白血病淋巴瘤免疫分型.ppt

多参数流式细胞仪 在白血病/淋巴瘤免疫分型的应用,流式细胞术,流式细胞术(Flow Cytometry, FCM) 利用 流式细胞仪 对处在快速直线流动状态中的单细胞或者生物微粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。 流式细胞仪（Flow Cytometer) 集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。,2019年10月24日星期四4时18分3秒,2,2019年10月24日星期四4时18分3秒,3,FACS的工作原理,2019年10月24日星期四4时18分3秒,4,荧光补偿,2019年10月24日星期四4时18分3秒,5,Before,After,*,*,设门（gating）是流式细胞仪分析中的一种重要技术，只有通过最佳的设门方式，才能准确地获取和分析。 “设门” 是指在细胞分布图中，根据该图的细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群。通过“设门”得到不同的 区域（Region）。从而对其中的细胞进行单参数或多参数分析。,为什么进行设门？,2019年10月24日星期四4时18分3秒,7,2019年10月24日星期四4时18分3秒,8,正常BM各系细胞比率： 淋巴：20-30%：T：70%，B：20%，NK：10%； 单核：2-6%；粒细胞：40-60%；有核红：50%,FCM的主要测定指标：FSC，SSC，FL1，FL2，FL3（FL4） FSC：反应细胞的大小。SSC：反应细胞内颗粒的多少。 FCM设门法： FSC/SSC： 缺点： 不能将淋巴、单核及幼稚细胞区分开 CD45/SSC：CD45是WBC抗原，RBC、Plt为阴性。 CD45在成熟细胞表达强，幼稚细胞表达弱， 在淋巴、单核及粒细胞表达强度不同。 优点：能将淋巴、单核及幼稚细胞区分开。特异分析 白血病细胞免疫表型,2019年10月24日星期四4时18分3秒,9,讨论内容,FACS在血液病诊断中的应用 FACS在白血病MRD检测中的应用,2019年10月24日星期四4时18分3秒,10,骨髓细胞发育不同阶段相应抗原的表达,2019年10月24日星期四4时18分3秒,11,骨髓细胞发育不同阶段相应抗原的表达,2019年10月24日星期四4时18分3秒,12,骨髓细胞发育不同阶段相应抗原的表达,2019年10月24日星期四4时18分3秒,13,2019年10月24日星期四4时18分3秒,14,AML免疫表型分析,理想的AL免疫分型方案应满足以下几点要求： 识别白血病细胞，能将其与正常细胞或反应性细胞相区别； 鉴别白血病细胞的系列来源； 根据细胞的分化程度对疾病进行亚型分型； 鉴别用于检测MRD 的白血病相关免疫表型（LAIP）； 帮助判断某些特异分子改变，即基因型检测； 提供预后相关及治疗靶点的免疫标志检测结果。,2019年10月24日星期四4时18分4秒,15,AML免疫表型分析,2019年10月24日星期四4时18分4秒,16,AML免疫表型分析,2019年10月24日星期四4时18分4秒,17,2019年10月24日星期四4时18分4秒,18,初治急白分型,Acute Leukemia Blasts Present 20%,红系和巨核系的鉴定需要另外增加二线抗体。 如:CD71、GPA、CD41、CD61,19,2019年10月24日星期四4时18分4秒,急性未分化白血病（AUL）,20,急性未分化型白血病的主要特点：原始细胞没有髓系分化的形态学特征，基本不表达任何已知系列的膜标志物。缺乏T或髓系的特异标志，如cCD3和MPO等；也不表达B系特异标志，如cCD22、CD79a或是CD19等。同时也不表达巨核细胞、浆细胞和DC的特异标志。只表达HLA-DR、CD34或CD38，TDT也是可阳性的。,2019年10月24日星期四4时18分4秒,急性髓系白血病微分化型,从左图CD45和SSC二维散点图中，可以看出有两群细胞，R1和R2，R2的CD45表达比淋巴弱，SSC也小。与单核细胞接近。通过分析可以得出： 1、不表达CD5、CD7、CD10、CD19、CD14、CD36、GLyA。 2、表达HLA-DR、CD13/CD33、CD34、CD33； 3、弱表达CD38； 由于CD33阳性强度大于CD13，CD34、HLA-DR、CD38阳性强度低，而髓过氧化物酶阳性，结合以上情况，提示这部分细胞属于分化较差的髓系细胞。