GBT22942-2008蜂蜜中头孢唑啉头孢匹林头孢氨苄头孢洛宁头孢喹肟残留量的测定液相色谱-串联质谱法.pdf

ICs 67.050 X O 4 中 华 人民 共 和 国 国 家 标 准 GB/T229422008 蜜头 中头孢唑啉、 头孢匹林 、 头孢氨苄 、 孢洛宁、 头孢喹肟残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of cefazolin, cephapirin, cephalexin, cefalonium, cefquinome residues in honey-LC-MS-MS method 2008-1 31发 布 09-O 01实 施 蚰 员 雕 委 检理 瓣 管 槐 M 酮 标 踟眩 轵 国 中中 发布 食品伙伴网 GB/T22942-2008 日 刂 舀 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位 :中华人 民共和国秦皇岛出人境检验检疫局 。 本标准主要起草人 :李学民、 母健 、 曹彦忠、 刘晓茂、 姜宁、 庞 国芳 。 食品伙伴网 GB/T 229422008 蜂蜜中头孢唑啉、 头孢匹林 、 头孢氨苄 、 头孢洛宁、 头孢喹肟残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范 围 本标准规定 了蜂蜜中头孢唑啉 、 头孢匹林 、 头孢氨苄 、 头孢洛宁、 头孢 喹肟残 留量的液相色谱-串联 质谱测定方法 。 本标准适用于蜂蜜 中头孢唑啉 、 头孢匹林 、 头孢氨苄 、 头孢洛宁 、 头孢喹肟残 留量的测定 。 本标准 的 方 法 检 出 限:头 孢 唑 啉 为10u g /k g ;头孢 匹林 、 头 孢 氨 苄 、 头 孢 洛 宁、 头 孢 喹 肟 为 2 . 0 ug/ kg。 2 规 范 性 引用 文件 下 列文件 中的条 款通过本标准 的引用 而成为本标 准 的条款 。凡是 注 日期 的引用文件 ,其 随后所 有 的修改单 (不 包括勘误 的 内容 )或 修 订版均不适用 于本标准 ,然 而 ,鼓 励根据本标 准达成协议 的各方研 究 是 否可使用这些文件 的最新版本 。凡是不注 日期 的引用文件 ,其 最新版本适用于本标准 。 G T6379.l 测 量方法与结果 的准确度 (正 确度与精密度) 第l 部分 :总则与定义 (GB/T6379.1 200犭 ,ISo 5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2 测 量方 法与结果 的准确度 (正确度 与精 密度 ) 第2部 分:确定标 准测 量 方法 重 复 性 与 再 现 性 的 基 本 方 法( G B / T 6 3 7 9 . 2 0 4 , I S O 5 7 2 5 2 : 1 9 9 4 , I D T ) G B / T 6 6 8 2 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法( G B / T 6 6 8 2 2 0 0 8 , I S O 3 6 9 6 : 1 9 8 7 , M O D ) 3 原理 试样中五种头孢菌素类药物残 留,用磷酸二氢钠缓冲溶液提取 ,固相萃取柱净化 ,液 相色谱-串联质 谱仪测定 ,外标法定量 。 4 试 剂和材料 除另有说明外 ,所用试剂均为分析纯 。 4 . 1 水 : G B / T 6 6 8 2 , 一级。 4.2 甲 醇 :色谱纯 。 4 . 3 乙 腈 : 色 谱纯 。 4 . 4 磷 酸 二 氢钠 ( N aH 2 P O 从) 。 4.5 氢 氧化钠 。 4.6 乙 酸。 4.7 5m o l /L氢 氧化钠溶液 :称取g 氢 氧化钠(厶 .5),用水溶解 ,定容至100m L。 4.8 0.15m o l /L磷 酸二氢钠缓冲溶液 :称取18.0g 磷 酸二氢钠 (4.4),用 水溶解 ,定 容至1000m L, 然后用氢氧化钠溶液(4.7)调节至 p H=8.5。 4 . 9 标 准 物 质: 头孢 唑 啉 ( C A S : 2 5 9 5 1 9 9 ) 、 头 孢 匹林( C A s : 2 4 3 5 6 6 0 - 3 ) 、 头 孢 氨 苄( C A S : 1 6 5 4 5 6 7 ) 、 头 孢 洛 宁( C A S : 5 5 7 5 2 3 ) 、 头 孢 喹 肟 ( C A S : 1 1 8 亻4 3 8 9 3 ) , 纯 度 9 9 % 。 