水溶性多肽类药物固体脂质纳米粒制备及生物特性研究---药剂学硕士论文

洳专：J 、 1 0 3 3 5 2 0 2 1 9 0 0 6 硕士学位论文 论文题目水溶性多肽类蔼物固体脂质 纳朱粒制备及生物特性研究 作者姓名 指导教师 学科( 专业) 所在学院 提交日期 洪昀 胡富强教授 焉荆学 1 1 5 学院 二零零五年五月 新江大学硕士学位论文水溶性多肚类药物固体膊质纳米粒制备及生物特性研究 中文摘要 水溶性多肽类药物固体脂质纳米粒制备 及其生物特性研究 浙江大学药学院 2 0 0 2 级硕士研究生 导师 药剂学专业 洪昀 胡富强教授 近年来，随着生物工程学及基因工程领域的发展，大量多肽及蛋白质类 药物开始应用于临床。受药物化学、生物学稳定性的影响，以及生物利用度 等_ 司题的限制，采用常规的注射给药可引起血药浓度波动，容易导致机体的 不怠反应。将多肽及蛋白质类药物设计成控释给药系统，可维持长时间稳态 的血药浓度，并可减少药物用量，具有重要的临床意义。 以生理相容的脂质为骨架材料制各得到的固体脂质体纳米粒( s o l i dl i p i d n a n o p a r t i c l e s ，S L N ) ，是继乳剂、脂质体、微粒和毫微粒后，近年来研究十分 活跃的靶向控释胶粒给药系统。S L N 在室温下通常呈现固态，具有聚合物纳 米粒物理稳定性高、药物泄漏少的优势，又兼有脂质体、乳剂毒性低、能大 规模生产的优点，是一种潜在的新型给药系统。 本课题选用不同性质的固体脂质，制备得到空间结构稳定、具备不同理 化性质的固体脂质纳米粒。采用溶剂扩散法制备固体脂质纳米粒，以水溶性 药物为模型药物，研究纳米粒的空间结构，测定其粒径分布、表面电位、药 物包封率，考察载药纳米粒的体外释放：通过纳米粒的P E G 2 0 0 0 修饰，考察 其含量对纳米粒粒径分布、表面电位、药物包封率及体外释放的影响；采用 溶剂扩散法，制备脂质A 、脂质B 和脂质C 的混合脂质载药纳米粒，研究其 浙江大学硬士学位论文水溶性多败类药物固体腊质纳米粒制各及生物特性研究 粒径、表面电位和药物包封率，进行其体外药物释放特性研究。 用水性溶剂扩散法可以简便、快速制备得到单硬脂酸甘油酯固体脂质纳 米粒，纳米粒数均值4 0 0 1n m ，体均值4 0 3 2n n l 。采用调节分散介质酸性口H 的方法，在普通离心条件下，可达到纳米粒与分散体系之间的有效分离，此 时S L N 的表面电位接近于零。利用上述方法，得到的戈那瑞林( g o n a d o r c l i n ) 纳米粒的包封率为6 9 4 。单硬脂酸甘油酯固体脂质纳米粒在P B S 溶液中释 放曲线分为两相，最初2 小时有1 3 9 药物突释，随后1 4 天药物释放明显减 慢，每天释放约药物总量的3 9 7 。从释放结果推测，S L N 是一个药物与脂 质的混合骨架结构，部分药物可能以分子或细小粒子形式吸附在纳米粒表 面，或沉淀在脂质基质的浅表面，从而产生释放曲线初始阶段的药物突释。 此后，药物释放速率则取决于释放介质对脂质的融蚀程度和药物从刚性基质 结构中的扩散速度。 S L N 处方中加入一定比例的P E G 2 0 0 0 ，纳米粒的体均大小随P E G 2 0 0 0 量的增加而增大。当P E G 2 0 0 0 的处方量达1 0 时，制备得到的纳米粒有两 个粒径分布区域，数均值分别为1 4 1 O h m ( 8 3 7 ) 和4 1 6 5 r i m ( 1 6 3 ) ， 平均1 8 5 9 n m ；体均值分别为1 4 2 6 r i m ( 含2 4 1 ) 和4 1 5 3 n m ( 含7 5 9 ) ， 平均3 4 9 6 r i m 。由于P E G 2 0 0 0 为亲水性物质，纳米载体系统中加入P E G 2 0 0 0 ， 可在脂质骨架结构中形成亲水性通道，使药物易从亲水性通道中渗漏到外水 相中，可降低亲水性药物的包封率。当处方中P E G 2 0 0 0 的量从0 增加到3 0 ( w w ) 时，硫酸沙丁胺醇的包封率从4 1 1 降低到3 3 6 ，释放速率明显加 快，同时药物的突释现象趋于显著。当P E G 2 0 0 0 的量增加到3 0 时，最初2 小时有2 2 1 的药物突释，随后每天释放量约占总量的1 5 6 ，5 天内药物 释放完全。这一结果表明，P E G 2 0 0 0 可加快小分子亲水性药物从S L N 中的 释放速率。 以混合脂质材料制备固体脂质纳米粒时，S L N 粒径与处方中液体脂质的 加入比例有关。当处方中脂质C ( 液体脂质) 贪量为5 时，制备得到的纳 米粒有两个粒径分布区域。纳米粒数均值分别为1 0 2 6 n m ( 9 5 7 ) 和4 1 3 6 r i m 2 浙江大学硕士学位论文水溶性多肽类药物固体脂质纳米粒制备及生物特性研究 ( 4 3 ) ，平均1 1 6 0 n l l l ；体均值分别为1 3 7 7 r i m ( 含2 8 6 ) 和4 1 5 3 r i m ( 含 7 1 4 ) ，平均3 3 5 9 r i m 。当脂质C 比例达到1 0 以上时，粒径明显减小， 粒径分布更加均一。S L N 的Z e t a 电位的绝对值随着处方中脂质C 含量的增 加而增大。以胰岛素( i n s u l i n ，I N S ) 为模型药物制备得到的S L N ，载体材料 中脂质C 的增加，有助于提高药物的承载量和包封率。当处方中脂质C 的含 量由0 上升到2 0 时，I N S S L N 的包封率由3 3 6 提高到9 0 5 。S L N 载 药量的提高，与晶格的扰乱、纳米粒中无定型不规则结构的增加有关。 混合脂质载体制备得到的S L N ，其药物的释放呈现两相释放特征。药物 释放初始1 2 小时呈快速释放，释放速率与脂质C 含量有关，随脂质C 含量的增 加而加快；随后，药物呈持续的缓慢释放，释放速率受脂质C 的影响较小。 