）下展开后，肼能与对二甲氨基苯甲醛反应生成腙显色，进行比较检查。,2.实验原理,2.片剂的含量测定 异烟肼结构中的酰肼基团具有还原性，在强酸性介质中可与溴酸钾定量反应，反应式如下：,3.实验材料、试剂及仪器,试剂,异烟肼片、硫酸肼、异丙醇、丙酮、乙醇、对二甲基苯甲醛、甲基橙、盐酸、溴酸钾等,仪器,分析天平、容量瓶、酸式滴定管、滴定台、硅胶G薄层板、点样毛细管、层析缸等,4.实验步骤,1.异烟肼中游离肼杂质检查 取本品，加水制成50 mg/ml的异烟肼水溶液，作为供试品溶液。 另取硫酸肼加水制成每1 ml中约含有0.20 mg（相当于游离肼50 g）的溶液，作为对照品溶液。 照薄层色谱法，吸取供试品溶液10 l和对照品溶液2 l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇-丙酮（3 : 2）为展开剂，展开，晾干，喷以乙醇制的对-二甲氨基苯甲醛试液，放置15分钟后检视。在供试品溶液主斑点前方与对照品溶液主斑点相应位置，不得显黄色斑点。,4.实验步骤,2.异烟肼片的含量测定 取异烟肼片20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于异烟肼0.2 g），置于100 ml容量瓶中，加水适量，振摇使异烟肼溶解并稀释至刻度，摇匀. 用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液25 ml，加水50 ml，盐酸20 ml与甲基橙指示剂1滴，溴酸钾滴定液（0.01667 mol/L）缓缓滴定（温度保持在1825）至粉红色消失. 每1 ml溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429 mg的C6H7N3O。,5.结果与分析,1. 游离肼的检查：薄层色谱示意图如右图所示，待展开结束显色后，供试品溶液中异烟肼主斑点呈橙黄色，对照品溶液中游离肼主斑点呈鲜黄色，且游离肼的比移值大于异烟肼的比移值。观察在供试品溶液主斑点前方与对照品溶液主斑点相应位置，是否显示鲜黄色斑点。可知异烟肼片中游离肼的含量是否低于药典规定的限量。,5.结果与分析,2. 异烟肼片的含量测定：,上式中，F为浓度校正因数，本实验中指溴酸钾滴定液（0.01667 mol/L）的浓度校正因数；T为溴酸钾滴定液（0.01667 mol/L）对异烟肼的滴定度；V为供试品消耗滴定液的体积数；W平均为药片的平均片重；W总为称取的药品细粉重量；稀释倍数为配置的药品体积是量取的续滤液体积的倍数；标示量为片剂“规格”项下的标示值(mg)。,中国药典（2010版）规定，本品含异烟（C6H7N3O）应为 标示量的95.0-105.0%。,6.注意事项,异烟肼片溶液过滤前需充分振摇，使其完全溶解。,过滤用的漏斗、烧杯必须干燥，并弃去初滤液。,滴定过程中指示剂褪色不可逆，滴定过程中必须充分振摇，避免滴定剂局部过浓造成指示剂以前褪色。,杂质检查过程中供试品和对照品点样后，须待斑点干燥后方可放入层析缸进行展开。,7.思考题,甲基橙指示剂如何判断滴定终点？,一. 实验目的,葡萄糖注射液的分析,1.掌握注射液性状，杂质检查以及含量测定的方法。 2.掌握剩余碘量法测定含量的方法。,二. 实验原理,葡萄糖注射液的分析,1. 鉴别（Fehling反应）葡萄糖分子中的醛基可以将 Fehling试剂（碱性酒石酸铜试液）还原，生成了氧化亚铜砖红色沉淀，用于葡萄糖的定性鉴别。,葡萄糖注射液的分析,红色沉淀,2. 含量测定（碘量法） 碘在碱性溶液中可将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，剩余的碘液用硫代硫酸钠滴定液滴定。 具体原理见下：,葡萄糖注射液的分析,碘与NaOH作用可生成次碘酸钠(NaIO)，葡萄糖(C6H12O6)能定量地被次碘酸钠(NaIO)氧化成葡萄糖酸(C6H12O7)。在酸性条件下，未与葡萄糖作用的次碘酸钠可转变成碘(I2)析出，因此只要用Na2S2O3标准溶液滴定析出的I2，便可计算出C6H12O6的含量。其反应如下：,葡萄糖注射液的分析, I2与NaOH作用：I22NaOH = NaIONaIH2O C6H12O6和NaIO定量作用：C6H12O6NaIO = C6H12O7NaI 总反应式：I2C6H12O62NaOH = C6H12O72NaIH2O C6H12O6作用完后，剩下未作用的NaIO在碱性条件下发生歧化反应：3NaIO = NaIO32NaI 在酸性条件下：NaIO35NaI3H2SO4 = 3I23Na2SO43H2O 析出过量的I2可用标准Na2S2O3溶液滴定：I22Na2S2O3 = Na2S4O62NaI,葡萄糖注射液的分析,三.