革兰阳性需氧杆菌.ppt

1,第十三章 革兰阳性需氧杆菌,2,需氧芽胞杆菌属（bacillus）48个种 与医学有关5个种 炭疽芽胞杆菌（b.anthracis） 蜡样芽胞杆菌（b.cereus） 蕈状芽胞杆菌（b.mycoides） 巨大芽胞杆菌（b.megaterium） 苏云金芽胞杆菌（b.thuringiensis）,3,第一节 炭疽芽胞杆菌 （bacillus anthracis，b.anthraci ),一、临床意义 炭疽是人畜共患的急性传染病 主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染 皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等， 并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎,4,致病物质,荚膜： 抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散 炭疽毒素： 保护性抗原、致死因子、水肿因子,5,所致疾病,炭疽病： 传染源：患病食草动物及其制品或被污染物 传播途径：接触皮肤炭疽 食用肠炭疽 吸入肺炭疽 可并发败血症，死亡率极高,6,乙类传染病 发生肺炭疽按甲类处理,病后可获得持久免疫力,7,形态染色: 致病菌中最大的g+杆菌， 两端平切、竹节状 有毒株可有明显荚膜,二、 微生物特性,炭疽芽胞杆菌 亚甲基蓝染色 1000,革兰染色 1000,8,芽胞椭圆形，小于菌体，位于菌体中央 多在有氧条件下形成，2530，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞 在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸 体严禁解剖,9,培养特性： 需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温 度3035 普通培养基扁平、粗糙、不透明、灰白色、 无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边 缘呈卷发状,10,bap：1215h不溶血，1824h轻微溶血 其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速,炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落,11,肉汤絮状沉淀生长 明胶371824h表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。 nahco3bap： -有毒株5%co2、372448h、产生荚膜 呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点) -无毒株粗糙型菌落,12,生化反应：,分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖， 有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气 水解淀粉、还原硝酸盐 不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不 分解尿素 在牛乳中生长24天牛乳凝固缓慢胨化 触酶（+）、卵磷脂酶弱（+）,13,抗原构造： 菌体多糖抗原： -与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（ascoli热沉淀反应）。 -特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、14型肺炎链球菌、人a血型抗原发生交叉反应。,14,荚膜多肽抗原： -与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细 菌生长和扩散 -荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义 芽胞抗原： 有免疫原性和血清学诊断价值,15,炭疽毒素： -保护性抗原（pa)、致死因子（lf）、水肿 因子（ef）三个组分 -单独皆无致病性，与pa结合才显示出致病性 -具有抗吞噬和免疫原性,16,抵抗力：,-芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140 3h才能杀灭 -在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致 病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数 十年 -生物武器,17,-芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化 剂较敏感，常用以下方法杀菌： 1：2500碘 10min、 3%h2o2 1h、 4%高锰酸钾 15min、 0.5%过氧乙酸 10min -对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、 氯酶素均敏感,18,要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策,三、微生物学检验,19,标本的采集与处理,皮肤炭疽：病灶深部标本 肺炭疽：痰和血液 肠炭疽：粪、呕吐物 脑膜炭疽：csf、血液 死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消 毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局 限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。