UNE-EN ISO 5667-16 1999 (Spanish).pdf

UNE-EN ISO 5667-16 norma espaola Julio 1999 TTULOCalidad del agua Muestreo Parte 16: Gua para los ensayos biolgicos de muestras (ISO 5667-16:1998) Water quality. Sampling. Part 16: Guidance on biotesting of samples. (ISO 5667-16:1998). Qualit de leau. Echantillonnage. Partie 16: Lignes directrices pour les essais biologiques des chantillons. (ISO 5667-16:1998). CORRESPONDENCIA Esta norma es la versin oficial, en espaol, de la Norma Europea EN ISO 5667-16 de octubre 1998, que a su vez adopta ntegramente la Norma Internacional ISO 5667-16:1998. OBSERVACIONES En esta norma UNE se han incorporado las correcciones a la Norma EN ISO 5667-16 recibidas mediante escrito de CEN de fecha 8 de abril 1999. ANTECEDENTES Esta norma ha sido elaborada por el comit tcnico AEN/CT 77 Medio Ambiente, cuya Secretara desempea AENOR. Editada e impresa por AENOR Depsito legal: M 29546:1999 LAS OBSERVACIONES A ESTE DOCUMENTO HAN DE DIRIGIRSE A: 45 Pginas AENOR 1999 Reproduccin prohibida C Gnova, 6 28004 MADRID-Espaa Telfono91 432 60 00 Fax91 310 40 32 Grupo 28 S NORMA EUROPEA EUROPEAN STANDARD NORME EUROPENNE EUROPISCHE NORM EN ISO 5667-16 Octubre 1998 ICS 13.060.10 Descriptores: Agua, calidad, contaminacin del agua, ensayo biolgico, bioensayo, muestreo, muestra, equipo de muestreo, reglas (instrucciones). Versin en espaol Calidad del agua Muestreo Parte 16: Gua para los ensayos biolgicos de muestras (ISO 5667-16:1998) Water quality. Sampling. Part 16: Guidance on biotesting of samples. (ISO 5667-16:1998). Qualit de leau. Echantillonnage. Partie 16: Lignes directrices pour les essais biologiques des chantillons. (ISO 5667-16:1998). Esta norma europea ha sido aprobada por CEN el 1998-10-01. Los miembros de CEN estn sometidos al Reglamento Interior de CEN/CENELEC que define las condiciones dentro de las cuales debe adoptarse, sin modificacin, la norma europea como norma nacional. Las correspondientes listas actualizadas y las referencias bibliogrficas relativas a estas normas nacionales, pueden obtenerse en la Secretara Central de CEN, o a travs de sus miembros. Esta norma europea existe en tres versiones oficiales (alemn, francs e ingls). Una versin en otra lengua realizada bajo la responsabilidad de un miembro de CEN en su idioma nacional, y notificada a la Secretara Central, tiene el mismo rango que aqullas. Los miembros de CEN son los organismos nacionales de normalizacin de los pases siguientes: Alemania, Austria, Blgica, Dinamarca, Espaa, Finlandia, Francia, Grecia, Irlanda, Islandia, Italia, Luxemburgo, Noruega, Pases Bajos, Portugal, Reino Unido, Repblica Checa, Suecia y Suiza. CEN COMIT EUROPEO DE NORMALIZACIN European Committee for Standardization Comit Europen de Normalisation Europisches Komitee fr Normung SECRETARA CENTRAL: Rue de Stassart, 36 B-1050 Bruxelles 1998 Derechos de reproduccin reservados a los Miembros de CEN. EN ISO 5667-16:1998- 4 - ANTECEDENTES El texto de la Norma Internacional ISO 5667-16:1998 ha sido elaborado por el Comit Tcnico ISO/TC 147 “Calidad del agua” en colaboracin con el Comit Tcnico CEN/TC 230 “Anlisis del agua”, cuya Secretara desempea DIN. Esta norma europea deber recibir el rango de norma nacional mediante la publicacin de un texto idntico a la misma o mediante ratificacin antes de finales de abril de 1999 y las normas nacionales tcnicamente divergentes debern anularse antes de finales de abril de 1999. De acuerdo con el Reglamento Interior de CEN/CENELEC, los organismos nacionales de normalizacin de los siguientes pases estn obligados a adoptar esta norma europea: Alemania, Austria, Blgica, Dinamarca, Espaa, Finlandia, Francia, Grecia, Irlanda, Islandia, Italia, Luxemburgo, Noruega, Pases Bajos, Portugal, Reino Unido, Repblica Checa, Suecia y Suiza. DECLARACIN El texto de la Norma Internacional ISO 5667-16:1998 ha sido aprobado por CEN como norma europea sin ninguna modificacin. NOTA Las referencias normativas europeas de las normas internacionales se relacionan en el Anexo ZA (normativo). - 5 -ISO 5667-16:1998 NDICE Pgina 1OBJETO Y CAMPO DE APLICACIN 7 2NORMAS PARA CONSULTA.7 3MUESTREO.8 4TRANSPORTE9 5CONSERVACIN Y ALMACENAMIENTO9 6APARATOS Y EQUIPOS.10 7PRETRATAMIENTO Y PREPARACIN DE LAS MUESTRAS.11 8TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS DURANTE EL ENSAYO18 9LNEAS DIRECTRICES GENERALES PARA EL DISEO DEL ENSAYO .20 10LNEAS DIRECTRICES ESPECIALES RELATIVAS AL FUNCIONAMIENTO DEL