实验方法 鉴别取本品，缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀。,葡萄糖注射液的分析,2. 检查 （1）pH值 应为3.2 5.5。 （2）5-羟甲基糠醛 精密量取本品适量（约相当于葡萄糖1.0 g），置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在284 nm 的波长处测定，吸收度不得大于0.32。,葡萄糖注射液的分析,3. 含量测定（剩余碘量法） 精密量取本品适量0.5 ml(约相当于葡萄糖50 mg)，置碘瓶中，加蒸馏水10ml，精密加入碘滴定液（0.05 mol/L）10 ml，分四次加入0.1 mol/L的氢氧化钠溶液20 ml，每次5 ml，每次加入时密塞振摇约10 s，加完后密塞，暗处放置10 min，加稀硫酸2 ml，用硫代硫酸钠滴定液（0.1 mol/L）滴定至近终点（呈微黄色），加淀粉指示剂1 ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1 m1碘滴定液（0.05 mol/L）相当于9.908 mg的葡萄糖(C6H12O6.H2O)。,葡萄糖注射液的分析,中国药典（2010版）规定，本品为葡萄糖或无水葡萄糖的灭菌水溶液，含葡萄糖（C6H12O6H2O）应为标示量的95.0105.0%。,葡萄糖注射液的分析,四. 实验结果与讨论 记录各项实验结果，并针对实验结果和实验过程中的特殊现象进行讨论。 0.5 ml的10%葡萄糖注射液相当于50 mg的葡萄糖（C6H12O6H2O），应消耗碘滴定液（0.05 mol/L）体积为： 允许5的误差，碘消耗体积应该为5.05 ml 5%，即为4.805.30 ml。,葡萄糖注射液的分析,五.思考与分析 写出剩余碘量法的化学方程式。 碘量法的误差有哪些?如何避免？,葡萄糖注射液的分析,附注： 1. 硫代硫酸钠滴定液（0.1 mol/L） 取硫代硫酸钠约26 g与无水碳酸钠（Na2CO3）0.20g，加新沸过的冷水适量使溶解成1000 ml，摇匀，放置个月后滤过。,葡萄糖注射液的分析,2. 硫代硫酸钠滴定液（0.1 mol/L）标定 取在120干燥至恒重的基准重铬酸钾0.15g，精密称定，置碘量瓶中，加水50ml使溶解，加碘化钾2g，轻轻振摇使溶解，加稀硫酸40ml，摇匀，密塞，暗处放置10分钟，用水250ml稀释，用本液滴定至近终点时，加淀粉指示液3ml，继续滴定至蓝色消失而显亮绿色，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的硫代硫酸钠滴定液（0.1 mol/L）相当于4.903 mg的重铬酸钾，根据本液的消耗量与重铬酸钾的取用量算出本液的浓度，即得。,葡萄糖注射液的分析,实验二：阿司匹林肠溶片的鉴别和含量测定,一、实验目的 1. 掌握水杨酸类药物的鉴别反应实验原理。 2. 掌握比色法检查阿司匹林片剂中游离水杨酸的实验原理。 3. 掌握两步滴定法测定阿司匹林片剂中药物含量的实验原理。,42,二、实验操作及原理,1. 鉴别原理 ：阿司匹林加热水解后导致游离水杨酸产生，水杨酸及其盐在中性或弱酸性条件下（pH值4.0-6.0），可以用三氯化铁溶液鉴别。 操作：取本品的细粉适量（约相当于阿司匹林0.1g），加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化铁试液1 滴，即显紫堇色。,43,2. 杂质检查： 游离水杨酸含有酚羟基，可与高铁盐反应显紫堇色，因此，将适量阿司匹林供试品溶液与一定量水杨酸对照品溶液生成的色泽对比，即可控制阿司匹林中游离水杨酸的含量（比色法）。,44,二、实验操作及原理,二、实验操作及原理,检查（游离水杨酸）取本品5 片，研细，用乙醇30 ml分次研磨，并移入100 ml量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即滤过，精密量取滤液6 ml，置50 ml纳氏比色管中，用水稀释至50 ml，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液3ml（硫酸铁铵溶液配置：取1 mol/L盐酸溶液1ml，加硫酸铁铵指示液2 ml后再加水适量使成100 ml），摇匀。 