药物的杂质检查药物分析学习考试.ppt

1,第三章 药物的杂质检查,第一节 概述 第二节 一般杂质的检查方法 第三节 特殊杂质的检查方法,第三章,2,第一节 概述,第三章,一. 药物的纯度概念与要求,药物的纯度与杂质 药物的纯度：指药物的纯净程度。 药物的杂质：任何影响药品纯度的物质。,3,2 .控制药物中杂质的意义 研究发现，药物在临床使用中产生的不良反应除了与药品本身的药理活性有关外，有时也药品中存在的杂质也有很多关系。 例如：青霉素类抗生素-聚合物-引起的过敏反应 所以规范地进行杂质的研究，并将其控制在一个安全，合理的限度范围之内，将关系到药品的质量可控性和安全性,4,第三章,评定药物的纯度：综合考虑药物的性状、杂质检查和含量测定。 杂质检查 是控制药物纯度非常重要的方面。 药物的纯度检查也称为杂质检查。,5,第一节 概 述,3. 药用规格与试剂规格,共同点：均规定所含杂质的种类和限量. 不同点： 符合纯度要求的药品为药用规格,主要从 用药安全、有效和对药物稳定性等方面 考虑,只有合格品和不合格品.,6,第三章,第一节 概 述药物的纯度要求,b.化学试剂的规格是从杂质可能引起的化学变化对使用的影响加以规定,它不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用. 化学试剂一般分为4个等级基准试剂、优级纯或特种试剂(光谱纯、色谱纯)、分析纯和化学纯,7,第三章,例如：硫酸钡（BaSO4） 试剂规格 对酸溶性钡盐不做检查. 检查：氯化物、铁、灼烧失重等 药用规格 如存在酸溶性钡盐则导致 医疗事故. 检查：酸溶性钡盐、重金属、砷盐等,化学试剂不能代替药品使用,8,第三章,二. 杂质的来源与种类,药品质量标准中杂质系指在按照国家有关药品监督管理部门依法批准的规定工艺和规定原辅料生产的药品中，由其生产工艺或原料带入的杂质，或者贮存过程中产生的杂质。 杂质的主要来源：生产过程中引入 贮存过程中产生,9,5. 合成工艺中使用的设备、器皿可能 引入重金属、砷盐等。,1.合成工艺中未反应完全的原料、 合成中间体、副产物等； 2. 生产制剂中原辅料带入的杂质,3.低效、无效以及有毒异构体和多晶型 4.残留的试剂及有机溶剂；,（一） 生产过程中引入的杂质,10,第三章,例： 阿斯匹林由水杨酸乙酰化制得,11,第三章,制剂过程中可能产生新物质,如： 制备过程中加热灭菌 盐酸普鲁卡因注射剂 进一步脱羧转化 对氨基苯甲酸 苯胺 引起毒性反应,12,第三章,(1)贮存的条件不当,(2)包装不当,(二） 贮藏过程中引入的杂质,13,第三章,14,第三章,例2： 四环素在酸性条件下可发生差向异构化反应, 生成差向四环素(毒性高、活性低),15,第三章,药品质量标准中的杂质不包括变更生产工艺或变更原辅料而产生的新的杂质； 不包括掺入或污染的外来物质,注意的几点问题,16,第三章,按来源可分为,一般杂质 指在多种药物的生产和贮存过程中容易引入的杂质. 如：酸、碱、水分、氯化物、砷盐等。,特殊杂质 指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质，包括：化学反应的前体、中间体、付产物和降解产物等。,（三）杂质的种类,17,第三章,必须重视异构体和多晶型对药物有效性和安全性的影响. 控制药物中低效、无效以及具有毒性的异构体和多晶型。,18,按理化性质分为,1.有机杂质 工艺中引入的杂质和降解产物等，可能是已知的或未知的、挥发性的或不挥发性的。由于这里杂质的化学结构一般与活性成分相似或具渊源关系，故通常又称为有关物质。 2. 无机杂质 指在原料药剂制剂生产或传递中产生的杂质，这些杂质通常是已知的，主要包括：反应试剂、配位体、催化剂、重金属、其他残留的金属、无机盐、助滤剂、活性碳等。,19,3. 残留溶剂 指在原料药及制剂生产过程中使用的有机溶剂。 4. 对映异构体,20,第三章,1 杂质限量,在不影响药物疗效、稳定性及不发生毒性的前提下,药物中所含杂质的最大允许量.,百分之几表示( %) 百万分之几表示( ppm),限量表示方 法,三. 