木糖葡聚糖作为胞外基质材料对HepG2细胞的影响.doc

分 类号 硕 士 学 位 论文木糖葡 聚糖作 为胞外 基质 材 料 华 中 师范大学学位 论文 原创 性声 明 和 使用授 权说明日期： 加阹月力 日导 师签名： 铆冬墨日期： 洲庐 、广月 谬日 项 士 学 位 论文， 材 料 起着对 种 子 细胞胞黏 附 分 子 泶 锏挠 跋 臁 椒 翰 捎 肂法 测 定 细胞在 包 被的细胞培养板 上 硕 士 学 位 论文 山 甌 硕 士 学 位 论文英文 缩 写 表第 一 章综 述第 二章实 验材 料 及 方 法 硕 士 学 位 论文第 四章结论第 五章展 望参 考 文 献 硕 士 学 位 论文姚骨 形态发生 蛋 白间 隙 连接 蛋 白舾 分 子 式 肝细胞生 长 因 子竛 婶 衑 删 抵 蓑薯嚣 病毒胸核 苷 艘醢 腺 嘧 啶 聚羟基 乙 酸聚 乳酸 硕 士 学 位 论文组 织 工 程 一 词最早 是 由 美 国 国 家 科 学 基金会于 年 正 式提出和 确定 的， 组织 工 程 技 术的产生 源 于 早 期的细胞培养工 作 ， 在 上 世纪年 代人 们 开 始 了 对 细胞的三维 培养， 直 到 近年 来 才 成 功地 培养出真正 可用于 临床 的组 织 替 代物【 。组 织 工程 学 的工 作 主要 是 从 患 者获 得 正 常 细胞后 进 行扩大 培养并 种 植于 基质 材 料 上 ， 在 合适的刺 激信 号作 用下 于 短 期形 成 新组 织 ， 将新组 织 植入 患 者体 内 用以维 持、恢 复 或提高 人 体 组 织 的功能 ， 或者帮 助恢 复 损伤器官 组 织 的功能 。因 此 ， 若能 利 用工 程 学的方 法 制 造 出可取 代人 体 器官 的人 造 器官 ， 则 能 为临床 治 疗提供极 佳 的解 决方 法 。现在 组 织 工 程 学 研究已 涉 及 到 各 种 动物组 织 器官 ， 如外 胚层的神 经 系 统 、角膜 、皮肤 ， 内 胚层的肝、胰和 中 胚层的骨 、肌肉 、血 管 等 。使人 类干 细胞定 向 分 化 为肝脏 细胞以应 用于 肝组 织 工 程 学 。 细胞系 是 从 人 肝癌 细胞系 械 玫降 囊桓 隹 寺 。際 相 比 其 功能 活 性更高 ， 具 有更 好 的合 成 功能 宓鞍 子 隥 甲 胎 蛋 白 偷 K卮 荒 芰 荂细胞对胺的清除能 力 较低 狈暾 哪 蛩 睾 铣擅 赶 ， 氨基 酸 代谢 水平有限 ， 细胞色 素 合 成 量 低 ， 且 缺 少许多 药物代谢 功能 饕 J怯 捎 谙吡 宓募 跎， 限 制 了 其 在 肝组织 工 程 学 中 的应 用。另外 ， 肿 瘤 来 源 的细胞系 可能 存 在 传 播 肿 瘤 来 源 的代谢 产物的转 染 法 可以获 得 多 种 永生 化 肝细胞系 。人 肝细胞也在 的致瘤 性风 险 问 题 。 源 。所以， 干 细胞是 获 取 肝细胞最有优势的种 子 细胞， 能 满 足 对 种 子 细胞的要 求 。中 向 损伤的肝脏 中 注射的梢苑 只 8蜗 赴 赴 欢 鳰 在 伤口处 会分卵 圆 细胞是 成 人 肝脏 中 休 眠 的干 细胞， 在 肝损伤中 可以有效 增 殖并 分 化 为肝细 硕 士 学 位 论文 系 统 中 ， 与 成 熟肝细胞相 比 ， 胚胎 肝细胞功能 不够 完 善 和 成 熟，珽 最大 的优势是 其 多 能 性、易于 获 得 及一 定 的体 外 增 殖能 力 。虽 然用基 质 胶可以在 无 饲 养细胞条件 下 体 外 培养并 用 诱导 的肝细胞样 细胞具 有生 物相 容 性和 可降 解 性， 且 降 解 产物应 无毒， 不会引 起炎 症反 应 ；， 但 接 种 细胞显示 清蛋 白 分 泌 高 ， 说明 添 加物可以提高 其 生 物学 活 性。， 且 恢 执 雍衷 逯 刑崛奶 烊 欢 嗵 牵 晌椋甃 甘 露糖醛酸 单 元 雙 怕尢 侨 依靠 洳糖苷 键连接 并 由 不同、片段 组 成 的共 聚物。水溶 液 可与 、等 二价阳 离 子 溶 液 混 合 形成 凝胶， 是 目前最常 用的肝组 织 工 程 基质 材 料 。的研究显示 海 藻 酸 盐基质 通 过促 进 肝细胞簇的形 成 促 进 肝细胞特 有功能 的表现， 而 微 囊制 各 过 程 中 添 加的钙 离 子聚乳酸 腔宜 峁 簿畚 硕 士 学 位 论文的研究发现胶原修 饰的基 质 能 促 进 人 类肝细胞的增 殖及 肝功能 的体 现。为避免 泡沫 基质 材 料 制 作 过 程 中 的有机 溶 剂对 细胞的损伤， 圈采 用气 体 发泡法 制聚乙 酰内 醋 聚乙 二醇口 鑕熔点 随 平均分 子 量 升高 而升高 ， 无 毒性和 刺 激性， 广泛 用于 各 种 药物制 剂。