,2019年10月24日星期四4时18分4秒,21,2019年10月24日星期四4时18分4秒,22,急性髓系白血病未分化型,急性髓系白血病成熟型,从左图CD45和SSC二维散点图中，可以看出有四群细胞，R1R5，原始细胞R2的CD45表达比淋巴R1弱，SSC比淋巴细胞大。幼稚或成熟粒增加。通过分析原始细胞R2可以得出： 1、不表达CD5、CD8、CD61、CD36、GLyA。 2、表达HLA-DR、CD13/CD33、CD34、CD38、CD7； 3、弱表达CD4； 结合以上情况，符合急性髓系白血病成熟型。,2019年10月24日星期四4时18分4秒,23,2019年10月24日星期四4时18分4秒,24,急性髓系白血病成熟型,急性早幼粒白血病,从左图CD45和SSC二维散点图中，可以看出有两群细胞，R1和R2，通过分析原始细胞R2可以得出： 1、不表达HLA-DR、CD34、CD14、CD36、GLyA。 2、表达CD13/CD33、MPO、； 3、增加二线抗体，可见CD11a、CD11b、CD18、CD64表达；而粒系标志CD15和CD65弱表达或不表达。 结合以上情况，符合急性早幼粒白血病。,2019年10月24日星期四4时18分4秒,25,2019年10月24日星期四4时18分4秒,26,急性早幼粒白血病,急性粒单白血病,从左图CD45和SSC二维散点图中，可以看出有三群细胞，R1R3，通过分析原始细胞R2（92.1）可以得出： 1、不表达CD61、CD36、GLyA。 2、表达HLA-DR、CD34和CD14（部分表达）、CD38、CD13/CD33； 3、弱表达CD4，CD33表达比CD13高。 结合临床情况，符合急性粒单白血病。,2019年10月24日星期四4时18分4秒,27,急性白血病,从左图CD45和SSC二维散点图中，可以看出有三群细胞，R1R3，通过分析原始细胞R2（92.1）可以得出： 1、不表达CD61、CD36、GLyA。 2、表达HLA-DR、CD34和CD14（部分表达）、CD38、CD13/CD33； 3、弱表达CD4，CD33表达比CD13高。 结合临床情况，符合急性粒单白血病。,2019年10月24日星期四4时18分4秒,28,急性单核细胞白血病,2019年10月24日星期四4时18分4秒,29,从左图CD45和SSC二维散点图中，可以看出R1为成熟淋巴细胞，R3为粒系，R4为红系（CD36+、GLyA+）R5为原始细胞区域比例较低。而R2所占比例较大，通过分析得出： 1、CD45表达较强，SSC较大，为单核系的特点。 2、R2表达HLA-DR、CD4和CD14（部分表达）、CD36、CD38、CD13/CD33； 3、不表达CD8，GLyA。 结合临床情况，符合急性单核细胞白血病。,2019年10月24日星期四4时18分4秒,30,急性单核细胞白血病,急性巨核细胞白血病,从左图CD45和SSC二维散点图中，R4群的异常细胞有较大的SSC，并且CD45低。通过分析此类细胞得出： 1、不表达CD3、CD5、CD7、CD10、CD14、CD19、CD38、CD79a、HLA-DR、MPO、CD15和CD64。 2、R2表达CD42a和CD61、CD34、CD13/CD33； 结合临床情况，符合原始巨核细胞的免疫表型。,2019年10月24日星期四4时18分4秒,31,2019年10月24日星期四4时18分4秒,32,急性巨核细胞白血病,初治急淋分型,Common Thymocyte,Mature Thymocyte,CD2+ CD5+ Dual CD4+/CD8+ sCD3-,CD2+ CD5+ CD4+ or CD8+ sCD3+,CD2-/+ CD5-/+ sCD3- CD4- CD8-,TdT+ CD10- clg- sig-,Pre-B,CD10+ cig+ TdT+ sig-,B,sig+ CD10+/- clg+/- TdT-,Common,TdT+ CD10+ clg- sig-,Early Thymocyte,Early B- Precursor,33,2019年10月24日星期四4时18分4秒,B/髓系MPAL和T/髓系MPAL,异常细胞的SSC较小，CD45弱表达，似有原淋的特点。此类细胞的免疫标志： 1、表达cCD22、mCD22、CD19、CD13、CD33（部分表达）或者表达cCD3、CD5、CD7、CD20、等。 2、弱表达CD15、MPO。 3、不表达CD10、CD11c、CD14、CD42a、CD64等。