4.10 1.O m y m L五 种头孢菌素标准储备溶液 :准确称取每种标准物质 (众 .9),分 别用水配制成浓度为 食品伙伴网 GB/T22942 2008 1.0m g /m L的 标准储各溶液 。储各液贮存在-18冰柜中。 4.11 五 种头孢菌素标准混合工作溶液 :根据需要吸取适量的每种头孢菌素标准储各溶液(4.10),用空 白样品提取液制成适当浓度的基质混合标准工作溶液。 4.12 固 相萃取柱 :Oa s i s HLB固相萃取柱或相当者 ,500m g ,6m L。 使用前依次用5m L甲醇(4.2)、 5m L水(4.D和10m L磷 酸二氢钠缓冲溶液(4.8)预处理 ,保持柱体湿润 。 4 . 1 3 滤 膜 : 0 . 2 um。 5 仪 器 5.1 液 相色谱-串联 四极杆质谱仪 ,配有电喷雾离子源。 5 . 2 分 析天平: 感量 0 . l mg、0 . 0 1 g。 5.3 固 相萃取真空装置 。 5 . 4 贮 液器 : 5 0 mL 。 5 . 5 微 量注射器 : 2 5 uL , 1 0 0 uL 。 5 , 6 刻 度样品管 : 5 mL , 精 度为 0 . 1 mL 。 5.7 氮 气浓缩仪 。 6 试 样制各与保存 6.1 试 样的制备 对无结晶的实验室样品 ,将其搅拌均匀。对有结晶的样品 ,在密闭情况下 ,置于不超过60 的水浴 中温热 ,振荡 ,待样品全部融化后搅匀 ,冷却至室温 。分出0.5k g 作为试样 。制备好的试样置于样 品瓶 中,密封 ,并做上标记。 6.2 试 样的保存 将试样于常温下保存 。 7 测 定步骤 7.1 试 样溶液的制备 称取5g 试样 (精确到O.01g )置于150m L三角瓶 中,加人25m I磷酸二氢钠缓 冲溶液 (4.8),溶 解样品 ,混 匀 ,用 氢氧化钠溶液 ,调 节至 p H=8.5。把样 品提取液移至下接Oa s i s HLB固相萃取柱 (4.12)的 贮液器中,以3m L/m i n 的 流速通过固相萃取柱 ,先用5m L磷酸二氢钠缓冲溶液洗涤三角瓶 并过柱 ,再用2m L水洗柱 ,弃去全部流出液。用2m I乙腈洗脱 ,收集洗脱液于刻度样品管(5.6)中,在 40 氮气吹干 ,用 2m L水 溶解残渣 ,摇匀后 ,过0.2u m 滤膜(厶 .13),供 液相色谱-串联质谱仪测定 。按 照上述操作步骤制各空 白样品提取液。 7.2 测 定条件 7.2.1 液 相色谱参考条件 a) 色 谱柱 : Z O R B A X S C 1 8 , 3 . 5 um, 1 5 0 mm2 . 1 mm( 内 径 ) 或 相当者; b ) 流 动相梯度程序及流速见表1; c ) 柱 温 :30; d) 进 样量 : 2 0 uI 。 表1 流动相梯 度程序及流速 时间/m i n流 速/(I/m i n )水(含 0.l %乙酸)/%乙腈/% 0.00950 5.0 2.0095.0 5.0 2 食品伙伴网 时间/m i n 流速/(u L/m i 水 (含 0.1%乙 酸)/% 乙腈/% 60.0 8.00 95.05.0 15.0095.05 0 7.2.2 质 谱参 考条件 GB/T229422008 表1(续) a ) 离 子源 :电喷雾离子源 ; b ) 扫 描方式 :正离子扫描 ; c ) 检 测方式 :多反应监测 ; d ) 电 喷雾 电压 :5500V; e ) 雾 化气压力: 0 . 0 5 5 M P a ; D 气 帘气压力 : 0 . 0 7 9 M P a ; 辅助气流速 :6L/m i n ; h ) 离 子源温度 :400; i ) 定 性离子对 、定量离子对和碰撞气能量(CE)、 去簇 电压(DP)见 表2。 7.3 液 相色谱-串联质谱测定 7.3.1 定 性测定 选择每种待测物质 的1个母离子 ,2个以上子离子 ,在 相 同试验条件下 ,样 品中待测物质 的保 留时 间与基质标准溶液中对应物质的保 留时间偏差在 2.5%之 内;样 品谱图中各定性离子相对丰度与浓度 接近的基质标准溶液的谱图中离子相对丰度相 比,偏差不超过表3规定的范围,则可判定为样品中存在 对应的待测物 。 