高效液相色谱-电喷雾串联四级杆质谱法检测小鼠组织中花生四烯酸及其代谢产物.pdf

第 3 8 卷 2 0 1 0年 8月 分析化学 ( F E N X I H U A X U E) 研究报告 Ch i n e s e J o u r n a l o f An aly t i c a l Ch e mi s t r y 第 8期 l 08 91 09 4 2 研 究 报 告 2 石 石 蛉 D0I 1 1 0 3 7 2 4 S P J 1 0 9 6 2 0 1 0 0 1 0 8 9 高效液相色谱- 电喷雾 串联 四级杆质谱法检测 小 鼠组织中花生四烯酸及其代谢产物 谷 艳 ， 石先哲 赵 素敏 顾 群 路 鑫 许 国旺 ( 中国科学 院大连化学物理研究所 ， 中国科学院分离分析化学重点实验室 ， 大连 1 1 6 0 2 3 ) ( 沈 阳药科大学药学院 ，沈阳 1 1 0 0 1 6 ) 摘要采用反相高效液相色谱梯度洗脱 ， 电喷雾串联质谱多反应检测模式 ， 同时分离测定小 鼠组织 中花生 四 烯酸类代谢产物。组织样品经低温超声破碎细胞， 采用乙酸乙酯进行两次萃取， L C M S M S检测。实验用 3个 内标 ， 标准溶液稀释法建立 了 1 9种花生 四烯酸类物质 的标准 曲线 。方法学 确证表明 ： 各被测 物质的线性相关 系数均大于0 9 9 ； 定量限( L O Q ) 为3 2 5 0 g L ； 相对回收率在7 0 7 1 2 3 0 之间； 方法重复性( R S D) 均小 于 2 0 。运用本法在小鼠肺 、 肝、 脾组织 中检测到了几种花生 四烯酸类代谢 产物 ， 并对肺组 织里的 8种代谢产 物进行了含量测定 ， 结果为 1 1 一 羟基二十碳 四烯酸 ( 5 8 31 1 6 ) n g g ， 1 5 一 羟基二十碳四烯酸( 5 2 6 4 - 1 5 5 ) n g g ， 前列腺素 E 2 ( 2 1 01 0 2 )n g g ， 前列腺素 D ( 2 0 31 3 9 ) n #g ， 前列腺素 J 2 ( 3 9 21 5 9 ) n #g ， 血栓素 B 2 ( 5 8 3 2 8 4 ) n #g ， 前列腺素 F 2 ( 3 8 6 0 )n #g ， 花生四烯酸( 1 9 8 0 5 4 4 ) n g g 。本方法灵敏度高、 重复性 良好 ， 为研究 生物组织样 品中花生 四烯酸类物质 的代谢状况提供 了分析基础 。 关键词 高效液相色谱一 串联 质谱 ； 花生 四烯酸 ； 组织 1 引 言 花生 四烯酸( A A) 是一种在生物体内含量较高 ， 分布最广的多不饱和必需脂肪酸 ， 主要以磷脂 的形 式存在于细胞膜上 ， 当生物体受到某种刺激如炎症时 ， 在磷脂酶 A 的作用下水解成游离的 A A。A A主 要经过 3条代谢途径产生具有生物活性 的二十碳衍生物 。在环加氧酶 ( C O X) 的作用下生成前列腺素 ( P G s ) 和凝血嗯烷 ( T X s ) ； 在脂 氧化酶 ( L O X) 的作用下 生成 白三烯 ( s ) 和部分羟基 二十碳 四烯 酸 ( H E T E s ) 。在细胞色素 P 45 0单氧化酶的作用下产生环氧二十碳三烯酸 ( E E T s ) 、 二羟基二十碳三烯酸 ( D H E T s ) 和 HE T E s 1 1 。A A及其代谢产物在体 内发挥着重要 的生物学作用 ， 广泛参与免疫与炎症反 应 ，维持血液循环畅通 ，参与细胞信号转导 ， 促进胰岛素分泌 “ 。 目前， 生物样品中花生四烯酸及其代谢产物的分析方法主要有气相色谱 质谱法 ( c c MS ) 、 液 相色谱一 质谱法( L C MS ) 和液相色谱串联质谱法 ( L C MS MS ) 等。G C MS分析前一般需要 比 较复杂的预处理步骤， 包括样品纯化和衍生化 ， 且该法不适合分析热不稳定的代谢物 ， 如 E E T s 。L C MS 和 L C MS MS的前处理方法简单， 经 固相萃取柱纯化富集后 ， 可分析花生 四烯酸三条代谢通路中的主要 代谢产物 。但同相萃取法 的重现性较差。本研究采用经典的液液萃取法 ， 反相 高效液相色谱梯度洗 脱 ， 电喷雾串联质谱多反应监测模式对小鼠肺 、 肝、 脾组织中的花生四烯酸类物质进行 了分析。 