降钙素( s a l m o nc a l c i t o n i n ，s C a l ) 固体脂质纳米粒( s C a I S L N ) 体外释放研究 表明，处方中不含脂质C 时，药物的释放速度比较缓慢；处方中脂质C 的加入， 能明显增 3 I s C a l 从S L N 中释放。I N S S L N 体外释放过程中，处方中不含脂质C 时，药物的释放行为呈两相模型，2 4 小时释放被包封药物总量的8 5 7 ；当 脂质C 含量增m n N 2 0 时，最初0 5 4 , 时释放被包封药物总量的5 8 7 ，4 6 小时几乎完全释放( 释放了药物总量的9 2 3 ) 。干扰素( I n t e r f e r o n a2 a ，I F N ) 固体脂质纳米粒( r F N S U ) 体外释放曲线，与前述的药物从S I N 中的释放 相比较，体现出更趋缓慢的药物释放特性，这个释放特性与I N S S L N 的体外 释放相类似。 研究结果表明，脂质C 的加入可调节体外释放速度，加大药物的突释量， 加快药物的释放速度。这种现象很可能与液体脂质较多分布于纳米粒骨架结 构的表层及浅表层部位有关。控制溶剂扩散法的制备温度和处方中液态脂质 的含量，可提高S 1 2 q 的载药能力并获得可控的药物释放速度。研究结果也同 时揭示，选择合适的脂质载体包裹水溶性多肽类药物，能够提高包裹在纳米 粒中的药物的稳定性，延长药物作用时间，有利于制各多肽类药物长效制剂， 并达到控释的目的。 一塑查兰堡圭堂垡篓壅：查鳖丝墨些茎塑望璺苎! ! 璺垫鲞垫型墨墨生望塑堡里壅 关键词：溶剂扩散法；固体脂质纳米粒；戈那瑞林；硫酸沙丁胺醇：溶菌酶； 鲑鱼降钙素；胰岛素；干扰素；单硬脂酸甘油酯：聚乙二醇2 0 0 0 ；脂质A ； 脂质B ：脂质C 浙江大学顶士学位论文- 水溶性多肚类药物固体脂质纳米粒制各及生物特性研究 P r e p a r a t i o na n dc h a r a c t e r i z a t i o no fs o l i dl i p i d n a n o p a r t i c l e sc o n t a i n i n gh y d r o p h i l i cp e p t i d e D e p a r t m e n to f P h a r m a c e u t i c s C o l l e g eo fP h a r m a c e u t i c a lS c i e n c e s ，Z h e j i a n gU n i v e r s i t y G r a d u a t eS t u d e n t H o n g Y u n S u p e r v i s o r P r o f e s s o rH u F u q i a n g A b s t r a c t I nr e c e n ty e a r s ，m a n yn e wp h a r m a c e u t i c a l l ya c t i v ep o l y p e p t i d e sh a v eb e e n d e v e l o p e dd u et o t h e p r o g r e s so fb i o t e c h n o l o g i c a lt e c h n i q u e s a n dg e n e t i c e n g i n e e r i n g T h e s en e wt h e r a p e u t i cb i o m o l e c u l e sa r eu s u a l l yc h a r a c t e r i z e db y l a r g es i z e ，s h o r tp l a s m ah a l f - l i f e ，l i m i t e da b i l i t yt oc r o s sc e l lm e m b r a n e s ，a n d f r e q u e n ti n j e c t i o no fd r u go v e ral o n gt h e r a p e u t i cp e r i o da r eg e n e r a l l yr e q u i r e d w h e nt h e ya r eu s e dt ot r e a td i s e a s e T h e r e f o r e ，t h ed e s i g no fan e wd o s a g ef o r m l e a d i n gt op r o l o n g e dr e l e a s es h o u l db e s u i t a b l et Oo v e r c o m es u c hap r a c t i c a l d i s a d v a n t a g e S o l i dl i p i dn a n o p a r t i c l e s ( S L N ) 缸ec o l l o i d a lc a g i e rs y s t e m 妇c o n t r o l l e dd r u g d e l i v e r ya n df o l l o w e db yt h ed e v e l o p m e n t o fe m u l s i o n ，l i p o s o m e s ，m i c r o p a r t i c l e s a n dn a n o p a r t i c l e sb a s e do ns y n t h e t i cp o l y m e r s T h e yc o m b i n ea d v a n t a g e so f e m u l s i o n s ，l i p o s o m e s a n dp o l y m e r i cn a n o p a r t i c l e s I d e