,20,无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基 污染杂菌固体标本：加10倍量生理盐水充分浸泡，振 荡1015min 、静置10min，取悬液65水浴30min或 855min杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养 污染杂菌液体标本：离心 ，弃上清液后，加0.5%洗涤 剂振荡1015min ，离心取沉淀物增菌和分离培养,21,生化反应,噬菌体裂解,青霉素抑制,毒力试验,荚膜肿胀试验,22,23,涂片染色： -g染色、荚膜染色、芽胞染色初步报告 -荚膜荧光抗体染色 核酸检测：核酸杂交 分离培养： -bap、戊烷脒多粘菌素b平板 -2%兔血清肉汤增菌分离培养,24,鉴定试验： 形态和菌落特征 生化试验:表11-1 串珠试验: -接种于含青霉素(0.050.5u/ml)的肉汤 中，37 6h，大而均匀成串的圆球状菌体 -与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关 -类炭疽无此现象,25,青霉素抑制试验： 接种于含青霉素5、10、100u/ml琼脂平板， 3724h 生长 受抑制不生长 串珠和青霉素抑制联合试验：,兔血琼脂平板,抑菌环,青霉素纸片,26,噬菌体裂解试验：ap631炭疽噬菌体 nahco3毒力试验： 接种于含0.5%nahco3和10%马血清的平板， 10%co2、37、2448h 有毒株形成荚膜黏液型菌落 无毒株不形成荚膜粗糙型菌落 动物试验： 小鼠、家兔或豚鼠皮下接种,27,植物凝集素试验： ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断,28,第二节 蜡样芽胞杆菌 (bacillus cereus, b. cereus ),29,一、临床意义,食物中毒 含菌量达105/g以上 呕吐型耐热肠毒素 腹泻型不耐热肠毒素 全眼球炎（外伤后） 心内膜炎、败血症和脑膜炎,30,夏、秋季多见 食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮料等，大多为加热烹调过的熟食 在米饭中极易繁殖，由米饭受污染引起的食物中毒在国内、外均为常见 中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意,31,形态与染色： - g+大杆菌 -生长6h后即形成圆形芽胞、位于 菌体中心或次末端、不突出菌体 -菌体两端平截，多数呈链状排列 -引起食物中毒的菌株多有周鞭 毛、无荚膜,二、微生物特性,32,培养特性： 需氧或兼性厌氧 营养要求不高 最适温度3035 普通琼脂平板：菌落较大， 灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有 蜡样光泽,33,bap 有溶血 卵黄平板生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应,34,生化反应： 能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊 精，产酸不产气 能胨化牛乳，液化明胶，vp（+）、卵磷脂 酶（+） 多次传代后生化特性常可改变,35,抵抗力： 耐热，肉汤中细菌需10020min才能杀死， 食物中毒菌株的游离芽胞耐受10030min、 干热12060min才能杀死 对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感，对青霉 素、磺胺、呋喃类耐药,36,三、微生物学检验,标本采集： 可疑食物、粪便、呕吐物，因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。,37,确诊由该菌引起的食物中毒必须：,从食物中分离出菌数105cfu/g，提示本菌活跃生长，构成潜在危险 从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或)呕吐物中分离到的菌株属同一血清型,38,39,检验方法： 直接镜检 分离培养与活菌计数 普通琼脂平板、bap、卵黄平板 鉴定与分型： 根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定 生化分型、血清分型、噬菌体分型，肠毒素检测,40,第三节 产单核细胞李斯特菌和 红斑丹毒丝菌,41,一、产单核细胞李斯特菌 （listeria monocytogenes ) 隶属于李斯特菌属,42,（一） 临床意义,李斯特菌属有7个种，只有该菌对人和动物致病 分布广泛，土壤、水、植物、人和动物粪便中均存 在，亦可自甲壳动物、蝇、蜱中分离出 能引起多种野生动物和家畜感染（羊、马、狗、猫、 鸟、鱼等） 正常人粪便带菌率达10%左右，70%的人可短期带 菌。