表3 定性确证 时相对离子 丰度的最大允许偏 差以%表 示 表2 五种 头孢 菌素 的定性离子对 、 定量离子对 、 碰撞气 能量 、 去簇 电压 化合物 中文名称化合物英文名称 定性离子对 (/9z /z ) 定量离子对 (仞/z ) 碰撞气 能量/ V 去簇 电压 / V 头孢唑啉 celazolin 456/324 456/156 456/324 1 7 2 4 头孢匹林cephapirin 424/292 424/152 424/292 头孢氨苄 cephalexin 348/158 348/174 348/158 14 2 z 头孢洛宁 cealonium 4 5 9 / 1 5 2 459/123 459/152 2 9 1 8 头孢喹肟cequinome 529/134 529/396 529/134 2 1 1 9 相对离子丰度 )50 20(K5010(K(2010 允许的最大偏差 20 r 25 30 50 食品伙伴网 GB/T22942-2008 7.3.2 定 量测定 用基质标准混合工作溶液(4.11)分 别进样 ,以标准工作溶液浓度为横坐标 ,以 峰面积为纵坐标 ,绘 制标准工作 曲线 。用标准工作 曲线对样品进行定量 ,样 品溶液 中五种头孢菌素的响应值均应在仪器测 定的线性范围内。在上述色谱条件下 ,五种头孢菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图参见附录A 中的图A.1。 本方法的添加 回收率数据参见附录B中的表B.1。 7.4 平 行试验 按上述步骤 ,对 同一试样进行平行试验测定 。 7.5 空 白试验 除不称取试样外 ,均按上述分析步骤进行 。 8 结 果计算 试样 中五种头孢菌素残 留量利用数据处理系统计算或按式 (1)计算: x = c 券 端 式 中: X 试样 中被测组分残 留量 ,单 位为微克每千克(u y k g ); c 从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度 ,单位为纳克每毫升(n g /m L); V 试样溶液定容体积 ,单位为毫升(m L); 勿最终试样溶液所代表的试样质量 ,单位为克(g )。 计算结果应扣除空 白值 。 9 精 密度 9.1 一 般规定 本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和 GB/T6379.2规 定确定 的,其 重复性和再现性 的值 是 以95%的可信度来计算 。 g .2 重 复性 在重复性试验条件下 ,获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r ,试样 中五种头孢菌 素添加浓度范围及重复性方程见表4。 9.3 再 现性 在再现性试验条件下 ,获得 的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R,试样中五种头孢菌 素添加浓度范围及重复性方程见表4。 4 表4 五种 头孢菌素添加浓度范 围及重复性 限和再现性 限方程单位为微克每千克 如果两次测定值 的差值超过重复性限r ,应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定 。 化合物名称添加浓度范 围 重复性限r再现性 限R )g r- 0. 946 5 lg m 0.725 5 lg r:O.946 6 Ig m 0. 765 6 l g =0.9砝28 1g P, -0.7628 =0. 135 7 z ,z -0. 132 6 lg r:0. 942 7 Ig m 0. 761 0 lg R:0. 956 9 lg m-O.617 6 l g R=o .968 01g ,z 0.677 1 10100 l g R : 0 . 9 4 9 4 I g m - 0 . 6 4 5 2 l g =o .9o 661g -0,6211 l g Ji =0.92801g z -0.6885 注:/Pl 为两次测定结果的算术平均值。 食品伙伴网 GB/T229422008 a妇羽 a弋璎口 各苌妇口 a 驷a 附 录 A (资 料性附录) 五种头孢菌素标准物质的多反应监测(MRM)色谱图 五种头孢菌素标准物质的多反应监测 (MRM)色 谱图见图A.1。 头孢匹林 头孢喹肟 t /min 码 t/min 图A.1 五种头孢菌素标准物质的 多反应监测(MRM)色谱 图 食品伙伴网 GB/T229422008 附 录 B (资 料性 附录) 回 收 率 五种头孢