临床检验进入仪器.ppt

,临床检验进入仪器 化时代的特点,50年代初:美国学者Coulter研制了血细胞计数仪 60年代:普遍应用，可检测RBC、Hb、WBC 70年代:增加了PLT的测定 70-80年代:开发了白细胞分群及RDW及MPV等新项目 90年代:增加了白细胞分类、网织红细胞技术、幼稚细胞检 出等指标,血液的组成,全血,血液的理化性质,血 液 特 性,红细胞的悬浮稳定性,粘滞性,凝固性,常用的检测项目,一.红细胞（red blood cell,RBC）,脱核,48h,红细胞计数（red blood cell count，RBC）: 测定单位体积血液中红细胞的数量,(一)、血细胞分析仪的原理,（一）细胞计数及体积测定原理 1、电阻抗检测原理(库尔特原理) 血细胞是相对不良的导体,脉冲信号经放大、甄别、整形送入计数系统,2、流式细胞术加光学检测原理,流式细胞术加光学检测原理,(二).显微镜计数,红细胞显微镜计数法指用等渗的稀释液将血液稀释一定倍数后，滴入计数板中，在显微镜下计数一定范围内的红细胞数，经换算即可求得每升血液中的红细胞数,(三).方法学评价,血细胞分析仪法：操作简单、效率高、重复性好适合于大批量的标本 集中监测 缺点：仪器昂贵，准确性取决于仪器的性能及工作状态，使用前需进行仪器 的校准，坚持日常质控,显微镜计数法：操作简单、费用低廉，试用于基层医疗单位及分散就诊 缺点：费时，重复性差，结果的准确性取决于操作者的技术水平， 作为仪器检验的校准,氧合血红蛋白（HbO2）,还原血红蛋白（Hbred）,高铁血红蛋白（Hi）,碳氧血红蛋白（HbCO）,氰化高铁血红蛋白,1.光谱特性,578nm和540nm处有吸收光带 556nm处有吸收光带 572nm和535nm处有吸收光 634nm和578nm处有吸收光带 540nm处有吸收光带,2. 血红蛋白测定,HICN法 SLS-HB法 SLS(十二烷基月桂酰硫酸钠),氰化高铁血红蛋白测定法,原理： 除SHb外，其余Hb均可被高铁氰化钾氧化为Hi。后者再与试剂中的CN结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白（HiCN），呈棕红色，吸收峰在540nm处。 毫摩尔消光系数为44L/mmol.cm,方法学评价,该方法优点操作简便。结果较稳定，试剂容易保存，除SHb外的所有血红蛋白均可转化。 HiCN法被列为国际血红蛋白测定的参考方法。 致命的弱点是KCN有剧毒，此外高白细胞和高球蛋白血症可致混浊。,图表法,K=Hb/A,血红蛋白（g/L),A,十二烷基硫酸钠(SDS)血红蛋白测定法,优点： 无毒性 缺点： 破坏白细胞，不适于同时具有计数白细胞和Hb定量两种功能和血细胞分析仪使用。,碱羟血红蛋白（AHD575）测定法 叠氮高铁血红蛋白(HiN3)测定法，但仍存在公害问题 溴代十六烷基三甲胺(CTAB)血红蛋白测定法 自动血细胞分析仪法,质量控制,样本： 采血部位：静脉血比毛细血管低10%-15% 结果分析：假性增高 HiCN参考液 质控物,红细胞计数和血红蛋白 测定的临床意义,正常参考值：,男性 女性 Hb 120160g/L 110150g/L RBC (4.05.5)x1012/L (3.5-5.0)x1012/L,红细胞和血红蛋白增高,定义 ： 成年男性 RBC6.0x1012/L Hb170 g/L 成年女性 RBC5.5x1012/L Hb160 g/L,生理性增高,高原生活者 重体力劳动者 新生儿,病理性增高,相对增高 剧烈呕吐 严重腹泻 大量流汗 大面积烧伤 绝对性增高 缺氧状态 肺气肿 肺心病 真性红细胞增多症,红细胞和血红蛋白减少,患者的红细胞和血红蛋白测定值低于正常参考值低限，即贫血。,血细胞比容测定 hematocrit,Hct；packed cell volume,PCV,定义： 抗凝血在一定条件下离心沉淀，即可得出压积红细胞在全血中所占体积的百分比，称为红细胞比容测定。红细胞比容的多少主要与红细胞数量及其大小有关。,血细胞比容（HCT） 电阻抗法 红细胞通过小孔时，形成的相应的脉冲的多少即红细胞的数目，脉冲的高度代表单个脉冲细胞的体积。脉冲高度叠加经换算即可得到红细胞的比积。,测定方法及评价,测定红细胞比容方法： 折射计法、粘度法、比重测定法、离心法、电阻抗法和放射核素法。其中放射核素法被ICSH定为参考法，非一般实验室所能开展。,温氏法,采血抗凝剂为EDTA盐或肝素 加标本 离心相对离心力2264g，离心30min。 观察结果 以还原红细胞层表面为准。 