2 实验部分 2 1仪器 与试剂 l 1 0 0高效液 相色谱仪 ( 美 国 A g i l e n t 公 司 ) ； A B I Q t r a p质谱 仪 ( 美 国 A p p l i e d B i o s y s t e m 公 司) ： 2 0 0 9 1 2 - 2 7收稿 ； 2 0 1 0 - 0 4 6接受 _本文 由国家 自然科学 基金 ( N o s 2 0 8 3 5 0 0 6 ， 2 0 6 7 5 0 8 2， 2 0 8 0 5 0 4 5 ) 资助 E- ma i l ：s h i x i a n z h e d i c p a c c n 1 0 9 0 分 析 化 学 第 3 8卷 Wi g g e n s D 一 1 3 0匀浆器( 德国 Wi g g e n s 公司) ； j Y 9 2 一 I I N超声波细胞粉碎机 ( 宁波新芝生物科技股份有限 公司) ； D 一 3 7 5 2 0低温高速离心机 ( 德国 K e n d r o公司) ； L a b c o n c o 4 5 L台式冷冻干燥 机( 美 国 L a b c o n c o 公 司) 。甲醇 、 乙腈、 甲酸 ( 色谱纯 ， 美 国 T E D I A公 司) ； 乙酸 乙酯 ( 色谱纯， 天津科密欧公 司) ； 2 ， 6 二叔 丁基对 甲酚( B H T ， 美国 S i g m a A l d r i c h公司) ； 花生四烯酸类标准品( 美 国 C a y m a n公司) 。实验用水均 由 Mi l l i Q超纯水器( 美国 Mi l l i p o r e 公司) 制得。 2 2实验 方法 2 2 1 标准溶液的配制配制系列浓度的 1 4 ， 1 5 E E T ，1 1 ， 1 2 E E T ， 8 ， 9 - E E T ， 5 ， 6 - E E T ， 1 4 ， 1 5 D H E T ， 1 1 ， 1 2 一 D HE T，8， 9 一 DHE T，5， 6 一 D HE T，8 一 HE T E，1 1 一 HE T E，1 5 一 HE T E，1 6 一 HE T E，P GE 2 ，P GD 2 ，P G J ， ， T X B ， 1 5 一 d e o x y 一 1 2 , 1 4 _ p G J ，P G F ： ，A A 混 合 标 准 溶 液， 并 加 入 内标 ， 定 容 ， 使 各 内标 最 终 浓 度 为 1 5 一 H E T E d 8 ( 1 mg L ) 、 P G B ( 0 2 5 m g L ) 、 A A d 8 ( 1 6 m g L ) ，一8 0 c 【 = 冰箱保存。 2 2 2 样品预处理取约 1 0 0 m g小鼠各组织样品， 生理盐水冲洗 ， 滤纸吸干后称重。加入 5 0 L混合 内标溶液( 1 m#L 1 5 一 H E T E d 8 ， 0 2 5 mg L P G B 1 ，1 6 m g L A A d 8 ) ， 5 0 0 tx L甲醇( 含 0 O 1 m o L L B H T ) 和 1 0 L甲酸 ， 混匀 ， 匀浆器匀浆 ， 超声破碎细胞( 工作时间 3 S ， 间隙时间2 s ， 工作 6 0次 ， 功率 4 0 0 W) 。 上述过程在冰浴 中进行 。4 c c 离心 2 0 ra i n ( 1 5 0 0 0 r mi n ) ， 取出上清液 ， 加入 7 0 0 Ix L水 、 1 mL乙酸乙酯 ， 涡旋 3 0 S ， 以 1 2 0 0 0 r m i n 离心 1 0 mi n ， 取出有机相 ， 水相再萃取一次 ， 合并 乙酸乙酯层 ， 冻干溶剂 ， 残留 物用 5 0 L甲醇溶解 ， 备用 。 2 2 3 色谱质谱条件Wa t e r s s y m m e t r y C 1 8 色谱柱( 2 5 0 m m 4 6 m m， 5 m) ， 柱温 ： 3 5； 流动相 ： 乙 腈 ( A) - ( ) 0 5 甲酸溶液( B) 。梯度洗脱 ： 01 0 m i n ， 4 0 A； 1 0 2 0 m i n ， 4 0 6 5 A； 2 03 5 m i n ， 6 5 A； 3 5 4 0 mi n ， 6 5 9 0 A； 4 0 5 0 mi n ， 9 0 A。流速： 1 mL m i n ； 进样量 ： 1 0 L 。柱后分流 比为 4 ： 1 。E S I 离子源 ， 负离子 MR M监测模式检测；帘气 ： 2 0 7 1 0 P a ， 雾化气 ： 2 7 61 0 P a ， 辅助气： 2 7 61 0 P a ； 电压 ： 一 4 2 0 0 V， 毛 细管温 度 ： 3 5 0 c C。 