n t i c a lt op o l y m e r i c n a n o p a r t i c l e s ，t h e i rs o l i dm a t r i xp r o t e c t si n c o r p o r a t e da c t i v ei n g r e d i e n t sa g a i n s t c h e m i c a ld e g r a d a t i o na n dp r o v i d e st h eh i g h e s tf l e x i b i l i t i e si nt h em o d u l a t i o no f t h ed r u gr e l e a s ep r o f i l e s S i m i l a rt oe m u l s i o n sa n dl i p o s o m e s ，t h e ya r ec o m p o s e d 5 塑垩奎芏堡圭堂堡堡奎：查塑壁垒墼鲞蔓塑里堡塑垦塾鲞塾! ! 墨墨生塑鉴生堡塞 o fw e l l p h y s i o l o g i c a l l y t o l e r a t e d e x c i p i e n t sa n dc a nb ep r o d u c e do nl a r g e i n d u s t r i a ls c a l eb yh i g hp r e s s u r eh o m o g e n i z a t i o n S o l i dl i p i dn a n o p a r t i c l e s ( S E N ) a r eab i o d e g r a d a b l ep a r t i c u l a t ed r u gd e l i v e r y s y s t e m C o m p a r e dt oo t h e rp a r t i c u l a t ec a r r i e r st h eS L Nh a sm o r ea d v a n t a g e sf o r d r u gd e l i v e r ys y s t e m ，s u c ha sag o o dt o l e r a b i l i t ya n db i o d e g r a d a t i o n ，ah i g h b i o a v a i l a b i l i t yb yo c u l a ra d m i n i s t r a t i o n ，at a r g e t i n ge f f e c to nb r a i n I nr e c e n t y e a r s ，t h es t u d yo nS L Nh a sm a r k e d l yi n c r e a s e d ，e s p e c i a l l yw i t ht h em e t h o do f h i g hp r e s s u r eh o m o g e n i z a t i o n D u et ot h el i p o p h i l i cm a t e r i a lo fS L N ，o n l yaf e w i n v e s t i g a t i o n sh a v eb e e ns t u d i e dr e g a r d i n gt h ei n c o r p o r a t i o no fp e p t i d e si n t oS L N a n d f e wr e s e a r c hh a sb e e nr e p o r t e dt h ed m gr e l e a s ef r o mp e p t i d e l o a d e dS L N T h ep r e s e n ts t u d yp r e p a r e ds e v e r a ls t a b l eS L N u s i n gd i f f e r e n tk i n d so fl i p i d s M o n o s t e a r i nS L Nw e r ep r e p a r e db ys o l v e n td i f f u s i o nm e t h o di na q u e o u ss y s t e m T h eh y d r o p h i l i cm o d e ld r u g sw e r ei n c o r p o r a t e dt o s t u d yt h er e c o v e r yo f n a n o p a r t i c l e s ，e n t r a p m e n te f f i c a c y ，z e t ap o t e n t i a l ( c h a r g e ) a n dd m gd e l i v e r y c h a r a c t e r i z a t i o n L i p i dA l i p i dB l i p i dCS L Nw a sp r e p a r e db yt h es a m es o l v e n t d i f f u s i o n t e c h n i q u e a n dt h ec o m p o u n dw a s s u c c e s s f u l l yf o r m u l a t e di n t o n a n o p a r t i c l e sb ys o l v e n t d i f f u s i o nm e t h o d T h er e c o v e r yo fn a n o p a r t i c l e s ， e n t r a p m e n te f f i c a c y ，z e t ap o t