杂质的限量,21,第三章,2 杂质限量检查方法,对照法 灵敏度法 比较法,杂质限量的控制方法分为：限量检查法，杂质含量测定法（外标法）,22,操作: 平行原则.,管2 （对照管）,管1 （样品管）,第三章,取一定量被检杂质的标准溶液与一定量供试品在相同条件下处理后, 比较反应结果, 判断供试液中所含杂质是否符合规定.,（1）对照法,23,在供试品溶液中加入一定量的试剂,在试验条件下反应,不得出现正反应，判断供试品中杂质是否符合规定。,第三章,如：纯化水中氯化物的检查,5滴 1mL,（2）灵敏度法,24,取一定量供试品,在规定条件下测定待检杂质的参数（吸光度，薄层斑点，峰面积等） 与规定限量比较, 判断供试品中杂质限量是否符合规定.,第三章,（3）比较法,25,例：肾上腺素中酮体的检查,第三章,供试品液(2.0mg/ml),盐酸溶液,样品,(0.05mol/L),A310nm,规定： A310nm0.05,26,例如：对照法写成：,3 限量计算公式,第三章,27,对于制剂，杂质限量表示为标示百分含量，如盐酸普鲁卡因注射液中，对氨基苯甲酸的限量是不低于标示量的1.2%。,28,注意: 单位是否统一 供试品取量部分还是整体 已知其中三个量可计算另一个量,第三章,29,例1. 对乙酰氨基酚中氯化钠的检查,对照品溶液: 标准NaCl溶液(10gCl-/ml),方法：取5.0ml同法操作比较,浊度不得更大. 计算：氯化物限量是多少(% )？,第三章,30,规定：含重金属百万分之五(5ppm) 计算：应取标准铅溶液(10gPb/ml)多少ml？,例2. 葡萄糖中重金属的检查,第三章,方法：,31,一 氯 化 物 检 查 法,1. 原理 利用氯化物在硝酸酸性条件下与硝 酸银反应, 生成氯化银白色浑浊液, 与一 定量标准氯化钠溶液在相同条件下产生 的氯化银浑浊程度比较, 浊度不得更大. Cl-+Ag+ H+ AgCl,第三章,32,2操作方法,样品管,对照管,第三章,葡萄糖中氯化物检查,1.0mL,用水稀释至50mL,6.0mL,0.60g,0.01%,(浓度：10gCl/ml),一 氯 化 物 检 查 法,33,3. 结果观察方法,黑色的背景上 自上而下的观察,对照管,样品管,34,4注意事项及讨论,平行试验 加稀硝酸的目的 氯化物的最适检测浓度范围 放置5min的目的 供试品溶液有色时的处理方法 有机药物中有机氯杂质 排除主药的干扰,第三章,35, 供试品溶液有色时的处理方法,内消色法 如氯法齐明（棕红色）中氯化物的检查.,第三章,除去样品中的氯,36,在碱性溶液中加热使水解，使有机氯杂质形成氯化物，再依法检查。,药物中有机氯杂质,37,排除主药的干扰,碘中氯化物和溴化物的检查 取本品1.0g，置乳钵中，分次加水40ml研细后，过滤，过滤中加少量锌粉使褪色；分取溶液10ml，依次缓缓加氨试液5ml与硝酸银试液5ml，放置5分钟，过滤，滤液移至50ml纳氏比色管中，加水使成40ml，滴加硝酸使遇石蕊试纸显中性反应后，再加硝酸1ml与水适量使成50ml，与对照液比较，不得更浓。,38,二 重 金 属 检 查 法,重金属系指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质. 如：Ag、Pb、Hg等. 重金属存在影响药物的稳定性及安全性. 铅易在体内积蓄中毒,以Pb为代表.,第三章,1.重金属的概念,39,二 重 金 属 检 查 法,适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物.,第三章,第一法 硫代乙酰胺法,40,二 重 金 属 检 查 法,1 原 理,41,甲管,乙管,丙管,2 操作方法,42,判断结果： 当丙管的颜色不浅于甲管时，乙管的颜色不得深于甲管。 当丙管的颜色浅于甲管时，应取样按第二法重新检查。 如在甲管中滴加稀焦糖溶液或其它无干扰的有色溶液，仍不能使颜色一致时，应取样按第二法检查。,43,3.