（鲁京津琼）2020版高考生物总复习第31讲微生物的培养与应用教案.docx

第31讲微生物的培养与应用课程内容核心素养提考能1.进行微生物的分离和培养2.用大肠杆菌为材料进行平面培养、分离菌落3.测定某种微生物的数量4.分离土壤中分解尿素的细菌5.研究培养基对微生物的选择作用科学思维分析培养基的成分及作用，比较平板划线法与稀释涂布平板法的异同科学探究设计实验获得纯化的酵母菌落社会责任关注有害微生物的控制、宣传健康生活考点一微生物的实验室培养1.微生物的培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。(2)营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。(3)种类按照物理性质可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。按照成分的来源可分为天然培养基和合成培养基、半合成培养基。按照功能用途可分为选择培养基、鉴别培养基等。2.无菌技术(1)含义：在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。(2)作用：防止外来杂菌的入侵。(3)常用方法条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属用具高压蒸汽灭菌法培养基及容器3.大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(2)目的：在培养基上形成由单个细胞繁殖而来的子细胞群体菌落。(3)纯化培养方法主要方法平板划线法稀释涂布平板法纯化原理通过接种环在琼脂固体培养基的表面连续划线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面将菌液进行一系列的梯度稀释，稀释度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞主要步骤平板划线操作系列稀释操作和涂布平板操作接种工具接种环涂布器平板示意图(4)菌种的保存方法对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。1.根据功能可分为选择培养基和鉴别培养基。类型实例选择培养基培养基中加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌培养基中加入高浓度的食盐用于分离得到金黄色葡萄球菌以尿素作为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌不添加氮源的培养基用于分离固氮微生物石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物鉴别培养基伊红美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌(菌落呈深紫色并带金属光泽)2.平板划线操作中灼烧接种环的目的灼烧时间灼烧目的第一次划线前杀死接种环上原有的微生物，防止外来杂菌污染培养基第二次及以后每次划线前杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端最后一次划线后杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者3.培养基的配制原则(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)pH要适宜：细菌为6.57.5，放线菌为7.58.5，真菌为5.06.0，培养不同微生物所需的pH不同。4.微生物对主要营养物质的需求特点(1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。(1)(人教版选修一P16“旁栏思考题”拓展)请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶和吸管实验操作者的双手提示、需要灭菌；需要消毒。(2)(人教版选修一P19图示拓展)平板冷凝后，为什么要将平板倒置？提示平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(3)(人教版选修一P18“旁栏小资料”)微生物接种方法除了平板划线法和稀释涂布平板法之外，还有斜面接种、穿刺接种等方法。这些方法的核心都是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。1.(2018全国卷，37)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具_(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_。(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_。在照射前，适量喷洒_，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过_(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_。解析(1)在实验室中，能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属材质的实验器具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)巴氏消毒法或高温瞬时消毒法与煮沸消毒法相比，其优点表现为在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。(3)紫外线照射能消毒的原因是其能够破坏微生物细胞中的DNA分子。在利用紫外线照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可强化消毒效果。(4)自来水通常采用氯气消毒。