e n t i a l ( c l i a r g Oa n dd r u gd e l i v e r yc h a r a c t e r i z a t i o n W e r es t u d i e d T h eo p t i m a lc r y o p r o t e c t a n tw a ss e l e c t e db yf r e e z e - t h a wt e s ta n d r e c o n s t i t u t i o no ft h el y o p h i l i z e dp r o d u c t s T h er e l a t i v e b i o a v a i l a b i l i t yo ft h e I N S S I Ng i v e nb yg a v a g ew a ss t u d i e dw i t hac o m m e r c i a l l ya v a i l a b l eI N S s o l u t i o np r o d u c ta sar e f e r e n c ef o r m u l a t i o n M o n o s t e a r i ns o l i dl i p i dn a n o p a r t i c l e sw e r eq u i c k l yp r e p a r e db yan o v e ls o l v e n t d i f f u s i o nm e t h o di na q u e o u ss y s t e m T h eS L Nw e r em o n o d i s p e r s e ds p h e r e s T h e n u m b e rm e a nd i a m e t e ra n dt h ev o l u m em e a nd i a m e t e rw e r e4 0 0 1n ma n d4 0 3 2 n m r e s p e c t i v e l y S L Nc o u l db es e p a r a t e dc o m p l e t e l yb yc e n t r i f u g eo f2 2 2 0 0 r r n i n “ 1a tt h ec o n d i t i o no ft h ea c i d i cd i s p e r s e da q u e o u sm e d i u mw i t hp H1 1 0 A t 6 浙江大学硕士学位论文- 水溶性多肽类药物固体脂质纳米粒制备及生物特性研究 t h i st i m e ，t h ez e t ap o t e n t i a lv a l u eo fd r u gl o a d e dS L Ni sa p p r o a c h e dz e r oa n d f o r m i n ga g g r e g a t i o no fS L N A sD S Cm e a s u r e m e n tw i t hp o w d e r e dS L N ，w e f o u n dt h a tt h ee n d o t h e r m i cp e a kp r e s e n t e da tt h es a m et e m p e r a t u r ep o i n ta st h e o r i g i n a ld r u gc r y s t a l I tm e a n st h a tt h eo r i g i n a ld r u gc r y s t a ll a t t i c ei sf o r m i n ga f t e r p r e p a r a t i o n 。U pt o6 9 4 o fd r a gc a nb ei n c o r p o r a t e d I nv i t I or e l e a s eo fd r u g f r o mS L Ni ss l o w I nt h et e s ts o l u t i o no fa p H 6 8p h o s p h a t eb u f f e r , t h e d r u g r e l e a s eb e h a v i o rf r o mS L Ns u s p e n s i o ne x h i b i t e dab i p h a s i cp a t t e r n A f t e r b u r s tr e l e a s ea tt h ef i r s t2ha tap e r c e n t a g eo f1 3 3 o fl o a d e dd r u g ad i s t i n c t l y p r o l o n g e dr e l e a s eo v e ram o n i t o r e dp e r i o do f1 4d a y sw a so b s e r v e da n dn e a r l y 3 9 7 d r u gw a sr e l e a s e di ne a c hd a y T h e s ef i n d i n g si n d i c a t e dt h a tt h ei n t e r n a l s t r u c t u r eo ft h eS L Nw a sap o l y m e r i cl i p i dm a t r i x A ss o m ed r u ga d s o r b e do nt h e s u r f a c eo fn a n o p a r t i c l e s ，t h ed i s s o l u t i o np r o f i l eo ft h eS L Ne x h i b i t e dab u r s to