ENSAYO.22 11ENSAYOS BIOLGICOS ESPECIALES25 12EVALUACIN29 13PRESENTACIN DE RESULTADOS .33 14INFORME DE ENSAYO34 15PRINCIPIOS BSICOS DE ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD EN ENSAYOS BIOLGICOS.35 ANEXO A MNIMA DILUCIN INEFECTIVA (MDI).38 ANEXO B BIBLIOGRAFA .39 ISO 5667-16:1998- 6 - INTRODUCCIN Los ensayos biolgicos resultan adecuados para la determinacin del efecto de los parmetros fsicos y qumicos sobre los organismos de ensayo, en condiciones experimentales especficas. En principio, los mtodos de anlisis qumico no resultan adecuados para la determinacin de los efectos biolgicos. Dichos efectos pueden ser potenciados o inhibidos y pueden determinarse por la reaccin observada en los organismos, por ejemplo su muerte, crecimiento, proliferacin, cambios morfolgicos fisiolgicos o histolgicos. Los efectos de inhibicin se desencadenan por la accin de los constituyentes txicos del agua o por otras influencias nocivas. Los efectos pueden referirse a varios niveles, desde estructuras (sub)celulares o sistemas enzimticos, hasta al organismo en su conjunto o incluso referirse a niveles superiores al organismo o relativos a toda la comunidad. En el contexto de esta parte de ISO 5667, la toxicidad es la capacidad de una sustancia de ejercer un efecto perjudicial sobre organismos o biocenosis debida a sus propiedades qumicas y a su concentracin. El potencial efecto perjudicial de una sustancia txica puede contrarrestarse por la capacidad de proteccin del sistema biolgico, por ejemplo por desintoxicacin metablica y excrecin. La toxicidad aparente medible en el ensayo biolgico es el resultado de la interaccin entre la sustancia y el sistema biolgico. Aparte del efecto txico directo de uno o ms constituyentes del agua, ciertos efectos perjudiciales para el sistema biolgico pueden ser ejercidos por la accin combinada de todas las sustancias nocivas, por ejemplo, por sustancias que no son txicas en s, pero que afectan a las propiedades fsicas o qumicas del medio y, en consecuencia, a las condiciones de vida de los organismos. Esto es de aplicacin, por ejemplo, a las sustancias que disminuyen la concentracin de oxgeno, a las sustancias coloreadas o a la materia turbia, que reducen la exposicin a la luz. Tambin estn incluidos efectos no relacionados con sustancias como los daos provocados por temperaturas extremas. Los ensayos biolgicos incluyen tambin aquellos destinados a investigar el efecto de los organismos sobre las sustancias, como por ejemplo, los estudios de degradacin microbiolgica. Los resultados de los ensayos biolgicos se refieren primariamente a los organismos utilizados en el ensayo y a las condiciones estipuladas en el mismo. Un efecto nocivo, establecido a partir de ensayos normalizados puede justificar la idea de que pueden estar en peligro los organismos y biocenosis acuticos. Sin embargo, los resultados no permiten obtener conclusiones directas o extrapolaciones sobre la aparicin de efectos similares en el medio ambiente acutico. Esto es de particular aplicacin para sistemas a nivel de suborganismo, ya que quedan eliminadas o desactivadas propiedades importantes y funciones fisiolgicas propias de organismos intactos (por ejemplo, tegumentos protectores y mecanismos reparadores). En principio, no hay ningn organismo o biocenosis que pueda utilizarse para comprobar todos los efectos posibles sobre el ecosistema bajo las mltiples condiciones biticas y abiticas. Solo unas pocas especies (“modelo“) representativas de funciones ecolgicas relevantes pueden ser ensayadas en la prctica. Adems de estas limitaciones prcticas fundamentales en la seleccin de los organismos de ensayo, la muestra a investigar puede plantear tambin problemas experimentales en los ensayos biolgicos. Las aguas, y en particular las aguas residuales, son mezclas complejas que con frecuencia, contiene sustancias poco solubles, voltiles, inestables, coloreadas y/o partculas en suspensin, algunas veces coloidales. La complejidad y heterogeneidad de los materiales dan lugar a una gama de problemas experimentales en la realizacin de ensayos biolgicos. - 7 -ISO 5667-16:1998 Se encuentran problemas especiales relacionados con la inestabilidad del material a ensayar debidos a reacciones y procesos de tipo: fsico (por ejemplo, separacin de fases, sedimentacin, volatilizacin); qumico (por ejemplo, hidrlisis, fotodegradacin, precipitacin); y/o biolgico (por ejemplo, biodegradacin, biotransformacin, asimilacin biolgica en organismos). Otros problemas como la turbiedad y el color se presentan especialmente si se aplican medidas de tipo espectromtrico. Esta parte de la Norma ISO 5667 forma parte de un conjunto de Normas Internacionales que se refieren al muestreo de aguas. Es conveniente que sea leda junto con las otras partes y, en particular, junto con las Normas ISO 5667-1, ISO 5667-2 e ISO 5667-3. 