(5)采用高压蒸汽灭菌时，若压力达到设定要求，而温度未达到相应要求，最可能的原因是没有排尽高压蒸汽灭菌锅内的冷空气。答案(1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽2.(201811月浙江选考节选)回答与微生物培养及应用有关的问题：(1)对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从_时开始计时。对于不耐热的液体培养基，一般可将其转入G6玻璃砂漏斗中，采用_方式可较快地进行过滤灭菌。(2)与酿造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加_的过程。某醋酸菌培养基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇组成，其中甘露醇的主要作用是_。解析(1)由于高压蒸汽灭菌锅的升温升压需要一定时间，而未达设定温度和压力将导致灭菌不彻底，因此对培养基进行高压蒸汽灭菌时，灭菌时间应从达到设定的温度或压力值时开始计时。对于不耐热的液体培养基，如尿素培养基，一般可将其转入G6玻璃砂漏斗中过滤灭菌，采用抽滤方式可加快过滤速度。(2)相比果醋制作中先利用葡萄糖进行酒精发酵，再进行醋酸发酵，以淀粉为原料制醋，需增加淀粉分解成糖的过程。醋化醋杆菌培养基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇组成，其中甘露醇的主要作用是作为碳源。答案(1)达到设定的温度或压力值抽滤(2)将淀粉分解成糖作为碳源走出微生物培养的4个误区(1)不是所有微生物培养基中均需加入特殊营养物质。碳源、氮源、水分、无机盐是微生物生长必需的四大营养成分，有些微生物可自行合成特殊营养物质，而对那些合成能力有限或不能合成特殊营养物质的微生物(如乳酸菌)，则需在培养基中添加诸如维生素等物质。(2)稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目“低”。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。而显微计数法由于不能区分死菌与活菌，故所得数值可能比实际值“偏高”。(3)平板划线法只适用于微生物的提纯，不适用于微生物的计数，并且在最后一次划线的末端处的菌种最纯。(4)倒平板的温度一般在50 左右适宜，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。平板冷却凝固后需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。考点二微生物的筛选和计数1.微生物分离的原理与措施(1)原理：自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物应首先采用的方法是将单个的细胞与其他细胞分离，再给细胞提供合适的营养和条件，使其生长成为可见的群体。(2)常用措施接种过程中尽量使细胞分散开来，如平板划线法、稀释涂布平板法。运用选择培养基的作用特点，在培养基中添加某种特定的物质，抑制不需要的微生物的生长，促进所需微生物的生长。2.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)筛选菌株的原理在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。(2)统计菌落数目的方法：一般用稀释涂布平板法。具体操作如下。设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布于整个平板表面，放在适宜的温度下培养，计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度的样液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。为了保证结果准确，一般选择菌落数为30300个的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。计算公式：每克样品中的细菌数(C/V)M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。提醒此种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。(3)实验流程：土壤取样配制土壤溶液和制备培养基系列稀释涂布平板与培养菌落计数选择培养基四种常见制备方法或实例1.(2015江苏卷，19)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是()A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上解析本题考查微生物的分离与培养的相关知识。高压灭菌加热结束时，需先切断电源，让灭菌锅内温度降至100 C以下，压力表的指针回到零时，再打开锅盖，A错误；倒平板时，不应将培养皿盖完全打开，以防污染，B错误；接种环经火焰灭菌后需待冷却后挑取菌落，C错误。答案D2.(2018全国卷，37)生物选修1：生物技术实践将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。回答下列问题：(1)M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制_的生长，加入了链霉素的培养基属于_培养基。(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有_(答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有_(答出两点即可)。(3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是_，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_。