肝炎病毒的常见检测手段PPT参考课件.pptx

肝炎病毒的常见检测手段,1,乙型肝炎病毒,乙型肝炎病毒（hepatitis B virus ）是指引起人类急、慢性肝炎的DNA病毒,也称丹氏颗粒，简称HBV。 我国的乙肝病毒感染率约60%-70%；乙肝表面抗原携带率约占总人口的7.18%，以此计算，全国约有9300万人携带乙肝病毒，其中乙肝患者大约有3000万 乙型肝炎病毒 (HBV) 属嗜肝DNA 病毒科 (hepadnaviridae)，基因组长约3.2kb ，为部分双链环状DNA。HBV 的抵抗力较强，但6510 小时 、煮沸10 分钟 或高压蒸气均可灭活HBV。含氯制剂、环氧乙烷、戊二醛、过氧乙酸和碘伏等也有较好的灭活效果,2,肝炎病毒的分类,肝炎病毒是医学术语，指引起病毒性肝炎的病原体。人类肝炎病毒有甲型、乙型、丙型、丁型和戊型和庚型病毒之分。甲型肝炎病毒呈球形，无包膜，核酸为单链RNA。乙型肝炎病毒呈球形，具有双层外壳结构，外层相当一般病毒的包膜，核酸为双链DNA。除乙型肝炎病毒遗传物质为双链DNA外，其他类型病毒均为单链RNA。除了甲型和戊型病毒为通过肠道感染外，其他类型病毒均通过密切接触、血液和注射方式传播。,3,乙肝病毒基因,目前，已可从感染HBV病人的血清中及感染肝脏提纯的病毒核心中分离出环状双股DNA，从而确定HBV属DNA病毒。目前，由于克隆化DNA完整核苷酸已经确定，现已证实HBsAg和HBcAg都是由Dana颗粒的DNA所编码，并且二类基因存在同一DNA分子上。有人比较病毒基因编码能力和病毒多少，发现HBV DNA负链能编码全部已知的HBV蛋白质，而其正链开放读码区，不能编码病毒蛋白。HBVDNA负链有四个开放区，分别称为S、C、P及X，能编码全部已知的HBV蛋白质。S区可分为二部分，S基因和前S基因。S基因能编码主要表面蛋白。S基因之前是一个能编码163个氨基酸的前S基因，编码Pre S1和Pre S2蛋白。C区基因包括前C基因和C基因，分别编码HBeAg和HBcAg。P区最长，约占基因组75%以上，编码病毒体DNA多聚酶。X区可能编码有154个氨基酸的碱性多肽。,4,乙肝的抗原,HBV的抗原有3种：表面抗原（HBsAg）、核心抗原（HBcAg）和e抗原（HBeAg）。表面抗原大量存在于感染者血液中，是HBV感染以及检测的主要标志。它具有抗原性，可诱导机体产生特异保护性的抗-HBs，也是制备疫苗的最主要成分。 核心抗原由183个或185个氨基酸组成，高度磷酸化，是乙肝病毒核心颗粒的唯一结构蛋白。正由于它存在于Dane颗粒核心结构表面，被表面抗原覆盖，故不易在血循环中检出。核心抗原具有强免疫原性，可诱导很强的体液免疫和细胞免疫，刺激机体产生抗-HBc。 e抗原为可溶性蛋白质，传染性强，游离存在于血液中，虽然很早就被发现，在病理上认为是HBV复制以具有强感染性的一个指标，但其功能尚不清楚。抗-HBe的出现，是预后良好的征象。,5,常见的检测方法,PCR/RT-PCR：荧光定量、杂交、芯片等 酶联: ELSA、化学发光等 侧向层析:胶体金、乳胶等,6,聚合酶链式反应（PCR）,聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列。这是一个指数增长的过程，因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般，经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到 RT-PCR是在此基础上通过探针作为示踪标记物建立起来的方法，能够完成实时的定量分析工作。,7,基于乙肝病毒基因检查的方法主要有：荧光PCR法、竞争PCR法、PCR酶联免疫吸附法、荧光标记物法和PCR酶联化学发光等方法。这些方法各有优缺点，所使用的仪器设备、试剂品质源于不同的国家和地区，设立的标准曲线以及标准荧光等各不相同，得出的数值左右漂浮，偏差很大，得出的检测值范围也不相同。,8,HBV-DNA检测则是采用聚合酶链式反应（PCR）技术，特异性扩增乙肝病毒基因组保守的C基因区上270bp基因片段，以近于2n的指数（n为循环次数），在数小时内可将极微量的HBV-DNA特定的分子片断扩增至1x1071x108倍，大大提高了HBV的检出率，为临床诊断是否为HBV感染提供了一种强有力的手段。,9,ELSA,ELISA方法一直是临床诊断HBV感染的传统手段，反映机体HBV感染的免疫状态。 化学发光是基于ELISA基础上通过改变检测系统建立的新方法。,10,乙肝五项指标临床监测意义,HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗HBe 抗-HBc 1、- - - - - 过去和现在均未感染HBV 2、- - - - + 曾感染HBV，急性感染恢复期 3、- - - + + 过去和现在均已感染过HBV 4、- + - - - 预防注射疫苗 5、- + - + + 既往感染；急性HBV感染恢复期 6、- + - - + 既往感染；急性HBV感染已恢复 7、+ - - - + 急性HBV感染；慢性HBsAg携带者 8、+ - - + + 急性HBV感染趋向恢复；慢性HBsAg 携带者，传染性 弱；长期持续易癌变 9、 + - + - + 急性或慢性乙肝，传染性极强 10、+ - - - - 急性HBV感染早期，HBsAg携带者 11、+ - + - - 急性HBV感染早期，传染性强 12、 - - + + + 急性感染中期 13、+ - + + + 急性感染趋向恢复；慢性携带者 14、+ - - + -