检验与临床OCT实验室应用PPPT课件.ppt

检验与临床 检验及产品,检验一般了解,1检验科方法简单了解 2PCT 3CRP 4心脏标准物 5总结,检验科和实验室区别,检验科 ： 常规工作 量大 临床要求快 临床检验工作最基本要求 及时 方便 准确 临床检验人员对仪器及试剂要求 管用 好用 实用 实验室：特殊项目 科研为主 量少 检验项目：形态学 定性和定量,检验报告形式,一浓度分析 1定性 2定量 二形态报告 1细胞 2细菌 3管型,一按反应原理分类（定量）,1 用化学试剂测定方法叫化学法。如蛋白 钙 镁 2 用酶测定方法叫酶法。如葡萄糖 谷丙转氨酶 3用抗原抗体反应原理方法叫免疫法。HBsAg 4用原子吸收方法叫色谱法。钾 钠 5用电泳分离方法叫电泳法。蛋白电泳 高压液相色谱 6测定蛋白分子用酶联聚合反应即PCR方法。DNA 7生物传感器。血气 血糖,二按方法敏感性分类,1 超微量法 微克以下 皮克 纳克 一般用免疫发光法 激素 肿瘤标志物 2 微量法 毫克以下 微克 一般用金标法或胶乳法散射法 RF CRP 3 常量法 克以下 毫克 一般用生化法 白蛋白 甘油三脂,根据反应产物特性分,1比色 常用生化测定 2比浊 抗原抗体测定 3散射 可标记乳胶 4测定光强度 往往标记,主要反应方式,1液体反应 生化 免疫等成本低 线性宽 灵敏度高 2干式反应 干生化 免疫层析 渗滤法 相对灵敏度低 线性窄 成本高 往往单人份包装,标记技术分类,1 放射物质标记 2 荧光物质标记 3 酶物质标记 4 金标记（铁 铜 硒） 5 发光物标记,测定方法,1决定性方法 2参考方法 3常规方法 123的过程叫正确度传递 321的过程叫溯源,超微量分析（化学发光）,目前按方法形式分类 1 板式发光（包被在板上） 须洗涤和分离 反应手续多 反应 慢 均相发光 分洗涤和无洗涤二种 简单和反应快 发光按反应方式： 干式反应和湿反应 仪器分： 全自动 半自动,化学发光,免疫化学发光分： 1 酶底物发光（硷性磷酸酶）贝克曼 2 直接发光（丫叮脂） 西门子 3电发光（钌） 罗氏 4时间分辨荧光（铕） 德普 5微粒荧光 透景 6无须分离直接发光 博阳,方法学要求,1精密度 批内 批间 变异系数CV表示 2正确度 和目前公认结果比较 偏差5 3稳定性好 4反应快 5抗干扰能力强,分析仪器按反应状态分类,1 干式反应 万孚飞测 金标定量 2 湿式反应 生化仪 发光仪,四 按反应方便程度分类,1 手工法 2 半自动 3 全自动,仪器要求,1精密度好 CV5% 2可靠性好 3年内无故障 3操作方便 一看就会 检验科需要可靠的产品！成功成熟可靠,五 检验科应用趋势分类,简便化 POCT 2 整个实验室全自动,目前POCT技术种类,1 干化学 血糖 尿液 2 多层涂膜 强生 3 免疫金标记（层析或渗滤法） 各种金标 HCG 4 生物传感器 血气,即时检验（POCT）,目的：就地检验，结果提高医学工作效率。 定义：现场即刻进行分析，快速得到结果。 特点：无须专业培训可进行临床化学检测。 成本：单份贵，总成本低。降低医疗费用（治疗时间缩短） 理念：用最短时间、最简便而经济的技术，得到准确结果。 前景：随着生物技术进步，应用领域更多（家庭、病房、监护室、食品卫生、环境保护、禁毒、法医等）每年15%递增,POCT运用,1 运用范围会越来越广 医学 环保 食品卫生 ATP技术 2 POCT趋势 占整个检验比例会明显提高。,POCT在急诊医学中运用,1心肌损伤 项目 CKMM 肌红 肌钙 BNP 美国BIOSITE 加拿大RAMP 罗氏TropT 2感染性疾病 CRP PCT 挪威Nycocard 芬兰Orion Diagnostics 国赛 3 血气及代谢物,目前POCT技术种类,5 免疫发光标记 韩国iCHROMA 6 微型传感器类 血气 电解质 7 血凝类 间接明胶法TPPA 8 乳胶类 CRP 9 生物芯片 蛋白芯片 分子诊断 10 快速单份液体生化,PCT是什么？,性质：蛋白质 分子量13000 氨基酸116个 合成：在细菌感染的诱导下，除甲状腺c细胞外，可能是肝脏巨噬细胞、单核细胞、肠及肺的内分泌细胞分泌。 