新生儿、免疫功能降低者，易受该菌感染,43,致病物质： 李斯特菌溶血素o(llo)主要毒力因子 内在素表面蛋白（侵袭性蛋白） 磷脂酶c,44,所致疾病:,健康带菌者是主要的传染源 污染食物，粪-口途径传播，通过肠道扩散全身 胎盘和产道感染新生儿 接触病畜及产品眼和皮肤的局部感染,45,孕妇李斯特菌病 新生儿李斯特菌病 成人李斯特菌病 局部感染,46,（二） 微生物特性,形态与染色： g+短小杆菌，形态与培养时间有关-37 36h，菌体主要呈杆状，随后以球杆状为 主，35天常形成长丝状 无芽胞，一般不形成荚膜，在含血清的葡萄 糖蛋白胨水中能形成粘多糖荚膜,47,2025形成周鞭毛，有动力；37时鞭毛 很少或无 细菌接种半固体培养基，置室温，由于动力 强，细菌自穿刺线向四周弥漫生长，在离琼 脂表面数毫米处出现一个倒伞形的生长，是 本菌特征之一,48,培养特性：,兼性厌氧菌、生长温度范围广0.545均生长 （4冷增菌），最适3037 营养要求不高，在含血液、血清、腹水的培养基生 长更好 bap极小的露滴状、侧光微显蓝绿色灰白色 菌落。狭窄的溶血环 萘啶酸选择性平板细密湿润、边缘整齐的兰色圆 形小菌落 肉汤均匀混浊，表面有菌膜,49,生化反应：,3724h，发酵葡萄糖、果糖、蕈糖、麦芽糖和水杨素产酸不产气 触酶（+）甲基红（+）vp（+） 水解七叶苷、水解精氨酸产氨 camp（+）,50,分型：,根据o抗原和h抗原，分4个血清型， 1、3、4型可分若干亚型 抗原结构与毒力无关，与地理分布有联系 与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、大肠 杆菌等有共同抗原,51,抵抗力：,耐盐、耐碱、不耐酸 对热、常用消毒剂敏感 多种抗生素敏感，首选氨苄青霉素，青霉素、链霉素、红霉素等也敏感 对杆菌肽、多粘菌素耐药,52,（三） 微生物学检验,标本采集： 血液、csf、宫颈、阴道、鼻烟分泌物等 直接涂片： -在csf标本中成对排列，形如球菌，易误认为肺 炎链球菌 -g染色过度脱色形似流感杆菌 - 有时与类白喉杆菌也极易混淆 可用该菌1型和4型及多价荧光抗体染色，同 时作动力检查,53,分离培养： bap、巧克力平板 杂菌污染标本可用20%nacl心脑浸液肉汤2支 1支10%co2，372448h分离培养（bap、萘啶酸选择性平板） 1支4 “冷增菌” 分离培养（每24h一 次，共4次，以后每周一次，至少4周）,54,鉴定： 形态特征、菌落特点、动力及生化反应作出 鉴定 可疑菌落用已知李斯特菌1型、4型或多价抗 血清做玻片凝集试验进行鉴定 与其他g+菌鉴别,55,触酶 动力 马尿酸盐水解 产单核李斯 + + - b群链球菌 - - +,本菌有耐碱耐盐的特点，可用触酶试验与 肠球菌鉴别,56,二、 红斑丹毒丝菌（erysipelothrix rhusiopathiae， e. rhusiopathiae）,本菌隶属于丹毒丝菌属,57,（一） 临床意义,广泛分布于自然界，是许多脊髓动物和无脊 髓动物的共生菌或致病菌 易感动物有小鼠、猪、鱼、火鸡等 主要储存宿主是猪 人类可因接触病畜或其产品而感染,58,毒力与其产生的神经氨酸酶有关，能使 细菌粘附至靶细胞 从事屠宰、经营鱼类和皮革行业的人员及兽医等感染机会较多 通过破损皮肤侵入，引起局限性皮肤病灶，通常称“鱼毒”或“类丹毒”,59,（二）微生物特性,形态与染色： g+杆菌，菌体细长、直或稍弯，单个或短链状，慢性期分离的菌落为粗糙型，常呈长丝状，而且有分支及断裂，与放线菌近似.无荚膜、无芽胞、无鞭毛,红斑丹毒丝菌 革兰染色 1000,60,培养特性: 厌氧或微需氧、初次分离需在厌氧环境，传代后有氧环境也能生长，最适温度30-35。 在含葡萄糖或血清培养基生长旺盛,61,bap：3524h可形成两种菌落 光滑型：菌落细小、透明突起、发亮、边缘整 齐、质软易于悬于液体中，毒力较强 粗糙型：菌落较大，颗粒状、扁平、边缘不齐 可呈卷发状，无毒力 bap上新分离的菌株有 轻微的溶血，培养时 间延长溶血现象明显， 传代后溶血特性常消失,62,在半固体表层下数mm处发育最好，常呈带状 含碲盐的培养基黑色菌落,63,葡萄糖肉汤：培养24h后，呈轻微混 浊，不 形成菌膜，室温静置23天后，管底有少量 灰色沉淀；粗糙型沉淀较多。 s-r变异同时毒力、抗原性也发生变异，但 遗传学上不稳定，常出现互变。,64,（三）微生物学检验,标本：病灶边缘组织碎片或皮肤病变抽出液 直接涂片g染色镜检：g+细长杆菌，有时长丝形，单独或呈短链状。 分离培养：1%葡萄糖肉汤，355%co2环境增菌，每日移种bap，可出现二种菌落（s型和r型）,65,鉴定依据： g+、h2s +、无动力、触酶 -、吲哚 -、vp - 与产单核细胞李斯特菌鉴别（表11-2） 新霉素敏感试验：红斑丹毒丝菌r 产单核李斯特菌s 动物毒力试验：对小鼠、大鼠、兔、鸽均有致 病性，0.2ml的24天培养物注入小鼠腹腔，4-5 天后，败血症而死，心血培养（+）,66,第四节 阴道加特纳菌,（gardnerella vaginalis ，gv）,属于加特纳菌属 此菌属只有本菌一个种,67,一、 临床意义,与非特异性阴道炎（细菌性阴道病）有关,68,二、 微生物特性,