(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133；乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是_。解析(1)在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。若M培养基是用于真菌的筛选，则应加入链霉素以抑制细菌的生长，其属于选择培养基。(2)马铃薯浸出液中含有淀粉、蛋白质、脂质、无机盐、水等多种物质，因此，除氮源外其中还有微生物生长所需要的碳源、无机盐等营养要素。进入细胞的氮源可参与合成蛋白质、核酸(DNA、RNA)等含氮的生物大分子。(3)加入显色剂碘液后，淀粉遇碘变蓝，而淀粉的水解产物则不发生这种反应。若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，土壤中能产生淀粉酶的微生物可将淀粉分解，菌落周围就会出现透明圈，这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选能产淀粉酶的微生物了。(4)乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，结果的重复性太差，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。答案(1)细菌选择(2)碳源、无机盐蛋白质、核酸(3)碘液淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈(4)乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差3.(2019华大新高考联盟联考)如图是对细菌种类进行鉴别的一种装置。实验时先向小试管中注满pH6.8的液体培养基，再把小试管倒置放入含相同液体培养基的大试管中。培养基中含溴甲酚紫，该指示剂在pH 6.8以上呈紫色，pH 5.2以下呈黄色。甲、乙、丙三种细菌可利用的糖类和分解糖类的产物见下表。细菌种类可利用的糖类产生有机酸产生气体甲葡萄糖、乳糖乙葡萄糖丙葡萄糖注：代表能产生；代表不能产生。分析回答下列问题：(1)用接种环挑取菌种，接种到培养基中。接种环在使用_(填“前”、“后”或“前和后”)应用_法灭菌。(2)现有两种培养基，培养基A以乳糖为唯一碳源，培养基B以葡萄糖为唯一碳源，若要鉴别出甲、乙、丙三种细菌，应选用培养基_。若出现_现象，则为细菌甲。(3)为确定实验过程中是否存在杂菌污染，本实验还应设置一组对照，对照组的操作应为_。答案(1)前和后灼烧(2)A和B培养基A(或A和B)变为黄色，小试管中有气泡(3)将未接种的培养基在相同条件下放置适宜的时间，观察培养基是否变浑浊澄清易错易混强化科学思维易错易混易错点1混淆两种“对照组”与“重复组”点拨(1)两种对照组作用比较判断培养基中“是否有杂菌污染”，需将未接种的培养基同时进行培养。判断选择培养基“是否具有筛选作用”，需设置牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。(2)重复组的设置及作用为排除偶然因素对实验结果的干扰，在每一稀释度下宜设置3个平板作重复组，选择菌落数均在30300且数目相差不大的三个平板，用“平均值”代入计数公式予以计算菌落数。易错点2不清楚为什么测定活菌的数量不能用平板划线法？点拨由于在所划的线中，一般只有最后一次划线的末端才会形成只由一个细菌形成的菌落，而其他一些菌落往往由两个细菌或多个细菌繁殖而成，而在计数时一个菌落对应着一个细菌，这样在划线所得的平板中，菌落数目远低于活菌的实际数值，所以不能用平板划线法测定活菌数量。深度纠错某研究小组对生活用水中大肠杆菌含量进行检测，并研究在高盐度(NaCl)工业废水中提取可降解有机物的耐盐菌，请分析回答有关问题：(1)大肠杆菌进行检测的操作和配方图如下：若要将图乙中大肠杆菌检测配方修改后用于培养可降解高盐度工业废水中有机物的耐盐菌，则应去除的成分有_，同时需要添加的成分是_。(2)将高盐度工业废水采用平板划线法接种在含3%NaCl的固体培养基上(如图一)。然后置于适宜条件下培养一段时间，观察形成的菌落特征；再将分离纯化后的菌株制成菌液，取等量菌液，分别加入到不同NaCl浓度的液体培养基中摇床培养35小时，定时取样统计活菌数目，测定结果(如图二)。图一所示操作，第一次划线前灼烧接种环的目的是_，第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是_。图二所示活菌数目在进行统计时，直接从静置的培养液中取样计数的做法是错误的，正确的操作是将培养液_后取样计数，且每种浓度需设3个重复实验求其平均值。(3)由图二可知，该耐盐菌最适合处理含_(填浓度)NaCl的工业废水，原因是_。解析(1)图乙中伊红、美蓝是用来鉴别大肠杆菌的，因此若用于培养可降解高盐度工业废水中有机物的耐盐菌，需去除其中的伊红、美蓝，此外由于工业废水中的有机物能够作为碳源，还应去除乳糖这一碳源；作为选择培养基，同时需加入高浓度的氯化钠溶液。(2)第一次接种前灼烧接种环的目的是防止杂菌污染。接种后接种环上有残留的菌种，因此第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种。取样计数时，需将培养液振荡摇匀，使菌种分布均匀，再吸取培养液。(3)分析图二可知，处理后每隔5小时取样检测时，3种NaCl浓度下，均是NaCl浓度为3%时该耐盐菌的相对数量最多，这说明该耐盐菌适合处理NaCl浓度为3%的工业废水。答案(1)伊红、美蓝、乳糖(高浓度)氯化钠(2)防止杂菌污染杀死上次划线后接种环上残留的菌种(使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端)振荡摇匀(3)3%据图可知，在3种NaCl浓度下，NaCl浓度为3%时该菌的相对数量最多随堂真题&预测1.