3结果与讨论 3 1 离子 对 的选 择 各标准样品经针泵注入质谱 ， 观察每个待测组分的母离子及子离子， 对强度较强的离子对分别进行 质谱参数优化后 ， 对混合标准样品进行 L C MS MS分析 ， 从 中选择相对丰度强、 背景干扰小的离子对作 为定量离子对。各待测物质 的质谱采集参数见表 1 。 表 l 花生四烯酸类化合物质谱采集参数 Ta b l e 1 Pa r a me t e r s f o r MRM d e t e c t i o n o f e i c o s a n o i d s 第 8期 谷 艳等：高效液相色谱一 电喷雾串联四级杆质谱法检测小鼠组织中花生四烯酸及其代谢产物 1 0 9 1 E ET：Ep o y e i c o s a t r i e n 0 i c a c i d；DHET：Di h y d m y e i c o s a t r i e n 0 i c a c i k；P G：P r o s t a g l a n k i n；TXB：T h r o mb o x a n e；AA ：Ar a c h i d o n i c a c i d 3 2 色谱分离情况 采用 Wa t e r s s y m me t r y C l 8 色谱柱 ， 乙腈一 甲酸溶液梯度洗脱的色谱方法 ， 在 5 0 ra i n内对 2 2种相关标 准品进行了色谱分离。由图 1 可见 ， 除 1 5 d e o x y A 1 2 , 1 4 _ p G j 和 5 ， 6 一 D HE T 、 A A和 A A d 8外 ， 其余各物质 均达到了基线分离。上述共流出物由于具有不同的离子对 ， 故不影响质谱定量。 HET E 2 【 2 1 4 P G J 2 8 , 9 E E T 1 5 HE TE AA d 8 P ( ET JI 8 - I t t ETE 1 1 ， 1 2 一 EE T r 5 , 6 EE T P ( D2 P GJ 2 l6 I 4 ， f 1 4 8 1 2 1 6 2 0 2 4 28 3 2 3 6 4 0 4 4 4 8 t rai n 图 1 花生 四烯酸类化合物标样总离子流色谱 图 Fi g 1 To t a l i o n i c e h r o ma t o g r a m o f e i c o s a n o i d s s t a n da r d s amp l es 3 3 标 准 曲线 与定量 限 按上述色谱质谱条件测定所配制的系列标准溶液 ， 其 中 E E T s ， HE T E s 和 D H E T s以 1 5 一 H E T E d 8为 内标 ， P G s 和 T X B 以 P G B 。 为内标 ， A A以 A A d 8为内标 。各被测物质 的线性相关系数均大于 0 9 9 ， 结 果见表 2 ( 详表见 h t t p ： w w w a n a l c h e m c n t a b l e 0 9 1 3 2 2 p d f ) 3 4准确度与精密度 以肺组织为代表 ， 在样品处理前加入 3个浓度的混合标准溶液， 每个浓度平行制备 6个样品， 以相 对 回收率和 R S D来表征方法的准确度和 日内精密度 ； 日间精密度 的评价是在 5个 工作 1 3内分别制备 3个浓度的样品， 计算其 R S D值。由表 3可见 ， ( 详表见 h t t p ： w w w a n a l c h e m c n t a b l e 0 9 1 3 2 2 p d f ) 待 测物质的回收率在 7 0 7 一1 2 3 0 之间， 方法重复性在可接受的范围内( R S D2 0 ) 。 3 5 基质效应 由于空白生物基质无法得到， 本研究通过比较相同量的内标在实际组织与纯溶剂中的峰面积之比 1 0 9 2 分 析 化 学 第3 8卷 考察是否有离子增强或抑制效应 。结果显示 ， 在各内标保留时间处 ， 响应信号没有明显 的增强或 减弱， 说明不存在基质效应 的影响 ( 肺组织 ： P G B 9 8 2 ， 1 5 H E T E d 8 9 2 9 ， A A d 8 8 9 5 ； 肝组织 ： P G B 1 9 3 9 ， 1 5 一 H E T E d 8 1 0 3 2 ， A A d 8 1 0 7 3 ； 脾组织 ： P G B 1 9 8 8 ， 1 5 一 HE T E d 8 9 7 2 ， A A d 8 1 0 3 0 ) 。 