结果观察：,对照管,样品管,44,二 重 金 属 检 查 法, 标准铅溶液浓度 硫代乙酰胺试液 溶液的pH 供试品溶液有颜色时的处理 干扰物的排除方法,第三章,4讨论,45,二 重 金 属 检 查 法, 标准铅溶液浓度,适宜目视比色的浓度范围:每27ml溶液中含10g20 g相当于： 铅标准溶液含Pb2+ 10g/ml ： 12ml,第三章,46,二 重 金 属 检 查 法, 硫代乙酰胺试液,H2S试液：恶臭和毒性；不稳定；易被空气氧化而析出硫；浓度难以控制.,第三章,改用硫代乙酰胺为显色剂（95版药典）硫代乙酰胺在实验条件下水解产生H2S,与重金属离子反应.,47,二 重 金 属 检 查 法,pH在3.03.5时, 呈色较完全. 酸度增大, 呈色变浅甚至不呈色.,第三章,溶液的pH对于金属离子与硫化氢呈色影响较大., 溶液的pH,48,二 重 金 属 检 查 法, 供试品溶液有颜色时的处理,第三章,a.外调色法 b.内消色法,49,二 重 金 属 检 查 法, 干扰物的排除方法,干扰：弱酸性溶液中Fe3+氧化H2S析出S,产生混浊影响检查.,供试品中微量高价Fe3+存在,第三章,如：葡萄糖酸亚铁中重金属的检查.,排除：加入抗坏血酸使Fe3+还原为Fe2+.,50,二 重 金 属 检 查 法,1.原理 供试品先炽灼破坏后,使有机结合的重金属游离, 再按第一法检查.,第三章,第二法 炽灼后硫代乙酰胺法,适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇的有机药物.,51,二 重 金 属 检 查 法,2. 操作,第三章,缓缓炽灼 放冷 H2SO4 0.5-1.0ml 供试品 炭化 加热 HNO3 500-600 H2SO4 除尽 放冷 完全灰化 蒸干 HCl 2ml 水15ml 中性 甲管 蒸干 氨试液 按照第一法操作,52,供试品试液 蒸干 加醋酸盐缓冲液+水 微热溶解后 移至乙管 加标准铅溶液+水 乙管 甲管显示的颜色不得深于乙管,53,二 重 金 属 检 查 法,a. H2SO4炭化使有机结合的金属释放；并成硫酸盐,第三章,3. 讨 论,b. HNO3使得到残渣进一步氧化， 破坏完全；要除尽氧化氮。 c. 炽灼温度严格控制：500-600；,d. HCl使重金属变成可测定的盐酸盐。,54,二 重 金 属 检 查 法,e. NH3 T.S （用酚酞）中和多余的盐酸；,第三章,3. 讨 论,f. 含钠盐或氟的有机药物在炽灼时 改用铂坩埚或硬质玻璃 (玛瑙) 蒸 发皿. 如：盐酸氟奋乃静中重金属检查,55,二 重 金 属 检 查 法,第三章,第三法 硫化钠法,显色剂,1. 原理,56,二 重 金 属 检 查 法,适用于难溶于稀酸但能溶于碱性溶液的药物 如：磺胺类与巴比妥类药物,第三章,57,二 重 金 属 检 查 法,3. 讨论,Na2S 对玻璃有腐蚀性,久置产生絮状物, 应临用新配.,第三章,2. 方法,58,(二) 白田道夫法,(一) 古蔡氏法,(三) Ag-DDC法,第三章,三 砷 盐 检 查 法,59,三 砷 盐 检 查 法,(一) 古蔡氏法（Gutzeit）,1. 原 理,60,第三章,C,三 砷 盐 检 查 法,61,3 操作,供标,62,4. 讨 论,1)试剂的作用,a. KI的作用还原剂：As5+As3+,第三章,三 砷 盐 检 查 法,63,第三章,三 砷 盐 检 查 法,. (As5+As3+) 加快反应速度,b.酸性SnCl2的作用,64,. 将I2再还原为I-，促进AsH3不断生成,65,第三章,三 砷 盐 检 查 法,. SnCl2与Zn粒表面形成Zn-Sn齐 起去极化作用,使氢气均匀而连续地发生.,66,第三章,三 砷 盐 检 查 法,c.PbAc2棉花的作用,排除硫化物的干扰,67,a. 供试品是硫化物,亚硫酸盐,硫代硫酸盐,排除方法：加入浓硝酸处理,第三章,干扰物的排除,三 砷 盐 检 查 法,68,Fe3+能消耗还原剂(KI、SnCl2), 并能氧化砷化氢.,排除方法：先加酸性SnCl2试液使 Fe3+ Fe2+,第三章,三 砷 盐 检 查 法,b. 