(2016江苏卷，改编)漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述错误的是()A.生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品B.筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落C.在涂布平板上长出的菌落，在通过划线进一步纯化D.斜面培养基中含有大量营养物，可在低温下长期保存菌株解析漆酶降解“木质”，则漆酶菌株多存在于“木质”丰富的场所，虽然生活污水中含有大量微生物，但不一定含有产漆酶的菌株，A错误；筛选产漆酶微生物的培养基中应加入木质素等漆酶降解的底物，可依据不同菌种形成的菌落的不同特点，挑选出产漆酶的菌落，B正确；在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化，C正确；斜面培养基中含有大量营养物，可在低温下长期保存菌株，D正确。答案A2.(2018全国卷，37)生物选修1：生物技术实践回答下列与酵母菌有关的问题：(1)分离培养酵母菌通常使用_(填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麦芽汁琼脂”)培养基，该培养基应采用_灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间后可观察到菌落，菌落的含义是_。(2)酵母菌液体培养时，若通入氧气，可促进_(填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”)；若进行厌氧培养，可促进_(填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”)。(3)制作面包时，为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松软的原因是_。解析(1)酵母菌为异养型生物，通常使用麦芽汁琼脂培养基培养；培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌；由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称为菌落。(2)酵母菌为兼性厌氧型生物，有氧条件利于其繁殖，无氧条件下其进行酒精发酵。(3)酵母菌分解葡萄糖可产生二氧化碳，使面包松软多孔。答案(1)麦芽汁琼脂高压蒸汽由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体(2)菌体快速增殖乙醇产生(3)酵母菌分解葡萄糖会产生CO2，CO2使面包松软3.(2020高考预测)石油烃是石油管道泄漏的主要污染物。为了筛选出分解石油烃能力较强的微生物，进行了如下系列操作。请回答问题：(1)分解石油烃的微生物一般从土壤中分离，获取土壤样品的取样地点最好选在_。(2)图1表示获取土壤样品后的研究过程。为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，号瓶所用的液体培养基的成分共有的特点是_，从而有利于分解石油烃的微生物的生长。(3)可采用图2中平板乙所示的_(方法)检测图1的号瓶中分解石油烃的微生物数量。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，这样做的目的是_；然后，将图1号瓶中的1 mL菌液稀释100倍，在3个平板上用该方法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每毫升该菌液中的活菌数为_个。图2(4).若实验室采用图3中的操作分离纯化优良菌种，首次接种最合理的排序是_。图3.下列有关操作正确的是_(填字母)。A.划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种B.划线时要将最后一区域的划线与第一区域的划线相连C.超净工作台在使用前，可用紫外线灯杀菌答案(1)被石油污染处(2)以石油烃为唯一碳源(3)稀释涂布平板法检测培养基灭菌是否合格3.8104(4).C(时间：35分钟)1.(2019青岛模拟)某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是()A.利用平板划线法对细菌进行计数B.以石油为唯一碳源的培养基筛选C.采用稀释涂布平板法分离菌种D.称取和稀释土壤时应在火焰旁解析平板划线法能对细菌分离纯化，但不能对细菌进行计数，稀释涂布平板法可以分离菌种还可进行计数，A错误。答案A2.下面是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1、2、3、4、5。下列叙述正确的是()A.在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌B.划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上C.接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的D.第1区和第5区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数解析在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，但不能对培养基进行灭菌；进行划线操作时，左手将培养皿的皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖；注意接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的；第1区和第5区的划线不能相连。答案C3.