， 大大促 进 了 细胞的功能 体 现。 硕 士 学 位 论文 硕 士 学 位 论文， P“逖苌 蜃坏 死 因 子 ， 等 。然而 ， 肝脏 的结构和 功能 复 杂 ， 生 长 因 子应 用上 具 有实 际 意义。康 奶 逋 馀 嘌 笛楸 砻 鱁 、烟酰胺、够 笛K幔 与 共 同作 用， 寄 艽俳蜗 赴 腄 合 成 ， 可能 是 因 为在 培养的前 谀 芷鸬搅艘种 破 渌 镏 视隕受 体 结合 的作 用。 成 的促 进 作 用， 将添 加到 壳 聚糖基 质 中 ， 然后 接 种 肝细胞， 在 大 鼠 移植实 验中 发现， 能 诱导 新生 血 管 的形 成 ， 提高 移 植细胞的存 活 力 和 肝脏 功能 。胰岛素 样 生 长 狥 ， 是 多 功能 的细胞增 殖调 控 因 硕 士 学 位 论文， 能 使神 经嵴 细胞定 向 分 化 并 保持为 硕 士 学 位 论文计 并 利 用蚀刻 硅胶片模 仿 血 管 床 。后 续联 合 技 术和 光 敏 生 物材 料 ， 得 到型 赴 慕 又治 恢 每 梢允 窍 宋 芗 多 腔共 轴 型 拖 宋 芡 氧合 型 、编 织 结构型 、 硕 士 学 位 论文接 种 于 微 载 体 、培养基 质 或织 物中 进 行培养， 培养液 则 由 细胞培养区域流向 轴 心，使氧气 和 营 养不断 更 新。其 中 辐 流支架 型 反 应 器大 大 改 善 了 肝细胞培养的微 环 境和物质 交 流效 率 ， 而 对 于 大 体 积 反 应 器内 肝细胞的接 种 和 增 殖培养则 需 要 进 一 步改 善 。非 编 织 聚酯织 物型 反 应 器能 保证 肝细胞与 培养液 的直 接 接 触 ， 且 气 体 交 换 充 分 ， 在动物实 验中 能 明 显延 长 存 活 时蝌 ， 丌， 具 有较高 的合 成 和 代谢 能 力 。 硕 士 学 位 论文皮 细胞共 培养、诱导 等 方 式均能 取 得良 好 效果。神 经系 统 组 织 工 程 理想 的人 工 神 经是 一 种 具 有特 定 空 间 结构的神 经导 管 【 】，允 许再生 轴 突的生 长 进 入 并 起 到 机 械 引 导 作 用， 同时施 旺细胞能 有序分 布 于 基质 内起 到 营 养、支撑作 用， 以引 导 轴 突再生 。神 经 系 统 组 织 工 程 的基 质 材 料 需 要 一 定 的机 械 强度 ， 且 能 形成 理想 的双 层结构， 通 常 在 外 层使用强 度 大 、降 解 速 率 慢 的可降解 材 料 ， 内 层使用可降 解 活 性材 料 如胶原和 多 糖， 目前研究较为深入 的多 为胶原常 肌腱 相 似 ， 也 为肌腱 组 织 工 程 种 子 细胞来 源 打开 了 新思 路 。 面 、胆 小管 面 和 连接 面 ， 分 别 与 肝血 窦 、胆 小管 和 相 邻肝细胞接 触 。图 垂 直 于 中 央 静脉的肝脏 切片示意图 中 提取 的的分 子 结构如图 所示， 它由 三种 寡 糖单 元 组 成一 七糖、八糖和图 的分 子 结构示 意图本 文 以肝组 织 工 程 胞外 基质 材 料 研究中 的热 点 研究对 象 木糖葡 聚糖为胞外 基 第 二章实 验材 料 及 方 法鯬木糖葡 聚糖： 篏 ： ： 、辧 、叶 匪 囊宜 氨苄 青霉 素链 霉 素 硕 士 学 位 论文怪 医 哈杀滨 条联 电 子 技 术开 发公 司泄 蜚塞 嚣 畜产电 泳设 各有格 兰 仕泄 硕 士 学 位 论文滤 膜 过 滤 除茵 ， 分 装 后 硕 士 学 位 论文固 叠 缓 笥 生 理盐 水配 制柠 檬酸 钠 溶 液 处 理微 囊吹 玫紸 狿 ， 海 藻 酸 多 聚赖搜 G 灏 椎 鞍 的含 量 ， 其 基本 原理为： 以样 品 中 的人血 清白 蛋 白 此 标 准样 品 或待 测 样 品 ， 空 白 孔加入 薖， 再加入 止 平衡缓 冲液 及 皿处 吸 光 值 。以 对 人血 清白 蛋 硕 士 学 位 论文保 襞 嘌 陨 硌嗡吹 游 次 ， 加基本 原理如下 图 所示 ：谷 氨酸 脱 氢 酶笕 襞 嘌 陨 硌嗡吹 游 次 ， 用 柠 檬酸 钠 溶 液 处 理微 囊用沟 鞍 琢 呀 庖 涸， 的表达 分 析设 计 上 游 引 物下 游 引 物上 游 引 物下 游 引 物 ， 吹 打均匀 后 收 集细胞，合 成 第 一 条链 ， 取 此 产物加入 棺 闾 寤 私 蠵 检测 ， 反 应 过 程 为 硕 士 学 位 论文冀 硕 士 学 位 论文图 光 学 显微 镜 照 片竞争 测 得标 准曲 线为：对 微 囊化 赴 那 宓鞍 缀 铣伤俾 式胁舛 的实 验组 清蛋