表 2 代表性化合物的线性关 系及定量 限( 简表 ) T a b l e 2 L i n e a r r a n g e ， c o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n t a n d l i m i t s o f q u a n t i f i c a t i o n( L O Q )o f r e p r e s e n t a t i v e c o m p o u n d s ( b ri e f ) 表 3 Ta b l e 代表性 化合 物的回收率 以及 13内、 13问精密度 ( 简表 ) 3 T e s t o f r e c o v e r i e s a n d i n t r a d a y a n d i n t e r d a y p r e c i s i o n f o r r e p r e s e n t a t i v e c o m p o u n d s ( b r i e f ) 化合 物 Co mp o u n d 加标浓度 Ad d e d ( m g L ) 测得值 F o u n d ( m g L ) 相对回收率 Re l a t i v e r e c o v e r y ( ，n= 6 ) 日内精密度 I n t r a d a y p r e c i s i o n R S D( ， n= 6 ) 日间精密度 I n t e r d a y p r e c i s io n R S D( ， n=5 ) 花生四烯 酸 ( AA) 1 4， 1 5 一 环氧二十碳三烯酸 ( 1 4 ， 1 5 - E E T ) 1 1 ， 1 2 环氧二十碳三烯 酸 ( 1 1 ， 1 2 - E E T ) 1 5 一 羟基二十碳四烯酸 ( 1 5 - HE T E ) 1 1 羟基二十碳四烯酸 ( 1 1 一 HE T E ) 1 1 。 1 2 一 二羟基二 十碳三烯酸 ( 1 1 ， 1 2 一 D HE T) l 4， 1 5 二羟基二十碳三烯酸 ( 1 4 ， 1 5 一 DH E T ) 前列腺素 E 2 ( P G E 2 ) 前列腺素 D 2 ( P G D 2 ) 0 5 5 0 4 0 0 4 1 0 6 0 0 1 O 2 5 1 5 0 0 4 0 1 0 6 0 04 0 1 O 6 0 0 2 0 1 0 6 0 0 2 0 1 0 6 0 0 2 0 1 5 2 0 0 0 2 0 1 5 2 O 0 5 8 3 4 4 7 4 3 6 5 9 0 41 7 1 0 6 7 5 5 6 4 0 0 9 8 0 2 5 6 1 2 7 0 0 3 9 0 0 9l 0 4 8 4 0 0 3 2 0 0 8 9 O 4 5 0 0 2 3 4 0 1 04 0 5 6 7 0 0 2 4 6 O 1 1 5 0 5 6 2 0 0 2 2 5 O 1 4 8 1 7 2 8 0 0 2 2 1 0 1 1 7 1 41 4 1 1 6 6 8 9 5 91 5 1 04 3 1 0 6 7 9 2 7 9 8 0 1 0 2 4 8 4 7 9 7 5 91 O 8 0 7 8 O 0 8 9 0 7 5 0 I 1 7 1 04 9 4 5 1 2 3 l 1 5 9 3 7 1 1 2 5 9 8 7 8 6 4 1 O 5 5 7 8 0 7 O 7 3 9 7 6 3 8 4 4 6 7 4 8 1 1 7 4 4 O l 4 7 7 1 6 l 1 1 3 2 5 3 7 5 0 4 5 7 1 7 4 4 9 l 6 9 5 l 1 1 8 1 2 1 9 1 4 5 9 5 3 6 7 4 5 1 3 5 5 5 3 9 3 l 0 l 6 1 8 7 0 1 1 3 9 3 8 l 0 l O l O 1 3 8 6 l 9 6 1 4 7 1 9 1 0 6 9 第 8 期 谷 艳等：高效液相色谱 电喷雾串联四级杆质谱法检测小鼠组织中花生四烯酸及其代谢产物 1 0 9 3 3 6 样 品的稳定 性 根据文献 1 5 ， 在肺组织处理前 ， 加入一定浓度的 5个有代表性 的标准样 品， P G E ： ， 8 ， 9 - D H E T， 1 5 H E T E， 1 4， 1 5 E E T和 A A， 考察复溶样品中这 5个物质在 4进样器 中的稳定性 。