(2019吉林模拟)下面关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的叙述中，正确的是()A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B.筛选分解尿素的细菌时，应以尿素作为培养基中唯一的营养物质C.统计样品中的活菌数目一般用平板划线法D.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则表明筛选到了分解尿素的细菌解析只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，A正确；筛选分解尿素的细菌的实验中，采用的是以尿素为唯一氮源的培养基，B错误；统计样品中的活菌数目一般用稀释涂布平板法，C错误；在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，这样就能初步鉴定该种细菌能够分解尿素，D错误。答案A4.(2019海口调研)通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出()大肠杆菌霉菌放线菌固氮细菌A. B. C. D.只有解析缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长，而固氮细菌能生长；在培养基中加青霉素可以抑制细菌和放线菌等原核生物细胞壁的合成，而霉菌属于真核生物，故能生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长，对放线菌的生长无影响。答案A5.下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是()成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊红美蓝蒸馏水含量10 g10 g2 g0.4 g0.065 g1 000 mLA.从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基B.该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C.该培养基缺少提供生长因子的物质D.该培养基调节合适的pH后就可以接种使用解析分析表中成分可知，该培养基中没有凝固剂，为液体培养基，该培养基的营养成分齐全，但存在伊红、美蓝等鉴别物质，属于鉴别培养基，A错误；该培养基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是绝大多数生物最常利用的碳源，B正确；该培养基中存在的无机盐和蛋白胨中的某些物质可以看作是生长因子，C错误；培养基调节完pH还要进行灭菌等操作后才能使用，D错误。答案B6.某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A.培养基分装到培养皿后进行灭菌B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C.接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D.培养过程中每隔一周观察一次解析培养基灭菌后再分装到培养皿中，A错误；转换划线角度后要灼烧接种环，冷却后再从上次划线的末端开始进行划线，B正确；接种后的培养皿必须放在恒温箱中进行培养，C错误；培养过程中一般每隔12 h或24 h观察一次，D错误。答案B7.(2018江苏卷，31)酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。如图所示为操作流程，请回答下列问题：(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的_，及时对培养基进行分装，并进行_灭菌。(2)取步骤中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤中将温度约_(在25 、50 或80 中选择)的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。(3)挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤所示进行划线。下列叙述合理的有_。a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株(4)步骤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和_供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1 000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用2516型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上_色细胞的个数应不少于_，才能达到每毫升3109个活细胞的预期密度。解析(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称取各组分，之后溶解定容，再调节培养基的pH，一般情况下，采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。(2)对培养基进行高压蒸汽灭菌后，需将温度降至50 左右后倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。(3)在对酵母菌进行划线纯化时，为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌；且在划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落；本实验是为了获得能以工业废甲醇作为碳源的酵母，故在实验过程中可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇耐受株。