供试品是铁盐(Fe3+),69,c. 供试品是环状结构的有机药物 形成共价键结合的砷化物,解决方法：进行有机破坏 酸破坏法或碱破坏法,第三章,三 砷 盐 检 查 法,70,碱破坏法 a 加入氢氧化钙 500-600 C灼烧 例：酚磺酞 b 加入无水碳酸钠碱融 例：苯甲酸钠,第三章,三 砷 盐 检 查 法,酸破坏法 加稀硫酸与溴化钾溴试液 例：葡萄糖中砷盐检查,71,古蔡氏法特点,第三章,三 砷 盐 检 查 法,72,第三章,三 砷 盐 检 查 法,(二) 白田道夫法,对含锑药物中砷盐的检查不能用古蔡氏法,需用白田道夫法.,73,第三章,三 砷 盐 检 查 法,1. 原 理,SnCl2在HCl中能将砷盐还原为棕褐色的胶态砷, 与一定量的标准砷溶液按同法处理后进行比较, 判断供试品中砷盐的限量.,74,2. 白田道夫法的特点,优点：不受Sb干扰,缺点：灵敏度低 20gAs2O3/10ml 加入少量HgCl2,灵敏度提高至2 gAs2O3（1.5 gAs）/10ml.,第三章,三 砷 盐 检 查 法,75,(三) 二乙基二硫代氨基甲酸银法 (Ag-DDC法) silver diethyldithiocarbamate,第三章,本法不仅用于砷盐的限量检查, 而且可用作微量砷盐的含量测定.,76,第三章,1. 原 理,AgDDC溶液,77,2. Ag-DDC法的特点,a 灵敏度高 0.5 gAs/30ml b 可目视或仪器测定,还可定量 c Sb干扰小（500g）,第三章,三 砷 盐 检 查 法,78,四 铁 盐 检 查 法,第一法 硫氰酸盐法,1. 原理 铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配离子,与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较.,第三章,79,四 铁 盐 检 查 法,第三章,2. 操作,?,?,?,供试液管与对照液管颜色不一致怎么办?,80,六 炽 灼 残 渣 检 查 法,1、炽灼残渣定义,81,2. 方法,82,恒重：两次炽灼的重量差异0.3mg,炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼30分钟后进行。,灰分= 残渣及坩埚重 - 空坩埚重,83,问题：如果残渣需进行重金属检查需加热温度是多少？,84,七 干 燥 失 重,1、定义：药物在规定条件下，经 干燥后所减失的量。,干燥至恒重：两次干燥后的重量差异0.3mg,第二次称重应在实验条件下继续干燥1hr后进行。,85,七 干 燥 失 重,2、干燥失重的内容物：水分、挥发性物质等。,3、测定方法,常压恒温干燥法： 一般烘箱，105干燥至恒重。适用于受热稳定的药物。,86,七 干 燥 失 重,干燥剂干燥法： 常用干燥剂：变色硅胶、P2O5 、硫酸适用于受热分解或易挥发的药物。,减压干燥法与恒温减压干燥法：用减压干燥器、恒温减压干燥箱。 适用于mp较低，受热不稳定，水分难除掉。,87,在程序控制温度的情况下,测定物质的物理、化学变化与温度关系的一类仪器分析方法. 研究药物的多晶型、纯度、热稳定性等,七 干 燥 失 重,热分析法,88,(一) 热重分析法（TGA） (二) 差示热分析法（DTA） (三) 差示扫描量热法（DSC）,89,八 水 分 测 定 法,Ch.P收载测定药物水分方法有： 费休氏法和甲苯测定法 费休氏法可准确测定药物中的 结晶水、吸附水和游离水。 应用具有内酰胺和酰胺 结构的药物及有引湿性的药物。,90,1. 原理：,2. 计算,供试品水分的含量,91,A-供试品所消耗费休氏试液的体积（ml） B-为空白所消耗费休氏试液的体积（ml） F-为每1ml费休氏液相当于水的重量（mg） W-为供试品的重量,92,讨论： 费休氏试液中无水吡啶、无水甲醇的作用。 加入无水吡啶能定量地吸收产物HI和SO3使反应向正方向进行;无水甲醇使硫酸酐吡啶稳定,93,2. F值用一定量的水标定; 3. 