第 1 4 h时各物质 的峰面积与 0 h的峰 面积之 比分别为 ： P G E 2 9 5 8 ， 8 ， 9 - D HE T 9 9 3 ， 1 5 一 H E T E 9 5 7 ， 1 4， 1 5 - E E T 9 9 5 ， A A 9 8 7 。结果表明 ， 复溶样品至少在 1 4 h之内稳定。 3 7方法应 用 用上述方法分析了小鼠肺、 肝、 脾组织中的花生四烯酸类代谢产物。其中肺组织 中分布的代谢产物种 类相对较多( 见图 2 ) 。肺组织 中 8种代谢 产物的测定结果 为：1 l H E T E( 5 8 3-4 - 1 1 6 ) n g g ， 1 5 一 HE T E ( 5 2 61 5 5 ) n g g ， P G E 2 ( 2 1 01 0 2 ) g g ， P G D 2 ( 2 0 31 3 9 ) n g g ，P G J 2( 3 9 21 5 9 ) n g g ， T X B 2 ( 5 8 3 2 8 4 ) n g g ， P G F 2 ( 3 8 6 0 ) n g g ， A A( 1 9 8 0 5 4 4 ) n g g 。 6 4 3 O 4 8 1 2 l 6 2 O 2 4 2 8 3 2 3 6 4 0 4 4 4 8 t ra i n 图 2 小鼠肺、 肝、 脾组织中花生四烯酸类化合物的总离子流色谱图 Fi g 2 T o t a l i o ni c c h r o ma t o g r a ms o f e i c o s a n o i d s i n mi c e l un g，l i v e r a nd s pl e e n t i s s ue s 1 T XB2；2 P GF2 ；3PGE 2；4PGD2；5 P G J 2；6 PGB1 ；7 1 4， 1 5- DHET；8 1 5 一 HET E d 8；9 1 5 一 HE T E； 1 0 1 1 一 HE TE；1 2AA d 8；1 3AA 研究结果表明， 本研究采用 L C MS MS法同时测定 1 9种花生 四烯酸类代谢产物， 所测物质的分离 度 良好。采用经典的液一 液萃取 ， 操作简便。本方法具有重复性好 ， 灵敏度较高 ， 定量准确等优点 ， 可用 于生物组织样品中花生四烯酸及其代谢产物的测定。 Re f e r e n c e s 1 R o m a n R J P h y s i o 1 R e v ， 2 0 0 2 ， 8 2 ( 1 ) ：1 3 11 8 5 2 H u r l e y S D， O l s c h o w k a J A，O B a n i o n M K _， N e u r o t r a u m a ， 2 0 0 2 ， 1 9 ( 1 ) ：1 1 5 3 C o n s i l v i o C， V i n c e n t A M， F e l d m a n E L E x p N e u r o 1 ， 2 0 0 4 ，1 8 7 ( 1 ) ： 1 1 0 4 H a m p s o n A J ，G r i m a l d i M N e u r o s c i ， 2 o o 2 ， 2 2 ( I ) ： 2 5 7 2 6 4 5 D a v i s B B， T h o m p s o n D A P r o c N a t 1 A c a d S c i U S A， 2 0 0 2 ， 9 9 ( 4 ) ： 2 2 2 2 2 2 2 7 6 Mo n c a d a S，Va n e J RC i b a F o u n d S y ru p ，1 9 8 0，7 8：1 6 51 8 3 7 T o y o f u k u K， N i s h i m u r a J ， K o b a y a s h i S ， N a k a n o H， K a n a i d e H A m O b s t e t C o m e c o l ， 1 9 9 5 ，1 7 2 ( 5 ) ：1 4 1 41 4 2 1 8 B A O J i a n X i n ( 包建新 ) ，L O U Y a - P i n g ( 楼亚平 ) C h i n e s e P h a r m a c o l