(4)酵母菌是兼性厌氧型真菌，有氧条件下大量繁殖。酵母菌扩大培养时，需保证充足的营养和氧气供应。“用等体积台盼蓝染液染色”，即计数室中培养液体积实际只有一半，即0.120.05 mm3，设5个中方格中无色(活细胞不被台盼蓝染色)的细胞数目为x个，则3109x/51041032，解得x30。答案(1)pH高压蒸汽(湿热)(2)50 (3)a、b、d(4)氧气无308.下列关于微生物分离和培养的叙述，错误的是()A.应根据微生物代谢类型选择合适培养基并控制好培养基pHB.实验操作时应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触C.待培养基冷却至室温后，在酒精灯火焰附近倒平板D.使用过的培养基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃解析不同的微生物所需的营养条件和pH不尽相同，A正确；周围物品是没有经过灭菌处理的，已灭菌的材料用具与它们接触易染上杂菌，B正确；待培养基冷却至50 左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，C错误；使用过的培养基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃，以防污染环境，D正确。答案C9.微生物接种方法很多，平板划线法是最常用的一种。如图是平板划线示意图，划线的顺序为。下列操作方法错误的是()A.划线操作时，将沾有菌种的接种环插入培养基B.平板划线后培养微生物时要倒置培养C.不能将第区域的划线与第区域的划线相连D.在区域中划线前后都要对接种环进行灭菌解析平板划线法在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰边进行。在每个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落；平板划线后培养微生物时要倒置培养；接种是让细菌在培养基表面生长，所以不能将接种环插入培养基中，A错误。答案A10.下图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列有关叙述正确的是()A.步骤操作时，倒好平板后应立即将其倒置，防止水蒸气落在培养基上造成污染B.步骤接种环和试管口应先在火焰上灼烧，接种环冷却后再放入试管中蘸取菌液C.步骤沿多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后可根据出现的单个菌落计数D.步骤是将培养皿放在恒温培养箱中培养，一段时间后所得到的都是X细菌的菌落解析步骤操作时，倒好平板后应待其冷却凝固后，立即将其倒置，防止水蒸气落在培养基上造成污染，A错误；步骤接种环和试管口应先在火焰上灼烧，接种环冷却后再放入试管中蘸取菌液，B正确；步骤沿多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后可出现的单个菌落，但不能用于计数，C错误；步骤是将培养皿放在恒温培养箱中培养，一段时间后所得到的不一定都是X细菌的菌落，D错误。答案B11.下列有关微生物分离、纯化及计数的叙述，错误的是()A.常用富含纤维素的培养基富集培养纤维素分解菌B.平板划线法通过连续划线将聚集的菌种分散并计数C.稀释涂布平板法通过系列梯度稀释可将微生物分散D.用血细胞计数板计数微生物时，实验结果往往偏大解析平板划线法可以用于分离微生物，但不能用于计数，稀释涂布平板法可以计数。用血细胞计数板计数微生物时，死菌、活菌都统计在内，实验结果往往偏大。答案B12.关于实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作，下列说法正确的是()A.配培养基、倒平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行B.倒平板时，倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖C.划线接种时，灼烧接种环后立即进行再次划线D.划线接种结束后，需将平板倒置后放入培养箱中培养解析倒平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行，而配培养基不需要在酒精灯的火焰旁进行，A错误；倒入培养基后立即盖上培养皿，冷却后将平板倒过来放置，B错误；划线接种时，灼烧接种环后要等待其冷却后才能进行再次划线，C错误；划线接种结束后，需将平板倒置后放入培养箱中培养，D正确。答案D13.下列有关“微生物的分离与培养”实验的叙述正确的是()A.高压蒸汽灭菌锅加盖时应按顺时针方向依次旋紧螺栓B.选择培养基可以鉴定某种微生物的种类C.待培养基冷却至室温时倒平板D.统计样品中活菌数量时，接种方法可采用稀释涂布平板法解析高压蒸汽灭菌锅加盖时，将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内，再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气，A错误；鉴别培养基可以鉴定某种微生物的种类，B错误；待培养基冷却至50左右时倒平板，C错误；统计样品中活菌数量时，接种方法可采用稀释涂布平板法，D正确。答案D14.(2019河南信阳开学考)为了解鲜奶中细菌数量，某兴趣小组尝试对某品牌鲜奶中细菌含量进行测定。他们用无菌吸管从锥形瓶中吸取1 mL鲜奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，混合均匀，如此再重复两次，操作如下图所示。请回答有关问题：(1)鲜奶常采用_消毒，这种消毒方法使鲜奶的营养成分不被破坏。(2)为了对鲜奶中细菌进行计数，常采用_法。使用该方法时，可取最终的鲜奶稀释液0.1 mL滴在培养基上，选择下列工具中的_(填序号)进行实验操作。若其中一个平板经培养后的菌落分布如图甲所示，出现图甲结果可能的操作失误是_。