结果报告,血浆层 血小板层 白细胞层 有核红细胞层 还原红细胞层 带氧红细胞层,参考值,温氏法：男：40%-50% 女：37%-47% 微量法：男：0.4670.039 女：0.4210.054,临床意义,各项红细胞指数检测原理,MCV、MCH、MCHC、 RDW（红细胞体积分布宽度）均是根据仪器检测红细胞数、红细胞比积和血红蛋白量的实验数据，经内存电脑换算出来。,1.平均红细胞体积（mean corpuscular volume,MCV）,公式： MCV=,每升血液中红细胞比积,每升血液中红细胞个数,1015（飞升）,含义：每个红细胞平均体积,单位：飞升（1升1015飞升）,正常参考值： 82-92fl 血液分析法： 80-100fl,=,HCT,RBC/L,2平均红细胞血红蛋白含量（mean corpuscular hemoglobin MCH）,含义：每个红细胞所含的血红蛋白含量,单位：皮克（1克1012皮克）,公式：MCH=,每升血液中血红蛋白含量(Hb),每升血液中红细胞个数(RBC/L),1012（皮克）,参考值: 手工法：27-31pg 血液分析仪法：27-34pg,3平均红细胞血红蛋白浓度 (mean corpuscular hemoglobin concentration MCHC）,含义：每升红细胞所含的血红蛋白含量 单位：克/升,公式：MCHC=,每升血液中血红蛋白含量(Hb g/L),每升血液中红细胞比积(HCT),参考值: 320-360g/L,贫血的形态学分类鉴别表,MCV（fl） MCH（pg） MCHC（g/l） 正常参考值 8292 2731 320360 正常细胞性 正常 正常 正常 大细胞性 正常 正常 正常 单纯小细胞性 正常 正常 正常 小细胞低色素性 正常 正常 正常,红细胞平均值计算例题 女，25岁，血液标本测得RBC 2.61012/L，Hb 90g/L ,HCT 0. 26, 请计算红细胞平均值。并根据红细胞平均值判断贫血的类型。,红细胞平均值计算例题 MCH90 1012/2.6 1012=34.6pg MCV= 0. 26 1015/ 2.61012=100fl MCHC=90/ 0. 26 =346g/L 大细胞性贫血,英译汉,The PCV (packed cell volume) ,erythroyte volume,plasma volume and total blood volume (BV) have been determined by using the indirect method (T1824 ) to each of introduced California rabbits, Chinese white rabbits & erythrocyte volume were higher in high altitude than the low altitude with the breeds .,习题,英译汉,习题,在海拔3 000 m的西藏高原林芝,用间接测定法(T1824)对引入高原的加尼福尼亚兔、中国白兔和青紫兰兔的红细胞压积、血浆容积、红细胞容积、血液总量分别测定。,定义： 红细胞体积分布宽度是指血细胞分析仪测量一定数量的红细胞体积后，计算求得的反映外周血红细胞体积大小异质性的参数，用红细胞体积的变异系数来表示。 正常参考值：11.6%-14.0%,4.红细胞体积分布宽度,1鉴别缺铁性贫血和-珠蛋白生成障碍性贫血 1）共同点：小细胞性贫血，峰左移。 2）鉴别点： aRDW增高，峰底宽 bRDW正常，峰底窄 2缺铁性贫血的筛选诊断 为小细胞低色素性贫血，伴有RDW异常增高（RDW正常可排除）,RDW的临床意义：,3进行贫血的新的形态学分类（MCV/RDW）,网织红细胞（reticulocyte，Ret）：是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细胞。其胞质内残存多少不等的嗜碱物质RNA，经煌焦油蓝，新亚甲蓝活体染色法染色后，呈蓝色网状结构，此种红细胞即网织红细胞。 活体染色：离体的活细胞在未干燥固定前加染料的染色法。,测定项目 RET%、RET#、IRF、HFR、MFR、LFR、IRF IRF显示标本中网织红细胞与不成熟网织红细胞的百分比 可对骨髓抑制恢复等作出评价,测定方法 显微镜计数法 自动网织红细胞仪测定法,血液分析仪网织红细胞检测原理,利用流式细胞仪的方法进行计数 网织红细胞残留的RNA可与荧光染料结合，应用流式细胞仪测量发出特定的荧光进行测量。可分低荧光率（LFR），中荧光率（MFR）高荧光率（HFR,手工法及评价 玻片法： 容易使混合血液中的水分蒸发，染色时间偏 短，因此结果偏低 试管法： 容易掌握，重复性效好。