1OBJETO Y CAMPO DE APLICACIN Esta parte de ISO 5667 da una serie de directrices prcticas sobre el muestreo, pretratamiento, tratamiento y evaluacin de las aguas en el contexto de los ensayos biolgicos. En ella se da informacin sobre como afrontar los problemas que se presentan en los ensayos biolgicos como consecuencia de la naturaleza de la muestra de agua y la idoneidad del diseo del ensayo. Se intenta transmitir la experiencia prctica relativa a las precauciones a tomar mediante la descripcin de mtodos satisfactoriamente probados para resolver o evitar algunos de los problemas experimentales que se dan en los ensayos biolgicos de las aguas. En la medida de lo posible se ha hecho referencia a normas o guas generales internacionales existentes. Tambin se ha recogido informacin procedente de artculos publicados o de comunicaciones orales. En primer lugar, se tratan problemas relacionados con la sustancia a ensayar que puedan tener influencia sobre el muestreo, pretratamiento y preparacin de las muestras de agua en los ensayos biolgicos y el tratamiento de las muestras durante el ensayo, especialmente cuando los ensayos se efectan sobre aguas o aguas residuales que tienen constituyentes inestables o eliminables. Se subrayan los principios bsicos de aseguramiento de la calidad, evaluacin y presentacin de los datos. Se hace especial nfasis en los ensayos ecotoxicolgicos con organismos (ensayos biolgicos con una nica especie). Algunas caractersticas apuntadas en esta gua general se aplican tambin a los estudios de biodegradacin y/o bioacumulacin en lo que se refiere al muestreo y preparacin de las muestras. Se aborda tambin la preparacin de sustancias poco solubles y su ensayo por encima de su solubilidad lmite en agua. Esta parte de ISO 5667 no es aplicable al examen bacteriolgico del agua. En otras normas internacionales se describen mtodos apropiados. 2NORMAS PARA CONSULTA La(s) norma(s) que a continuacin se relaciona(n) contiene(n) disposiciones vlidas para esta norma internacional. En el momento de la publicacin la(s) edicin(es) indicada(s) estaba(n) en vigor. Toda norma est sujeta a revisin por lo que las partes que basen sus acuerdos en esta norma internacional deben estudiar la posibilidad de aplicar la edicin ms reciente de las(s) norma(s) indicada(s) a continuacin. Los miembros de CEI y de ISO poseen el registro de las normas internacionales en vigor en cada momento. ISO 5667-3:1994 Calidad del agua. Muestreo. Parte 3: Gua para la conservacin y manipulacin de muestras. ISO 5667-10:1992 Calidad del agua. Muestreo. Parte 10: Gua general sobre el muestreo de aguas residuales. ISO 5667-16:1998- 8 - 3MUESTREO 3.1Generalidades La eleccin de puntos de muestreo representativos, la frecuencia del muestreo, el tipo de muestras tomadas, etc. dependen del objetivo del estudio. En general, el planteamiento del muestreo para anlisis qumico es compatible para los propsitos de los ensayos biolgicos. No obstante, algunos ensayos requieren que el agua y el agua residual se manejen y conserven de una determinada manera. Dependiendo del tipo de investigacin (por ejemplo, ensayos de toxicidad o de biodegradacin) y de la manera en la que se procesen las muestras, es necesario dividir una muestra en distintas fracciones que se conservan y/o almacenan de diferente manera y se procesan de distintas formas. Si se han tomado varias muestras (por ejemplo, en distintos puntos, o en distinto momento) pueden combinarse para conseguir una mayor representatividad. Es conveniente que estas muestras se mezclen bien y, si es necesario, se dividan en submuestras. Para obtener submuestras de la misma calidad, es conveniente asegurarse de que la muestra original conjunta mantiene su homogeneidad durante el proceso de obtencin de las submuestras, por ejemplo, mediante agitacin o movimiento constante. Esto es de particular aplicacin en el caso de mezclas con dos fases, por ejemplo, aguas que contengan partculas en suspensin o suspensiones de algas. Se recomienda usar un aparato de muestreo refrigerado cuando se vayan a combinar varias muestras tomadas en diferentes momentos. 