30秒钟内如显色，与对照液（精密量取0.01水杨酸溶液4.5 ml，加乙醇3 ml，0.05酒石酸溶液1 ml ，用水稀释至50 ml，再加上述新制的稀硫酸铁铵溶液3ml，摇匀）比较，不得更深(1.5)。,45,3. 含量测定：通过两步滴定法完成，由于阿司匹林中存在酸性的稳定剂，所以不能用氢氧化钠直接滴定，必须使用两步滴定法。首先用氢氧化钠滴定液中和制剂中其它的酸性物质和阿司匹林上游离的羧酸：,46,二、实验操作及原理,3. 含量测定 取本品40片，研细，用中性乙醇70 ml，分数次研磨，并移入100 ml量瓶中，充分振摇，再用水适量洗涤研钵数次，洗液合并于100 ml量瓶中，再用水稀释至刻度，摇匀，滤过。 精密量取滤液10 ml（相当于阿司匹林0.3 g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20 ml，振摇，使阿司匹林溶解。 加酚酞指示液3 滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至溶液显粉红色。,47,二、实验操作及原理,二、实验操作及原理,然后在加入过量的氢氧化钠滴定液，加热水解，氢氧化钠中和水解所产生的醋酸，然后用硫酸回滴，测得中和醋酸所消耗的氢氧化钠的量。该消耗量和阿司匹林的摩尔比为1:1。,48,再精密加氢氧化钠滴定液（0.1 mol/L）40 ml，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05 mol/L) 滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02 mg C9H8O4。,49,二、实验操作及原理,四、计算,片剂按标示量计算的百分含量定义是： 上式中，V0和V分别为空白试验和样品试验时消耗硫酸滴定液的体积（ml）； F为硫酸滴定液浓度（0.05mol/L）校正因数； T为氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）的滴定度； W为供试品片粉的称取量（g）； W为平均片重（g）； 标示量为片剂“规格”项下的标示值（mg）。,50,五、实验结果与讨论 记录鉴别、检查和含量测定的结果，并对其讨论。,51,六、思考题 1）请写出阿司匹林肠溶片含量测定中含量的计算公式。 2）含量测定中为什么要在水浴上加热。,实验三复方磺胺甲噁唑片的质量分析,实验目的,1、熟悉复方制剂双波长计算分光光度法测定含量的原理。 2、掌握复方磺胺甲噁唑片实验的操作条件及原理。,实验仪器与试剂,仪器：全波长可见紫外分光光度仪、可见紫外分光光度仪、层析缸 试剂：磺胺甲噁唑、甲氧苄啶、乙醇、氢氧化钠、盐酸、氯化钾、氯仿、甲醇、二甲基甲酰胺,实验内容,双波长分光光度法：测定复方磺胺甲噁唑片（ChP）。不经分离，直接测定含量 主要成分：磺胺甲噁唑（SMZ）、甲氧苄啶（TMP） 测定方法： 定量依据：样品在测定波长（2）和参比波长（1） 处的吸收度的差（A）。 如测磺胺甲噁唑时，甲氧苄啶在两个波长下的吸光度的差为0.,复方磺胺甲噁唑的含量测定,波长的选择：被测组分的最大吸收波长作为测定波长（2） ，另选一参比波长（1），使干扰组分在这两个波长处的吸收相等。,1、原理,设样品在和处的吸光度分别为和，测定组分（为1）在和处的吸光度分别为 和 ，干扰组分（为2）在此二波长处的吸收度分别为 和 。,从以上的推导可以看出，用A作为定量的依据，可以消除干扰组分的干扰；又由于在一定条件下，E为一常数，所以A和浓度（C）有线性关系，因此可以用对照品比较法测定药物的含量。,测定原理： 设A与B的混合物，A为干扰物，B为被测物 在1处，A1 = A1A + A1B 在2处， A2= A2A + A2B A1A = A2A A = A2 - A1 =（A2A + A2B）- （ A1A + A1B ） = A2B - A1B,从以上的推导可以看出，用A作为定量的依据，可以消除干扰组分的干扰；,1、TMP（找到具有等吸收的波长 ） 2、SMZ（在波长和 2 处测量标准物质的A，并求差值Ar） 3、SMZ+TMP（在波长和 2 处测量供试品的A，并求差值Ax）,SMZ 2=257nm， 1=304nm,SMZ的紫外吸收光谱,甲氧苄啶（TMP）的紫外吸收光谱,61,TMP 2=239nm， 1=295nm,1、SMZ（找到具有等吸收的波长 ） 2、TMP（在波长和 2 处测量标准物质的A，并求差值Ar） 3、SMZ+TMP（在波长和 2 处测量供试品的A，并求差值Ax）,又由于在一定条件下，E为一常数，所以A和浓度（C）有线性关系，因此可以用对照品比较法测定药物的含量。 