被列为手工法网织红细胞计数的方法,手工计数是国内常用的方法，但精密度低，为提高其精密度 ： 1、使用米勒窥盘进行计数，规范了计算区域，减少了实验误差，使结果准确性有所提高 2、以网织细胞的绝对值进行报告,采用Miller窥盘 Retic（%）=（大方格内Retic总数/小方格内RBC总数9）100,参考值,相对值：成人 0.5%-1.5% 新生儿 2%5% 绝对值：成人 (24-84)109/L,临床意义,1.判断骨髓红细胞系统造血情况 网织红细胞增多 溶血性贫血时,网织红细胞可高达0.20以上 急性失血后5-10天，网织红细胞达高峰。2周后恢 复正常 缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血可正常或轻度增高 网织红细胞减少 再生障碍性贫血：网织红细胞百分比常低于0.5%。网织红细胞绝对值低于15109/L为诊断再生障碍性贫血的标准之一,2网织红细胞可作为疗效观察指标,RPI,网织红细胞比值100,2,病人血细胞比容,正常人血细胞比容,网织红细胞生成指数（reticulocyteproductionindex,RPI）,网织红细胞的生成相当于正常人的多少倍,“2”为网织红细胞成熟时间（天）,(一)正常红细胞形态,正常红细胞的大小较为一致,直径为6.77.7m,染色淡红色，中央着色较淡，为中央苍白区，其直径约为红细胞直径的1/3。,红细胞形态,两面微凹的圆盘形 正面观 为圆盘形 侧面观 单凹或哑铃状,(二)异常红细胞形态,1大小异常 2形态异常 3染色异常 4异常结构,1.红细胞大小异常 (1)小红细胞（microcyte）直径6m。常见于缺 铁性贫血、遗传性球形红细胞增多症。 (2)大红细胞（macrocyte）直径10m。 (3)巨红细胞(megalocyte)直径15m。常见于巨幼细胞性贫血。 (4)红细胞大小不均(anisocytosis),2.形态异常,(1)球形红细胞（spherocyte） (2)椭圆形红细胞（elliptocyte） (3)靶形红细胞（target cell） (4)镰形红细胞（sickle cell） (5)口形红细胞（stomatocyte） (6)棘形红细胞（acanthocyte） (7)裂片细胞（schistocyte） (8)红细胞形态不整（poikilocytosis）,(1)球形红细胞（spherocyte）细胞直径6m。厚度增加常大于2m。无中心浅染区，似球形。常见于遗传性球形红细胞增多症，自免溶贫等可见少量。,(2)椭圆形红细胞（elliptocyte）,(2)椭圆形红细胞：细胞呈卵圆形、杆形、长度可大于宽度3-4倍，最大直径可达12.5m，横径可为2.5m。遗传性椭圆形细胞增多症病人血涂片中此种红细胞可达25%，甚至高达 75%（正常人约占1%）。,(3)靶形红细胞（target cell）。常见于各种低色素性贫血。在珠蛋白生成障碍性贫血时尤易见到。,(4)镰形红细胞（sickle cell）形如镰刀状。 主要见于镰形细胞性贫血（HbS病)。,(5)口形红细胞（stomatocyte）正常人偶见4%。 主要见于口形红细胞增多症，口形红细胞百分 率可达10%以上。,(6)棘形红细胞（acanthocyte） 该红细胞表面有针尖状突起，其间距不规则。突起的长度和宽度不一。在-脂蛋白缺乏症病人的血 涂片中出现较多。也可见于脾切除后、酒精中毒性肝脏疾病、尿毒症。,(7)裂片细胞（schistocyte）为红细胞碎片或不完整的红细胞。大小不一。外形不规则，有各种形态如刺形、盔形、三角形、扭转形等。正常人血涂片中裂片细胞小于2%，弥漫性血管内凝血（DIC）出现较多。,(8)红细胞形态不整（poikilocytosis） 指红细胞形态发生各种明显改变的情况而言，可呈泪滴状、梨形、棍棒形、新月形等。最常见于巨幼细胞性贫血。可见骨髓增生异常综合征MDS骨髓纤维化。,3染色异常,(1)低色素性（hypochromatic） 红细胞的生理性中心浅染色区扩大，甚至成为环圈形红细胞，提示其血红蛋白含量明显减少，常见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、铁幼粒细胞性贫血。,(2)高色素性（hyperchromatic）,红细胞内中心浅染区缩小或消失，整个红细胞均染成红色，而且胞体也大。最常见于巨幼细胞性贫血。,(3)嗜多色性（polychromatic） 属于尚未完全成熟的红细胞，由于胞质中多少不等的嗜碱性物质RNA而被染成灰红色