3.2Muestreadores/recipientes/contenedores El volumen, la forma y el material de los recipientes depende de la naturaleza de la muestra (por ejemplo, degradabilidad/estabilidad), del nmero de replicados, del volumen necesario para la realizacin de los ensayos y de la necesidad de preservar y almacenar las muestras antes de su procesado. Es conveniente minimizar el tiempo requerido para la congelacin y descongelacin reduciendo el volumen de muestra, es decir, el tamao del recipiente. En general, resulta apropiado utilizar recipientes de un litro para la congelacin. Para aquellos ensayos que requieran volmenes ms grandes, es conveniente que la muestra se reparta en recipientes de volumen no superior a 10 l. Es conveniente que el volumen total de muestra tomado sea suficiente como para permitir ensayos adicionales o repeticiones. Es conveniente que las submuestras congeladas sobrantes, que estn almacenadas separadamente, se guarden hasta que se haya efectuado la evaluacin final. Es conveniente que el material de los recipientes sea qumicamente inerte, fcil de limpiar y resistente al calentamiento y a la congelacin. Se recomienda utilizar recipientes de vidrio, de polietileno o de politetrafluoretileno (PTFE). 3.3Nivel de rellenado de los recipientes Es conveniente decidir si los recipientes han de llenarse completamente hasta el borde o slo parcialmente, dejando un espacio de aire, siempre teniendo en cuenta el tipo de muestra, el procedimiento de conservacin y los ensayos previstos. El llenado parcial puede plantear los problemas siguientes: potenciar la agitacin durante el transporte, lo que origina la ruptura de las partculas agregadas; interaccin con la fase gaseosa, provocando liberacin de sustancias; oxidacin de sustancias, provocando por ejemplo, la precipitacin de compuestos de metales pesados; - 9 -ISO 5667-16:1998 El llenado total puede plantear los problemas siguientes: disminucin del oxgeno y posible descomposicin, con formacin de metabolitos txicos (por ejemplo, nitrito, sulfuro); homogeneizacin deficiente por falta de agitacin o movimiento del volumen total. No es conveniente llenar completamente los recipientes de muestras cuando se va a proceder a congelacin como modo de conservacin, puesto que se produce un aumento de volumen. 4TRANSPORTE Es conveniente que las muestras tomadas se protejan frente al riesgo de ruptura, incrementos de temperatura y frente a la contaminacin externa. Es conveniente evitar la posible confusin en la identificacin de las muestras que se transportan en hielo semifundido utilizando marcadores o etiquetas resistentes al agua. 5CONSERVACIN Y ALMACENAMIENTO Tal y como se indica en la Norma ISO 5667-3 es imposible dar normas generales de conservacin, por ejemplo, tiempo de conservacin y eficacia de los distintos mtodos, ya que depende principalmente de la naturaleza de la muestra y, en particular, de su actividad biolgica. Las aguas potables y las aguas subterrneas generalmente son menos susceptibles a las reacciones qumicas y biolgicas que las aguas superficiales y las aguas residuales brutas o tratadas. Si puede predecirse de antemano su composicin qumica aproximada, es conveniente referirse a la Norma ISO 5667-3 con vistas a su ensayo biolgico. De todos modos, deben considerarse algunas precauciones adicionales, que se describen a continuacin. Es conveniente que las muestras destinadas a ensayos biolgicos se procesen, preferentemente, sin dilacin despus de su recogida, para evitar cambios en la composicin original como resultado de reacciones fsicas o qumicas y/o procesos biolgicos. La duracin mxima de su conservacin no debera ser superior a 12 h a temperatura ambiente (mximo 25 C). Es conveniente conservar las muestras en la oscuridad para prevenir el crecimiento de algas. Si no es posible realizar el ensayo casi inmediatamente despus del muestreo (o de la preparacin de la muestra), por ejemplo cuando se preparan muestras compuestas, se recomienda enfriar o congelar. El mtodo ms comn y el ms recomendado para la conservacin de las muestras de agua residual es enfriar a una temperatura comprendida entre 0 C y 5 C. Cuando se enfra a esta temperatura y se mantiene en la oscuridad, la mayora de las muestras son estables durante 24 horas (vase la Norma ISO 5667-10). El proceso de enfriado debe aplicarse lo ms pronto posible tras