f d r u gd u r i n gi n i t i a ls t a g e D u r i n gt h el a t e rs t a g e ，t h ed r u gr e l e a s er a t ew a s d e t e r m i n e db yt h ed i f f u s i o no fd r u gf r o mt h er i g i dm a t r i xs t r u c t u r e P E G 2 0 0 0 m o n o s t e a r i nS L N sw e r ep r e p a r e db ys o l v e n td i f f u s i o nm e t h o dt o o W h e nt h ep e r c e n t a g eo fP E G 2 0 0 0i np r e p a r a t i o ni s1 0 ，t h ep a r t i c l e sp r e p a r e d u n d e rt h ea c i d i cc o n d i t i o ne x h i b i t e db i m o d a lp a r t i c l es i z ed i s t r i b u t i o n ，w i t ha n u m b e rm e a nd i a m e t e ro f1 4 1 0 r i m ( 8 3 7 ) a n d4 1 6 5n n l ( 1 6 3 ) ，r e s p e c t i v e l y A n dt h ev o l u m em e a nd i a m e t e ri s1 4 2 6 n m ( 2 4 1 ) a n d4 1 5 3 r i m ( 7 5 9 ) ， r e s p e c t i v e l y T h ea m o u n to fs a l b u t a m o ls u l f a t ei n c o r p o r a t e di n t oS L Ni s a l s o c o r r e l a t e dw i t ht h ep e r c e n t a g eo fP E G 2 0 0 0 ( w w ) i nt h eo r g a n i cp h a s ed u r i n gt h e p r e p a r a t i o np r o c e s sa n dd e c r e a s e dw i t ha ni n c r e a s i n gp r o p o r t i o no fP E G 2 0 0 0i n t h eo r g a n i cp h a s e ，w h i c hi sa t t r i b u t e dt oP E G 2 0 0 0i n c r e a s e dl e a k a g eo f h y d r o p h i l i cd r u gi n t ot h eo u t e ra q u e o u sp h a s e S i n c eP E G 2 0 0 0i s as i g n i f i c a n t h y d r o p h i l i cc o m p o n e n to ft h ec a r r i e rs y s t e m ，t h i sm o d i f i c a t i o na l s o l e dt Oa r e d u c t i o ni n e n t r a p m e n te f f i c i e n c y , v a r y i n gf r o m4 1 1 t O3 3 6 w h e nt h e p e r c e n t a g eo fP E G 2 0 0 0 i nt h er e s u l t a n to r g a n i cp r e p a r a t i o ns o l u t i o nw e n tf r o m 7 塑堡查堂塑主堂垡笙兰：查塑堡垒些鲞壅塑望竺塑堕塑鲞垫! ! 查墨皇塑壁丝翌塞 O t o3 0 ( w w ) D r a gr e l e a s ef r o mP E G 2 0 0 0 m o d i f i e dS L Nw a sf a s t e r A f t e r m o d i f i c a t i o no ft h eS L Nm a t r i xw i t hP E G 2 0 0 0 ，e g w h e n3 0 ( w w ) o f P E G 2 0 0 0w a sp r e s e n ti nt h eo r g a n i cp h a s e ，n e a r l y1 0 0 o ft h ed r u gw a sr e l e a s e d f r o mS L Ni n o n l y5d a y s ，f o l l o w i n gt h es i m i l a rb i p h a s i ep a t t e r na sw i t h m o n o s t e a r i nS L N T h e s er e s u l t sd e m o n s t r a t et h a tm o d i f i c a t i o nw i t hP E G 2 0 0 0c a n a c c e l e r a t er e l e a s eo fh y d r o p h i l i cd r u g sf r o mS L N W h e nt h eS I Nw e r em o d i f i e db y5 l i p i dCi np r e p a r a t i o n t h ep a r t i c l e s e x h i b i t e db i m o d a lp a r t i c l es i z ed i s t f i b u t i o n T h en u m b e rm e a nd i a m e t e r sa r e 1 0 2 6m n ( 9 5 7 ) a n d4 1 3 6n m ( 4 3 ) ，r e s p e c t i v e l y A n dt h ev o l u m em e a n d i a m e t e r sa r e1 3 7 7n m ( 2 8 6 ) a n d4 1 5 3n r f l ( 7 1 4 ) ，r e s p e c t i v e l y 。