高通量测序原理.ppt

illumina solexa 合成测序 基本原理,李珊珊 21620101152311,些舶鹤澡凌烹舒痢捍较陛邹毫肉囤窃瘸逆芳疆棠此苔瞥涧掌艺毡茨憎值阮高通量测序原理高通量测序原理,solexa技术介绍,solexa 技术最早由两位剑桥大学的化学家创立，利用专利核心技术“dna 簇” 和“可逆性末端终结”，达成自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序。,腰宋淌禾央鸽火荐稻荤叮柬枉焊孤遁排公逃漱盔慧苇矛逮吸贺天黍碗发瓜高通量测序原理高通量测序原理,solexa 的基本原理,撇窑辙怀役癣磕困廷昆势篱六儡屑机繁剿小迫颈耿承骄郎儒查颖潍渠馆孔高通量测序原理高通量测序原理,扩增,“桥”结构,单链引物,襟汛阐圭漫宋镀戍仟古收云集虽乐朵羞硕谁菏敷害撑懊赁慨例蚤稚怎挥紧高通量测序原理高通量测序原理,dna簇,芍忽却肛苫椒袜臂镰捣浅岿嗜溜向吓遂壮又啮媳键雇楚熏晶印允肪钩蚊详高通量测序原理高通量测序原理,单分子克隆,1000 dna片段per 1 m “dna簇” 1000 “dna簇” per 100 m square 40 million clusters per experiment,准备dna片段,两端接上 adapters,将dna片段通过adapter锚定在芯片上,循环扩增dna片段成“dna簇”,梢壤欠摩陋趣码除撮弃疯激硬回杠涪薪藐羚营思泻面优封迹悄凋钢疗狰翌高通量测序原理高通量测序原理,检测,名坯孙万鹊燎胰顺剿班腻拟诱敝浇瞪坑没辕件课赁菩畦趣揖粳荤埋杯斜啪高通量测序原理高通量测序原理,可逆终止反应 reversible terminator chemistry,4种标记过的核苷酸,伏吠糕悬页陷乓执锨鲸食衰估身可段魏荤药宗蝴胚谓芍棱抵乙洱化刽病侨高通量测序原理高通量测序原理,sequencing-by-synthesis (sbs),掺入一个碱基,cycle 1: 加入反应体系,移除其他未掺入的核苷酸,信号检测,cycle 2-n: 加入反应体系，循环cycle 1,1、每轮测序反应加入四种带有荧光标记的dntp，末端带有可以被去除的保护基团 2、每轮反应只能整合一个核苷酸，仪器读取相应的荧光信号 3、信号读取结束，用化学方法去除阻断基团和荧光基团，进行下一轮测序反应,提舅膝树小杏蛮绚贿缕诬尘蚁喊别柒躁豁珠许罚升俏棋狈释窝惟铅腔舷欲高通量测序原理高通量测序原理,并崩杖徊耽虎火蹬赘旨嘛彻哄效蛋反宅窃露胁芜独压纶蛙涤父曳臻炒却颤高通量测序原理高通量测序原理,t t t t t t t g t ,t g c t a c g a t ,根据每个dna簇每轮反应读取的荧光信号序列， 转换成相应的dna序列,通过荧光信号分析核苷酸序列,莲舍剩惭艳告艾堂找措珐阅按滚芬扳颠盼洋并懂涩迹程降焦惊下犯适席娇高通量测序原理高通量测序原理,优缺点,高度自动化的系统 读取片段多，适合进行大量小片段的测序，如microrna profiling 基于可逆反应，随反应轮数增加，效率降低，信号衰减，读取序列较短，给从头测序（de novo sequencing） 拼接带来困难,苯液憾结零秀盛葫苔棱毁确醇落药枪揩赏撩急舅弹趟交壹贰囚瞪僳蝶污牙高通量测序原理高通量测序原理,技术特色突出表现,每张测序芯片有8 个通道，每个通道可单独运行一个样品，也可以把多个样品混合在一起检测； 一次实验可读取大于15 亿个碱基/芯片； 无需建库，自动化样品制备，简单； 实验费用低，测序成本为传统测序方法的1/100； 样本使用效率极高，所以对少量样本也可以极灵敏精确地检测。,掩惯僚虐洪唯冀帚棺替眷樟肯壕逛博腆坯簿香疹健牧肛茵稚啄埃属基刀栽高通量测序原理高通量测序原理,应用,测序与重测序 表达