o g i c a l B u l l e t i n ( 中国药理 学通报 ) ，1 9 9 1 ， 7 ( 5 ) ： 3 2132 3 9 L U O D a L i ( 罗大力) ， Z H A N G Y o u Y i ( 张幼怡) ， H A N Q i D e ( 韩启德) P r o g r e s s i n P h y s i o l o g i c a l S c i e n c e s ( 生理科学进 展 ) ， 2 0 0 2 ， 3 3 ( 3 ) ： 2 5 1 2 5 4 1 0 Wal s h M F ， P e k S B D i a b e t e s ， 1 9 8 4， 3 3 ( 1 0 ) ： 9 2 9 9 3 6 分 析 化 学 第 3 8卷 1 1 Y E X i a o Z h e n ( 叶小珍 ) ， S H A O J i a Q i n g ( 邵加庆 ) ，WA N G J i a n ( 王 坚 ) C h i n e s e G e ner a l P r a c t i c e ( 中国全 科 医学) ， 2 0 0 9 ，1 2 ( 2 ) ： 1 6 01 6 2 1 2 N i t h i p a t i k o m K，Di c a me l l i R F，Ko h l e r S ，G u mi n a R J ，F a l c k J R，C a mp b e l l W B，Gr o s s G J A n a 1 Bi o c h e m，2 0 0 1， 2 9 2 ( 1 ) ： 1 1 51 2 4 1 3 T s i k a s D C h r o m a t o g r B， 1 9 9 8 ， 7 1 7 ( 1 2 ) ： 2 0 1 2 4 5 1 4 T s u k a mo t o H，Hi s h i n u ma T，Mi k k a i e h i T，N a k a mu r a H，Y a ma z a k i T，T o mi o k a Y，Mi z u g a k i M-， C h r o ma t o g r B， 2 0 0 2 ， 7 7 4 ( 2 ) ： 2 0 5 2 1 4 1 5 Y u e H F ， J a n s e n S A， S t r a u s s K I ， B o r e n s t e i n M R， B a r b e M F ， R o s s i L J ， Mu r p h y E J o u r n a l o fP h a r m a c e u t ic a l a n d B i o m e d ic a l A nal y s i s ， 2 0 0 7 ， 4 3 ( 3 ) ：1 1 2 21 1 3 4 1 8 1 9 B l e w e t t A J ，V a r m a D，G i l l e s T， L i b o n a t i J R，J a n s e n S A J o u r nal of P h a r m a c e u t ic a l a nd B io m e d i c a l A nal y s is ， 2 0 0 8 ， 4 6 ( 4 ) ： 6 5 3 6 6 2 Z h a n g J H，P e a r s o n T，Ma t h a r o o B a l l B，O r t o r i C A，Wa r r e n A Y，K h a n R，B a r r e t t D AAn a 1 B i o c h e m，2 0 0 7， 3 6 5( 1 ) ：4 051 Y a n g J ， S c h me l z e r K，G e o r g i K ，H a m m o c k B D A n a 1 C h e m ， 2 0 0 9 ， 8 1 ( 1 9 ) ： 8 0 8 58 0 9 3 R o g a t s k y E， S t e i n D R a p i d C o m m u n Ma s s S p e c t r o m ， 2 0 0 5， 1 6 ( 1 1 ) ： 1 7 5 71 7 5 9 De t e r mi na t i o n o f Ar a c h i d o n i c Ac i d a nd I t s End o g e no us