W h e nt h e p e r c e n t a g eo fl i p i dCi np r e p a r a t i o nw a su pt o1 0 ，t h es i z eo fS I NW a s d e c r e a s e d T h ea v e r a g ee n t r a p m e n te f f i c i e n c yo fm o n o s t e a r i n S L Ni s3 3 6 L i p i dCm o d i f i c a t i o nl e dt ot h ei n c r e a s i n gi ne n t r a p m e n te f f i c i e n c y , v a r y i n gf r o m 3 3 6 t O9 0 5 w h e nt h ep e r c e n t a g eo fl i p i dCi nt h er e s u l t a n to r g a n i c p r e p a r a t i o n s o l u t i o nw e n t f r o mO t o2 0 ( w w ) T h ei m p r o v e dd r u g e n c a p s u l a t i o ne f f i c i e n c yo rl o a d i n gc a p a c i t ya n df a s t e rd r u gr e l e a s er a t ew e r e o b s e r v e db yi n c r e a s i n gt h ea m o u n to fl i q u i dl i p i dS L Nl o a d e d R e s u l t sc o n f i r m e d t h a t ，t h ei m p r o v e dd r u gl o a d i n gc a p a c i t yo fS L Nw a sr e l a t e dw i t ht h e i rc r y s t a l o r d e rd i s t u r b a n c eb yl i q u i dl i p i d I nv i t r or e l e a s eo fd r u gf r o mS L Nm o d i f i e db yl i p i dCi np r e p a r a t i o nw a sf a s t e r t h a nm o n o s t e a r i n S I N I nt h et e s ts o l u t i o no fap h o s p h a t eb u f f e r ，t h ed r u g r e l e a s e b e h a v i o rf r o mS L Ns u s p e n s i o ne x h i b i t e dat r i p h a s i cp a t t e r n A f t e rb u r s td r u g r e l e a s ea tt h ef i r s t1 2h o u r s ，w h i c hw a sc o n c e r n e dw i t ht h ep e r c e n t a g eo fl i p i dC i np r e p a r a t i o n , ad i s t i n c t l yp r o l o n g e dr e l e a s ew a so b s e r v e d ，w h i c hh a dn o t h i n g 幻 d ow i t ht h ep e r c e n t a g eo fl i p i dCi np r e p a r a t i o n F o re x a m p l et h em o d e ld r u g i n s u l i nW a si n c o r p o r a t e di nm o n o s t e a f i n S L N W h e nt h ep e r c e n t a g eo fl i p i dCi n 8 塑垩奎兰塑圭堂垡丝兰：查翌堡兰塾鲞塑塑塑壁璺堕竺鲞整型鱼丝生塑鳖丝堡塞 t h er e s u l t a n to r g a n i cp r e p a r a t i o ns o l u t i o nw a s0 ( w w ) a f t e rb u r s tr e l e a s ea tt h e f i r s t1h o u ra ta p e r c e n t a g eo f3 7 2 o fl o a d e dd r u g ad i f f u s i o nc o n t r o l l e dr e l e a s e a tt h en e x t1 2h o u rap e r c e n t a g eo f8 2 7 o fl o a d e dd r u g A f t e r1 2h o u r s t h e r e l e a s er a t eo fd r a gw a ss l