,2019年10月24日星期四4时18分4秒,34,B原淋巴细胞白血病/淋巴瘤,2019年10月24日星期四4时18分4秒,35,2019年10月24日星期四4时18分4秒,36,B原淋巴细胞白血病/淋巴瘤,2019年10月24日星期四4时18分4秒,37,T原始淋巴细胞白血病/淋巴瘤,T原始淋巴细胞白血病/淋巴瘤,2019年10月24日星期四4时18分4秒,38,CLL/SLL和LPL,2019年10月24日星期四4时18分4秒,39,浆细胞淋巴瘤,2019年10月24日星期四4时18分4秒,40,2019年10月24日星期四4时18分4秒,41,2019年10月24日星期四4时18分4秒,42,慢淋和B淋巴瘤分类,CLL and Non-Hodgkins Lymphoma,CD5-,CD10-,CD10+,Follicular Cell Or Burkitts Lymphoma,SLVL or Marginal Zone Lymphoma or Hairy Cell Leukemia,CD5+,B-CLL or Mantle Cell Lymphoma,MCL：t(11;14)；NCCN要求对所有CLL患者检测t(11;14)或CCND1表达,2019年10月24日星期四4时18分4秒,43,Burkitt 淋巴瘤和滤泡淋巴瘤,2019年10月24日星期四4时18分4秒,44,评估慢性淋巴增殖性疾病(CLD)的抗体,First: CD5、CD19、kappa、lamda CD3、CD20、CD23、CD10、CD45 B-cell：CD22、FMC7、CD11c、CD103、CD138 CD38、CD25、CD79b (约12-15Ab) T-cell：CD4、CD7、CD8、CD2、CD56 、CD16、 TCR/、TCR/ 特殊用途： CD30、bcl-2、TdT、CD1a、CD34、CD71 Total： 约12-16个b,2019年10月24日星期四4时18分4秒,45,CLL and Non-Hodgkins Lymphoma,NK LGL,CD2+ CD3+,T-Cell Lineage,CD38+ CD2-, CD19-,Plasma Cell Leukemia/ Myeloma,B-Cell Lineage,CD19+ Clonal Ig,CD16+ and/or CD56+ CD2+, CD3-,CD4+,T-Cell CLL T-Cell Lymphoma T-PLL,ATLL (Adult T-Cell Leukemia),T-Cell LGLL,CD8+,CD7-,Sezary Syndrome,慢淋和T淋巴瘤分类,46,2019年10月24日星期四4时18分4秒,FACS检测浆细胞疾病,八色FACS标记：CD38、CD138、CD45、CD19、CD56、cyIgkappa、cyIgLamda,2019年10月24日星期四4时18分4秒,47,多发性骨髓瘤（MM）,多发性骨髓瘤是浆细胞异常增生性疾病。正常浆细胞为CD38+/CD45dim/-，使用 CD38/CD45双标记检测外周血和骨髓标本，可以准确划定浆细胞群。通常使用CD38和CD45，结合轻链检查，对多发性骨髓瘤细胞进行分析。另外，正常浆细胞的表面标记为CD19+/CD56-，而多发性骨髓瘤细胞通常为CD19-/CD56+。CD138目前认为是浆细胞最特异的指标。这样，使用流式细胞仪对外周血或骨髓标本进行多参数分析，并计算异常浆细胞含量，对于多发性骨髓瘤的诊断和治疗评估具有重要意义。,48,2019年10月24日星期四4时18分4秒,49,2019年10月24日星期四4时18分4秒,50,2019年10月24日星期四4时18分4秒,2019年10月24日星期四4时18分4秒,51,急性白血病模板,2019年10月24日星期四4时18分4秒,52,皮肤淋巴瘤模板,2019年10月24日星期四4时18分4秒,53,2019年10月24日星期四4时18分4秒,54,2019年10月24日星期四4时18分4秒,55,2019年10月24日星期四4时18分4秒,56,2019年10月24日星期四4时18分4秒,57,2019年10月24日星期四4时18分4秒,58,2019年10月24日星期四4时18分4秒,59,2019年10月24日星期四4时18分4秒,60,2019年10月24日星期四4时18分4秒,61,2019年10月24日星期四4时18分4秒,62,2019年10月24日星期四4时18分4秒,63,白血病免疫分型的价值,确定ALL的细胞类型（B细胞或T细胞）和 ALL的分化阶段。 鉴定AML的特征。 对形态学上未分化的急性白血病有助于鉴定细胞类型。 诊断一些少见类型的白血病。如：M6、M7、M0等。,64,2019年10月24日星期四4时18分4秒,诊断双表型/混合细胞型急性白血病。 鉴别诊断ALL伴有髓系抗原表达（My+）或AML伴有淋系抗原表达（Ly+）。 鉴别急性白血病与其他造血系统和非造血系统恶性肿瘤。 根