(3)若用上述方法培养设置3个培养皿，菌落数分别为35个、33个、34个，则可以推测鲜奶中每毫升含细菌数为_个。运用这种方法统计的结果往往较实际值_(填“偏高”或“偏低”)，原因是_。(4)消毒后的鲜奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在操作步骤上应做什么改动？_。解析(1)巴氏消毒法是指7075 煮30分钟或80 煮15分钟，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是牛奶的营养成分不被破坏。(2)常用稀释涂布平板法对鲜奶中的细菌进行计数；据图分析，图B为稀释涂布平板法中使用的涂布器；图甲细菌分布不均匀可能是涂布不均匀导致的。(3)根据题意分析，鲜奶中每毫升含细菌数为(353433)30.11043.4106个。由于经此方法接种培养时当两个或多个菌落重叠在一起时按一个菌落计算，所以运用这种方法统计的结果往往较实际值偏低。(4)消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用稀释涂布平板法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在操作步骤上应减少稀释次数。答案(1)巴氏消毒法(2)稀释涂布平板B涂布不均匀(3)3.4106偏低个别菌落可能是由两个或多个细菌形成的(4)稀释次数减少15.细菌经人工诱变后，部分细菌调节机制中的某种酶被破坏，其细胞代谢中某些化学反应不能进行，就形成了营养缺陷型菌株，在工业生产上有广阔的应用前景。以下是实验人员利用影印法初检某种氨基酸缺陷型菌株的过程。请回答下列问题。(1)微生物生长需要的营养物质有水、碳源、_和_，制备上图的培养基还需要加入_。(2)制备培养基的步骤包括_、灭菌、倒平板，调节pH应该在灭菌_(填“前”或“后”)，培养基的灭菌方法一般为_。(3)根据用途分类，图中基本培养基属于_(填“选择”或“鉴别”)培养基。过程的接种方法为_。(4)采用影印法培养的优点是不同培养基中同种菌株的接种位置相同。为了完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，实验人员应挑取_(填“菌落A”或“菌落B”)接种培养，并进一步鉴定。解析(1)微生物生长需要的营养物质包括水、无机盐、碳源、氮源等，图示培养基上最后都长出了菌落，说明为固体培养基，因此制备培养基时需要加入凝固剂，常见的凝固剂是琼脂。(2)制备培养基的基本步骤包括计算、称量、溶化、调节pH、灭菌、倒平板，该过程中注意应该先调节pH再灭菌，以防止杂菌污染；培养基灭菌的常用方法是高压蒸汽灭菌法。(3)图示过程最终筛选出了氨基酸缺陷型菌株，说明图中基本培养基属于选择培养基；过程使菌落均匀分布，因此该接种方法为稀释涂布平板法。(4)比较基本培养基和完全培养基中的菌落可知，菌落A为氨基酸缺陷型菌株，因此需要用接种针挑取菌落A接种培养，并进行进一步的鉴定。答案(1)氮源无机盐凝固剂(或琼脂)(2)计算、称量、溶化前高压蒸汽灭菌法(3)选择稀释涂布平板法(4)菌落A亮剑高考23微生物的分离与培养(时间：15分钟)1.下列检测某熟制食品中大肠杆菌是否超标的实验操作，不合理的是()A.待检测食品需要经过灭菌操作后取样检测B.应设置未接种的培养基，作为实验的对照C.用稀释涂布平板法接种计数大肠杆菌的活菌数D.接种后将培养皿倒置并在适宜温度下培养解析待检测食品不能经过灭菌操作后取样检测，否则检测不到大肠杆菌，或者统计值偏小。答案A2.在三个培养皿中各加入等量但不同种的大肠杆菌培养基，在培养皿中培养36 h后统计细菌菌落数(见下表)。下列叙述错误的是()培养皿培养基成分培养皿中的菌落数琼脂、糖类35琼脂、糖类和维生素250琼脂和维生素0A.培养皿、和表明琼脂是培养基中必需的营养成分B.培养皿和说明维生素是大肠杆菌需要的生长因子C.培养皿和说明糖类是大肠杆菌需要的碳源D.本实验使用的是固体、不完全培养基解析琼脂是凝固剂，不是营养成分；培养皿和的区别在于是否添加维生素，结果说明维生素是大肠杆菌需要的生长因子；培养皿和的区别在于是否添加糖类，结果说明糖类是大肠杆菌需要的碳源；本实验添加了琼脂，使用的是固体养基，营养成分不完全，缺少无机盐、氮源等，说明使用的是不完全培养基。答案A3.在分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种(图1)、培养结果(图2)如下图。有关叙述错误的是()A.接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌B.连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落C.接种过程中至少需要对接种环灼烧5次D.图1中a区域为划线的起始位置解析一般采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，A正确；菌液经过连续划线，菌液中的菌体会越来越少，最终会获得单个细菌形成的菌落，B正确；每次划线前后都需要将接种环灼烧灭菌，因此按照图中划线顺序(dcba)，整个划线过程需要对接种环灼浇5次，C正确；每次划线的菌种来自上一区域的末端，因此划线的起始区域菌落最多，由图乙可推知，图甲中的d区域菌落多，为划线的起始位置，D错误。答案D4.某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素等配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图所示。下列有关叙述错误的是()A.培养基中加入化合物A作为唯一碳源，目的是为了筛选目的菌B.实验培养过程中进行振荡培养，可使目的菌和培养液充分接触C.实验操作过程中，获得纯净“目的菌”的关键是防止外来杂菌污染D.将固体培养基得到的目的菌重复多次上述实验的目的是获得大量菌种解析本实验的目的是“筛选到能高效降解化合物A的细菌”，因此培养基中加入化合物A作为唯一碳源，目的是为了筛选目的菌，A正确；实验培养过程