o w i n go v e ram o n i t o r e dp e r i o do f2 4h o u r s W h e nt h e p e r c e n t a g eo fl i p i dC i nt h er e s u l t a n to r g a n i cp r e p a r a t i o ns o l u t i o nw a su pt o2 0 ( w w ) ，a f t e rb u r s tr e l e a s ea tt h ef i r s t4h o u ma tap e r c e n t a g eo f9 0 3 o fl o a d e d d r u g ，t h er e l e a s er a t eo fd r u gW a ss l o w i n g o v e ram o n i t o r e dp e r i o do f2 4h o u r s I n c r e a s e dd r u gl o a d i n gc a p a c i t ya n dc o n t r o l l e dd r u gr e l e a s ep r o p e r t i e so fS L N w e r ea c h i e v e db yc o n t r o l l i n gt h ea m o u n to fl i q u i dl i p i da d d e dt ot h ef o r m t t l a t i o n F u r t h e r , an o v e lp r e p a r a t i o nm e t h o di nt h ep r e s e n tr e s e a r c hf o rp e p t i d e A o a d e d S L Nw a se s t a b l i s h e d T h e s er e s u l t sa l s od e m o n s t r a t et h ep r i n c i p l es u i t a b i l i t yo f S L Na sac o n t r o l l e dr e l e a s ef o r m u l a t i o nf o rh y d r o p h i l i cp e p t i d ed r u g s K e yW o r d s ：s o l v e n td i f f u s i o nm e t h o d ；s o l i dl i p i dn a n o p a r t i c l e s ；g o n a d o r e l i m s a l b u t a m o ls u l f a t e ；l y s o z y m e ；s a l m o nc a l c i t o n i ns e ec a l c i m a r ；i n s u l i n ； I n t e r f e r o n - a2 a ；m o n o s t e a r i n ；P E G 2 0 0 0 ；l i p i d A ；l i p i dB ：l i t i dC 9 浙江大学硕士学位论文水溶性多肽类药物固体脂质纳米粒制各及生物特性研究 前言 近年来，基因工程药物在治疗肿瘤、感染和增强免疫等方面体现出日益 重要的作用。具有生物活性的多肽类药物，参与了生物体内各种细胞的生物 活性过程，如进行生物和激素调节的神经肽；降低血压的神经紧张肽；有强 镇痛作用的内啡肽与脑啡肽衍生物等，而胸腺肽、胸腺因子等早已在临床广 泛应用。多肽、蛋白质类药物是药用生物活性大分子物质，随着生物技术的 飞速发展，此类药物已成为生物技术新药( N e wB i o t e c hD r u g ) 的主要品种。 多肽类药物的缺陷，主要表现在稳定性差，在酸、碱或酶的作用下易失 活；分子量大且常以多聚体形式存在，难以通过胃肠道黏膜细胞，导致吸收 屏障的产生；使用不便，一般只能注射给药；体内半衰期短，消除陕，无法 充分发挥其疗效；在体内只与特定的受体结合而起作用，受体在组织的分布 特性会显著影响多肽药效，因此也涉及到多肽给药的靶向性等问题。如何有 效、稳定地将多肽及蛋白类药物递送到其作用的靶部位，一直是药剂学界需 要解决的难题。 为克服多肽及蛋白质类药物注射给药的缺点，科学家一直在努力进行新 的给药技术探索，已先后研究与开发了多种非注射途径的给药系统。通过气 溶胶吸入白细胞介素一2 ，治疗转移性肺癌和原发性肺癌的研究表明，约7 0 的病症可得到了有效抑制【。降钙素的鼻腔给药制剂，已经在欧洲、日本及 美国上市。重组人D N A 酶I ( 商品名：p u l m o z y m e ) 是第一个用于吸入治疗 呼吸道疾病的重组人类蛋白质，从其克隆表达到成为临床药物仅4 年时间。 礼来、C o r t e c s 等制药公司，己很早就加入了将口服胰岛素推入市场的竞争行 列，正在进行各期临床试验。 口服给药使用方便，患者顺应性高，成为目前研究者主要的给药方式研 究方向之。由于多肽蛋白类药物的各种稳定性问题，若不经过化学或制剂 学修饰，直接口服给药的生物利用度只有0 1 一2 或更低，l 临床应用价值 不大。因此，口服多肽蛋白类药物的研究，是目前非注射给药技术的难点， 目前尚无成功产品上市，多数还处于研究阶段。 l O 浙江大学硕士学位论文水溶性多肽类药物固体脂质纳米粒制备及生物特性研究 多肽与蛋白质类药物具有较低的分配系数和很小的扩散性能，使得药物 不易被亲脂性膜所摄取，很难通过生物屏障。许多学者尝试对药物进行化学 修饰、制成前体药物、应用吸收促进剂、使用酶抑制剂防止酶解、采用医学 工程技术如离子电渗法增加药物透皮吸收及设计各种给药系统解决上述问 题。其中，纳米粒给药系统具有独特的药物保护作用及控制释放特性丽日益 受到关注。 在药物载体输送系统中，微乳、微球、纳米粒、脂质体、药质