Ei c o s a no i d M e t a b o l i t e s i n M i c e Ti s s u e s Us i ng Li q ui d Ch r o ma t o g r a ph y El e c t r o s pr a y I o n i z a t i o n Ta n de m M a s s S pe c t r o me t r y G U Y a n r ，S H I X i a n Z h e ， Z H A O S u M i n ， G U Q u n ， L U X i n ， X U G u o Wa n g ( C A S K e y L a b o r a t o r y o f S e p a r a t i o n S c i e n c e f o r A n a l y t i c a l C h e m i s t r y ， D a l i a n I n s t i t u t e of C h e mi c a l P h y s i c s ， C h i n e s e A c a d e m y of S c i e n c e s ， D a l i a n 1 1 6 0 2 3 ) ( D e p a r t me n t ofP h a r m a c e u t ic a l A n a l y s is， S c h o o l o fP h a r m a c y ， S h e n y a n g P h a r m a c e u t i c a l U n i v e r s i t y ， S h e n y a n g 1 1 0 0 1 6 ) Abs t r a c t A r e v e r s e d p h a s e l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y t a n de m ma s s s p e c t r o me t r y me t h o d wa s d e v e l o pe d t o s i m u l t a n e o u s l y a n a l y z e a r a c h i d o n i c a c i d ( A A)a n d i t s me t a b o l i t e s s u c h a s p r o s t a g l a n d i n s ( P G s ) ，t h r o m b o x a n e ( T X B 2 ) ，e p 0 x y e i c 0 s a t r i e n 0 i c a c i d s ( E E T s ) ， d i h y d r o x y e i c o s a t r i e n o i c a c i d s ( D H E T s )a n d h y d r o x y e i c o s a t e t r a e - n o i c a c i d s ( H E T E s )t h r o u g h t h e C o r r e s p o n d i n g c y c l o o x y g e n a s e ， c y t o c h r o m e P 4 5 0 ， a n d l i p o x y g e n a s e p a t h w a y s i n mi c e t i s s u e s Et h y l a c e t a t e e x t r a c t i o n wa s e mpl o y e d f o r s a mp l e p r e p a r a t i o n a f t e r s o ni c a t i o n i n a n i c e ba t h， a nd t h e o r g a n i c p h a s e wa s d rie d un d e r v a c u u m a n d di s s o l v e d i n me t h a n o l for t h e LC- MS MS a n a l y s i s 2 2 s t a n d a r d c o mp o u n d s we r e s e p a r a t e d wi t h i n 5 0 mi n u s i n g a g r a d i e