半衰期：19-24小时 浓度：正常人小于0.1ug/L,PCT目前测定有方法,快速检测：金标法 热电公司 乳胶法 南京 荧光法 万孚 德国B-H公司等 免疫发光法：罗氏 电发光 法国梅里埃 酶底物发光 新产业 鲁迷钠发光,样本要求,血浆（EDTA ,肝素 柠檬酸盐） 或血清 稳定性 ： 室温4小时,在一次内毒素刺激的人体试验中 不同的标志物的动力学变化,Reinhart K, et al. Crit Care Clin 2006;22;503-519,快速、高特异性的增长 在脓毒症情况下，3-6 小时即可检测到其水平的 增长 快速衰减 半衰期约20-24 小时 ， 可以快速反映治疗效果,在疾病监测方面，PCT有着自然的优势!,PCT的临床应用,1.脓毒症：各种微生物所致感染的全身炎症反应，同时伴有这些微生物或其毒素侵入血液引起疾病。 败血症 脓毒综合症 脓毒症休克 全身性炎症反应综合症（SIRS)是一种有特性临床反应。,SIRS至少含有以下二种或更多标准,1体温38C 或90次/每分 3呼吸频率20次/每分 4白细胞12000/uL或4000/uL SIRS主要由微生物感染所引起，其他非感染如严重缺氧，烧伤、急性胰腺炎等也可以造成。,炎症诊断试验,1，体温测量 2，白细胞计数和分类 3，血沉 4，血清蛋白电泳 5，CRP 6， IL-6 IL-8,PCT在脓毒血症应用,1， 区分是否细菌感染，越高感染病情越重 2，肺炎中应用 鉴别细菌性和病毒性 3，全身性真菌感染应用 4， 脑膜炎鉴别中应用 5，新生儿感染中应用,PCT监控具有高度感染的患者应用,1，重危患者 2，大手术后 3，器官移植,PCT在疗效观察中应用,1，脓毒症 2，多器官衰竭 3，休克 4，感染后手术治疗,CRP,1肝脏合成，结构五聚体 是一种急性时相反应蛋白。 2特点：本地很低，当受到刺激时（一般6小时）迅速升高可达1000倍。 3临床应用普遍。,CRP与PCT的应用比较,CRP:炎症过程的筛选 6小时后上升2天达高峰 CRP高提示病变存在。 PCT：诊断和监测细菌性疾病感染一个参数 是严重细菌性和真菌感染特异性标志。也是脓毒症和炎症活动有关多脏器衰竭的可靠指标。患者好转PCT比CRP反应快，而CRP有较长时间才下降。,CRP和PCT的比较,相同：都是急性时相反应蛋白 CRP是临床运用特点是炎症指标，在感染性炎症和非感染性炎症，组织损伤、局部和全身的轻度 中度 重度的感染和各种轻中度损伤中应用。 PCT运用在严重细菌感染及脓毒血症,CRP和PCT的比较,PCT指标在细菌感染方面相对特异 CRP指标相对特异性差 在病毒感染中PCT不升高，CRP会轻中度升高， 在细菌感染中CRP呈现一般中度以上升高，持续时间长，PCT只有在严重细菌感染时才会升高，治疗好转就下降。,检测项目主要临床意义,临床意义：共性有二点 1，诊断和鉴别诊断 2，疗效观察 PCT临床意义 PCT作为急性时相反应蛋白（APR)一种，一般认为在持续毒素刺激下，68小时开始升高,CRP临床意义,1主要用于各种损伤、感染、治疗等观察。 2超敏CRP主要用于心血管疾病。 BNP 主要用于慢性心衰的评估 肌钙蛋白 主要用于心肌损伤及梗死,PCT临床意义总结,PCT只有在严重细菌、真菌、寄生虫感染及脓毒症和多脏器功能衰竭时测定才有意义。 在自身免疫、过敏和病毒感染时不升高。 因此PCT在细菌性疾病鉴别、监控细菌性感染及病程预后估计等方面有意义。,检验科发展方向,临床检验发展基本要求：围绕 及时 方便 准确方针 1 整个检验科全自动 2 POCT（即时检验） 系统化 优点 溯源性 不准确度 4 信息化,提高内涵、把握方向、持续进步,1做企业或公司：诱惑多 最重要不是选择而是放弃 得到空间更大 坚信基本判断 项目找对 成功一大半 2生存法则：守住底线、创造空间 3确定方向：想做什么？能做什么？ 4市场要什么：不是你有我有。而是排他性即唯 一性 5社会需要什么：可靠、放心、方便、环保 最好创造新产业,目前市场上哪些品牌可以真正实现一步法加样？,PCT/心标等：明德、乐普、基蛋（金标半定量） CRP：迪倍思（金标半定量，加样后需补加缓冲液），其他品牌均需要加样前稀释/预处理,国赛CRP-散射比浊法,操作步骤：,禾柏CRP-散射比浊法,艾克美CRP-荧光免疫法,奥普CRP-金标法,凯创CRP-金标法,热景CRP-上转发光法,检验科需要项目和方法,检测简单方便 检测快速，成本低， 高的特异性和敏感性 能够反映疾病的严重程度 早期准确诊断 反映预后和治疗的疗效 全自动