第十一章动物实验技术.ppt

第十一章 动物实验技术,第一节 实验动物的固定、标记 第二节 实验动物的给药途径和采血方法 第三节 实验动物用药量的确定及计算方法 第四节 实验动物的麻醉和处死方法 第五节 动物实验基本设计,常用药物的最大给药量,人与实验动物之间药物剂量的换算,人与实验动物对同一药物的耐受性，动物比人大，即单位体重的用药量比人要大。 一般可按下列比例换算，每单位体重人的药量为1，则小鼠、大鼠为25-50，兔、豚鼠为15-20，狗、猫为5-10。,在新药药效研究中多以下列公式转换人及不同动物之间的药量：,人及不同实验动物之间药物量对应值,例如： 某药物在60kg体重的病人的剂量为21.0g.kg-1 . d-1， 一只5kg的猴为53.6 g.kg-1 . d-1， 一只10kg重的犬为40.4 g.kg-1 . d-1 ， 一只20g的小鼠则为260.6 g.kg-1 . d-1 。,实验动物的血样采取,一、小、大鼠 剪尾采血 此法每鼠可采10次以上。 小鼠每次0.1ml。 大鼠每次0.4ml。 眼眶后静脉丛采血 小鼠每次0.2-0.3ml。 大鼠每次0.5ml。,股动脉采血 小鼠每次0.5ml。 大鼠每次2.0ml。 二、豚鼠 耳缘切口采血： 0.5ml。 心脏采血： 足背正中静脉采血：,三、家兔 耳缘静脉采血：5-10ml。 耳中动脉采血：15ml。 心脏采血：20-25ml。 四、犬 前肢皮下头静脉和后肢外侧小隐静脉采血：10-20ml。 颈静脉采血： 心脏采血：,常用实验动物的 最大安全采血量与最小致死采血量,常用麻醉剂的用法及剂量,第五节 动物实验基本设计,一、设计原则 1.对照（antitheses）性原则： 是要求在实验中设立可与实验组比较，用于消除各种无关因素影响的对照组。 空白对照：不施加任何处理因素 实验条件对照： 不用处理因素，但施加某种与处理因素相同的实验条件。 标准对照 ： 用现有标准方法对照，如已知有效药物、公认标准疗法。,2随机（random）化原则 动物实验一般采用完全随机分配或分层随机分配。 小动物实验一般先配对或配伍，然后“对”内或“伍”内进行随机分配 大动物多半先分层，然后在层内随机分配。,3重复（repetition）的原则 指同一处理要设置多个样本例数降低试验误差。 应该在保证实验结果具有一定可靠性的条件下，确定最低的样本例数,一般估测的样本数 小动物(大鼠、小鼠、蛙、鱼)：每组10-30例,计量资料每组不少于10例, 计数资料每组不少于30例； 中等动物(豚鼠、家兔) 每组8-20例,计量资料每组不少于8例, 计数资料每组不少于20例； 大动物(犬、猫、猪、羊等) 每组6-20例,计量资料每组不少于6例, 计数资料每组不少于20例.,按统计学方法测算的样本数 n=22(t+t)2/2 n为样本含量，为标准差； t取有显著性的t分布值，t0.05=1.96； t为无显著性的t分布值，1-为实验检验能力，动物实验一般取1-=0.80，t0.20=0.842； 为处理组与对照组均值间的差异，可从预实验或文献资料库中获得。,举例： 给某种动物饲喂一种药物，预实验中每月体重增长比对照增加3015g（均值标准差）。设显著水平为95%，检验能力为80%，则正式实验所需样本含量n为： n=2152（1.96+0.842）2/302=3.93 即每组只需4只动物。,二、基本设计方法 单组比较设计 指在同一个体上观察实验处理前后某种观测指标的变化。 优点：能排除个体间生物差异。 缺点：不适用于在同一个体上多次进行实验和观察的情况。,配对比较设计 指实验前将动物按性别、体重或其它有关因素加以配对，以基本相同的两个动物为一对，配成若干对，然后将一对动物随机分配到两组中。 优点：减少两组实验误差及动物间的个体差异。 缺点：应考虑种属、品系、性别、年龄与体重、同父母、同胎次出生等因素对实验结果的影响。,举例：为研究VitE缺乏饲料对大鼠肝脏中VitA含量(u/mg)的影响，选取同性别(雌、雄各半)、同月龄(断乳1个月)、同体重(50g+2g)等正常大鼠配成10对，对每对中每只大鼠按随机数字表(或抽签)随机分配到给以正常饲料组和VitE缺乏饲料组，分饲条件相同的不同笼中，经1个月饲食后杀掉，按每对分别取肝脏，测得VitA含量(u/mg)如表。,完全随机化设计 将动物随机分配到处理组及对照组做实验观察。 优点：统计分析也比较简单，抗数据缺失能力较强。 缺点：对非实验因素缺乏有效控制 ，适用于实验对象同质性较好的实验设计。,举例：为比较小白鼠接种3种不同菌型伤寒杆菌(9D、11C、DSC1)后存活日数的差异，选择同品系、性别(雌、雄各半)、体重(土1s)、月龄(土2天)、生理精神状态、饲养条件等小鼠30只，依随机数字表随机分为3组，在相同条件下接种菌苗，后观察存活日数如下表。,随机区组设计 在动物实验时，可将一窝小鼠或大鼠划为一个区组，确定数个区组后，按区组随机化原则将各区组的动物随机分配到处理组和对照组。 优点：均衡性好，可减少误差，提高实验效率，统计分析也较简易。 缺点：抗数据缺失能力较低。若一个区组的某个动物发生意外，那么整个区组都得放弃，或不得已采取缺项估计。,举例：有人用4种不同种系的未成年大鼠做实验，每一种以同窝雌大白鼠3只，随机分配注射3种不同剂量的雌性激素(mg/100g)后，在相同条件下称其子宫重量(g)，见表：,析因设计 可以分析多种交互作用，但一般采用较简单的析因试验。当水平和因素过多，不但计算复杂而且解释困难。 举例：观察绝经促性腺激素(HMG)、绒促激素(HCG)及其交互作用，随机将20只幼雌大白鼠分成4组。第一组空白，第二组每天注射HMG l个单位，第三组每天注射HCG 20单位，第四组每天HMG l单位、HCG 20单位，一定时间后取卵巢称重，以每10g大白鼠体重卵巢mg数表示(mg/10g)，结果如表：,三、实验结果变异分析 实验间变异 处理会使对照组和实验组平均度量值发生变化，即实验间变异 。 降低实验间效应变异将减少对同一实验的重复性。 实验结果必须是建立在可重复实验的基础上。,实验内变异 包括：实施实验过程造成的变异、分析变异、个体内变异和固有的个体间变异。 通过明显的减少