人感染H7N9禽流感病毒培训ppt课件.ppt

人感染H7N9禽流感 实验室采样与检测技术,1,H7N9禽流感病毒介绍,2,病原学特征,禽流感病毒属正粘病毒科 流感病毒按照病毒核蛋白（NP）和基质蛋白（MP）的差异可以分成甲、乙、丙型流感病毒 甲型流感根据病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的差异可以分成不同的亚型，目前可分为16个H亚型（H1H16）和9个N亚型（N1N9）。 禽甲型流感病毒除感染禽外，还可感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物。可感染人的禽流感病毒亚型为H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3，此次报道的为H7N9禽流感病毒。该病毒为新型重配病毒，其内部基因来自于H9N2禽流感病毒。,3,病原学特征,病毒基因组结构 甲、乙型病毒分为8节段 丙型病毒分为7个节段（缺少编码NA的节段） 单链、负链RNA 单纯的病毒RNA不具感染性,4,6个内部片段来源于H9N2 最新的研究表明，该病毒可能是 H7N3（鸭） H7N9（野禽） H9N2 中国科学院研究显示，H7N9禽流感病毒基因来自于东亚地区野鸟和中国上海、浙江、江苏鸡群的基因重配。,病毒基因组特征,5,理化特征,禽流感病毒普遍对热敏感，对低温抵抗力较强，65加热30分钟或煮沸（100）2分钟以上可灭活。病毒在较低温度粪便中可存活1周，在4水中可存活1个月，对酸性环境有一定抵抗力，在pH4.0的条件下也具有一定的存活能力。在有甘油存在的情况下可保持活力1年以上。,6,人感染H7N9禽流感病毒 标本采集运输及实验室检测,7,临床样本的选择,采样对象：不明原因肺炎、人禽流感待查病例 最佳采集时间：发病后3天内，一般不超过7天 要有医院专家组的会诊记录,8,病例定义,不明原因肺炎病例应同时具备以下4条，不能明确诊断为其它疾病的肺炎病例： 发热（腋温38）； 具有肺炎的影像学特征； 发病早期白细胞总数降低或正常、淋巴细胞分类计数减少； 经规范抗菌药物治疗35天 监测病例（同时具备以下4项）： 发热(腋下体温38) 具有肺炎的影像学特征 发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数减少 不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎,9,病例定义,疑似病例： 符合临床症状及血常规/生化及胸部影像学特征 甲型流感病毒通用引物阳性并排除季节性流感 可以有流行病学接触史 确诊病例： 符合疑似病例诊断标准 呼吸道标本中分离出H7N9禽流感病毒 呼吸道标本中H7N9禽流感病毒核酸检测阳性 动态检测双份血清H7N9禽流感病毒特异性抗体水平呈4倍或以上升高,10,标本类型,上呼吸道标本 咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液等 下呼吸道标本 气管吸取物、肺洗液、肺组织标本等 血清标本 急性期血清：发病7天内，尽量采集 恢复期血清：间隔2-4周的 尸检组织标本 肺组织、气管、支气管组织等,11,采样液要求,常用的采样液有：普通肉汤（只用于鸡胚，对细胞有毒性），PH 7.4-7.6的Hanks液，Eagels培养液或水解乳蛋白溶液或不加抗菌素的生理盐水（漱口液）。 为防止采样液生长细菌和真菌，在采样液中需加入抗菌素，加入庆大霉素（终浓度0.1mg/ml可高至0.5mg/ml ）、抗真菌药物（终浓度2ug/ml）。加入抗菌素以后重新调节pH值为7.4， 配制好的采样液，分装每个采样管3-4ml，-20冻存。 庆大霉素:80mg（万单位）2ml,12,Eagels基础培养基,13,咽拭子 用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去,14,15,采咽拭子的器材和容器,16,17,标本采集要求,同时采集 呼吸道标本：34ml 血清标本：12ml 尽量采集 病例发病早期的呼吸道标本 特别是下呼吸道标本 填写标本采集登记表 务必填写清楚，不要缺漏项目 复印一份交收样单位，签字盖章,18,19,20,标本送检,送检单位 县级疾控中心/临床医院 送检时限 在24小时内送达 接受单位 流感监测网络实验室（设区市疾控中心）,21,标本的运送要求 新鲜的临床采集标本 应在4条件下24小时内运送至全国流感监测网络实验室; 未能24小时内送至实验室的，应置-70或以下保存 冻存的临床采集标本 应在冻存的条件下，低温送至实验室,22,生物安全,23,传播风险及管理,病毒特征分析表明存在人间传染的风险 暂时按“高致病性禽流感病毒”类型管理 参考人间传染的病原微生物名录 需重点考虑生物安全 标本采集 标本运输 实验室活动,24,标本采集和运输,标本采集 重点做好采样人员的个人防护 必须佩带N95口罩、防护服、手套等防护用品 采样后器材高压消毒 标本运输 经过行政审批 包装 临床样品：B类， UN3373包装 病毒分离物： A类， UN2814包装 专人专车运输并注意防护,25,感染性物质包装分类,航空运输B类包装（ UN号3373,26,A类、 B类包装的区别,27,检测活动,标本分装、灭活和核酸提取 BSL-2+生物安全柜 核酸扩增 BSL-2 病毒培养 BSL-3：细胞及鸡胚的接种 ABSL-3：动物感染实验 活动需要行政审批、报备 个人防护 BSL-2：N95口罩、眼镜、防护服等 BSL-3：按相关要求,28,病原学检测,核酸检测 Real-time RT-P