血涂片的制备和细胞大小的测量.ppt

一、目的要求 1.掌握血涂片的制备方法； 2.认识红细胞及各种白细胞的典型形态； 3.掌握显微测微尺的使用方法。 二、实验原理 涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。 根据测量结果计算各细胞及细胞核的体积 椭球形：v=4ab2/3 a-长半径 b-短半径 圆球形：v=4r3/3 r-半径 圆柱形：v=r2h r-半径 h-高,三、实验用品 1.器材:医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片 、 双凹片（推片）。 2.试剂:Wrights染液：Wrights色素粉末0.1g，溶于60 ml甲醇。 四、实验内容、方法与步骤(见实验指导书) 1.血涂片的制备与血细胞的观察 2.显微测微尺的使用 五、实验报告 1.绘制各种不同类型的血细胞,并说明它们的主要作用； 2.任选5个红细胞，测量其直径，并计算出平均值。,采血前用70酒精棉球消毒人的指腹,采血,由于第一滴血中含单核白细胞较多，因此弃去第一滴血,推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧,再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状。,3045,两玻片的角度以3045为宜，轻轻将双凹片向前匀速推进，即涂成血液薄膜。,染色,待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴Wrights染液盖满血膜为止，染色13 min。然后滴加等量蒸馏水，使其与染液均匀混合，静置1015 min。用蒸馏水冲去染液，吸水纸吸干，镜检。,红细胞 也称红血球，是血液中数量最多的一种血细胞，无细胞 核，也无细胞器，主要功能是运输和交换氧和二氧化碳。,淋巴细胞 白细胞的一种。由淋巴器官产生，机体免疫应答功能 的重要细胞成分,单核细胞 是体积最大的白细胞。其细胞核常偏位，呈多形性， 如卵圆形、肾形、马蹄形、不规则形等,嗜中性粒细胞 即中性白细胞，呈圆形，胞质淡红色。胞核幼稚 型的呈杆状或马蹄形，成熟的呈分叶状，三叶的 较多见，中性粒细胞来源于骨髓的造血干细胞,嗜酸性粒细胞 是白细胞的一种，嗜酸性粒细胞增多的原因很多： 1.变态反应性疾病：如哮喘、荨麻疹、食物过敏和血管神经性水肿。 2.各种皮肤病：如天疱疮、疱疹性皮炎等,嗜碱性粒细胞 胞质内含有较大的、椭圆形的嗜酸性颗粒。这类 白细胞也具有吞噬功能。,显微测微尺的使用,显微测微尺是用来测量在显微镜下所观察到的物体的长度、面积的工具，包括镜台测微尺、目镜测微尺两部分。 在使用的过程中，镜台测微尺起标定作用，利用它可以确定目镜测微尺旋钮上每小格代表的实际长度。 目镜测微尺标定完成后，即可用于细胞样品的测量。,每格又可分为10个小格，每小格的实际长度为0.01mm=10m,总长0.1mm,镜台测微尺,总长1mm,共分为10格,目镜测微尺,可以通过旋转旋钮移动目镜测微尺中交叉线的位置,使用方法,1.取下目镜,将目镜测微尺的刻度面向下放入目镜中,旋上透镜； 2.将镜台测微尺盖片面朝上放在载物台上,用低倍镜观察, 调节焦距看清镜台测微尺的刻度； 3.移动镜台测微尺,同时转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺平行靠近,并将两尺的“0”点刻度线或某刻度线对齐.然后从左向右查看两尺刻度线另一重合处,记录重合线间目镜测微尺与镜台测微尺的格数.按下式计算目镜测微尺每格等于多少微米。 4.移去镜台测微尺，换血涂片，测量细胞长度。 细胞长度=目镜测微尺测量所占小格数目镜测微尺每 小格代表的实际长度,目镜测微尺的标定,na X= M,X:目镜测微尺每格的实际长度 a:镜台测微尺每格的实际长度 n:镜台测微尺的刻度数。 M:目镜测微尺的刻度数。,例如：镜台测微尺一小格为10m，在目镜测微尺“0”点到另一点与镜台测微尺正好重合，镜台测微尺的刻度数为5小格，当