终点指示:碘颜色的变化（淡黄红棕色），永停滴定法,94,九 残 留 溶 剂 测 定 法,药物中的残留溶剂系指在原料 药或辅料的生产中，以及在制剂制 备过程使用的，但在工艺过程中未 能除去的有机溶剂。,Ch.P2005采用GC法检查残留有机溶剂,95,对三类有机溶剂规定了限量 1、色谱条件： 采用的色谱柱：填充柱 毛细管柱,96,检测器： 火焰离子化检测器（FID) 电子捕获检测器(ECD) 前者是常用的，对含碳氢的有机化合物；后者对含卤素的残留溶剂。,97,2. 系统适应性实验 理论板数：填充柱大于1000 毛细管柱大于5000 分离度大于1.5 重复性:n=5，内标法 RSD 5 外标法 RSD 10,98,八 有 机 残 留 溶 剂,溶液直接进样法 毛细管顶空进样法 毛细管顶空进样程序升温法,适用于挥发性大的组分； 样品处理简单，可避免供试品中非挥发性组分对色谱柱的污染。,3. 进样方法：,99,100,第三章,特殊杂质,是指在该药物生产和贮藏过程中,根据其生产方法、工艺条件及药物本身结构性质可能引入的特有杂质. 阿司匹林水杨酸 盐酸普鲁卡因注射液对氨基苯甲酸,101,特殊杂质的检查法,二、光谱分析法,一、色谱分析法,三、物理分析法,四、化学分析法,102,色谱法 (一) 薄层色谱法(TLC) (二) 高效液相色谱法(HPLC) (三)气相色谱法(GC) （四）毛细管电泳法（HPCE）,一 色 谱 法,103,根据药物与杂质对吸附剂的吸附或对展开剂的解析能力不同(Rf值的差异), 加以分离和检查.,一 色 谱 法,(一)薄层色谱法(TLC),104,一 色 谱 法,本法灵敏、简便、快速； 不需特殊的设备、费用低； 分离和鉴定同步进行.,1. TLC法特点,105,一 色 谱 法,我国药典2005年版一部 1146 个品种中薄层色谱鉴别方法 1532项。,106,2.薄层色谱法应用 1) 杂质对照品法,适用于杂质已知并有杂质对照品的情况. 方法 根据杂质限量, 取供试品溶液和一定浓度的杂质对照品溶液,分别点于同一薄层板上展开,定位后 进行检查.,一 色 谱 法,107,例：盐酸左旋咪唑中的“噻唑盐酸盐”检查,供试品溶液：取本品配成0.10g/ml 杂质对照品溶液： 0.50mg/ml 吸取上述两种溶液各0.5l点于同一硅胶G板 展开剂：甲苯甲醇冰醋酸(45:8:4) 显色剂：碘蒸汽 判断：供试品中与对照品相应的斑点对照品斑点,一 色 谱 法,108,一 色 谱 法,适用于杂质的结构不能确定或 无杂质对照品的情况. 要求供试品与所验杂质对显色 剂所显颜色相同，灵敏度接近。,2)供试品溶液自身稀释对照法,109,例：双氢青蒿素中“有关物质” 检查 供试液:用三氯甲烷配成：20mg/ml 对照液:0.4mg/ml(供试液稀释50倍) 判断:供试液的杂质斑点数1个, 且供试液的杂质斑点颜色对照液主斑点颜色.,110,3). 杂质对照法与供试品溶液自身稀释对照法并用 当药物中存在多个杂质，已知杂质有对照品，未知杂质可用供试品溶液自身稀释对照法。,111,选用质量符合规定的与供试品相同的药物作为对照品.,4) 标准药物对照法,一 色 谱 法,无适合的杂质对照品； 杂质斑点颜色与主成分斑点的颜色有差异，难以判断限量。,112,113,(二) 高效液相色谱法(HPLC),特点 分离效能高、应用范围广， 能准确、快速、分离分析同时进行.,114,高效液相色谱仪简图,115,慢 中等 快,色谱分离,116,1. 峰面积归一化法 2. 不加校正因子的主成分自身对照法 3. 加校正因子的主成分自身对照法 4. 加校正因子的内标法 5. 外标法,117,1.不加校正因子的主成分自身对照法,本法的前提是假定杂质与主成分的响应因子基本相同。一般情况下，如杂质与主成分的分子结构相似，其响应因子差别不会太大（0.91.1) S-供试品的对照品 R-杂质的对照品,118,不加校正因子的主成分自身对照法,例：醋酸氢化可的松中“有关物质”的检查,供试品溶液：本品约17mg 50ml 对照溶液：精密吸取1ml 100ml 取对照溶液20l进样，调节