因为对照品和供试品配置的体积相等，所以：,计算公式,计算公式,式中，AX为供试品溶液稀释液的吸光度差值； AR为对照品溶液稀释液的吸光度差值； mR为SMZ对照品的称量（mg） m为样品的称量（g）； 为平均片重（g/片）。,测定磺胺甲噁唑片中的磺胺甲噁唑时，因为在257nm处，磺胺甲噁唑有最大吸收,甲氧苄啶吸收较小，并在304nm波长附近有一等吸收点，故选择257nm为测定波长（2），在304nm波长附近选择等吸收波长为参比波长（1）。 测定甲氧苄啶时，在239nm处甲氧苄啶有较大吸收、磺胺甲噁唑吸收较小，且在295nm波长附近有一等吸收点，故选择239nm作为甲氧苄啶的测定波长，在295nm波长附近作为参比波长。,精密称取在105干燥至恒重的磺胺甲噁唑对照品50mg与甲氧苄啶对照品10mg，分别置100ml量瓶中，各加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别作为对照品溶液(1) 与对照品溶液(2),2、对照品溶液的配制,3、供试品母液的制备,取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于磺胺甲噁唑50mg与甲氧苄啶10mg），置100ml 量瓶中，加乙醇适量，振摇15分钟使磺胺甲噁唑与甲氧苄啶溶解，加乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品母液。,稀释液的配制：精密量取供试品母液与对照品溶液(1)、(2)各1ml ，分别置50ml量瓶中，各加0.4氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀，即得。 参比波长和测定波长的确定：照分光光度法，取对照品溶液(2)的稀释液，以257nm 为测定波长（2 ），在304nm 波长附近（每间隔0.5nm ）选择等吸收点波长为参比波长（1 ），要求2 1 0 。 样液的测定：再在2 与1 波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液(1) 的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（）计算，即得。,4、磺胺甲噁唑稀释液的配制和测定,稀释液的配制： 精密量取上述供试品母液与对照品溶液(1)、(2)各2.5ml,分别置50ml 量瓶中，各加盐酸氯化钾溶液取0.1mol/L盐酸溶液75ml与氯化钾6.9g，加水至1000ml，摇匀稀释至刻度，摇匀，即得。 参比波长和测定波长的确定：照分光光度法取对照品溶液(1) 的稀释液，以239.0nm 为测定波长（2 ），在295nm 波长附近（每间隔0.2nm ）选择等吸收点波长为参比波长（1 ），要求2-1 0 ， 样液的测定：再在2 与1 波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液(2) 的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（），计算，即得。,5、甲氧苄啶稀释液的配制和测定,实验注意事项,注意取样量的换算 注意配制稀释液的溶剂 测定时，参比溶液不得混淆，比色皿一定要清洗干净 注意确定参比波长的方法,讨论与思考题,1、分别说明本品中磺胺甲噁唑和甲氧苄啶双波长法测定含量时波长选择的依据。 2、为何甲氧苄啶含量测定时供试液的稀释倍数与磺胺甲噁唑测定时的要不同？,实验四 三种中药制剂中黄芩的鉴别,三种中药制剂中黄芩的鉴别,一、实验目的： 了解和掌握中药制剂的提取方法 了解和掌握薄层色谱法在中药成分鉴别的应用,72,薄层色谱法是中药鉴别的主要方法，是快速分离和定性分析的一种重要实验技术，它是依据吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。薄层色谱层析操作方便，设备简单，显色容易，展开速度快，混合物易分离，分辨力高。,黄芩苷,黄芩苷的分子式为C21H18O11， 分子量为446.35。理化性质：本品为淡黄色结晶粉末。熔点：223，淡黄色细针晶（甲醇），熔点：223225。药理作用主要有