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第十六章 免疫球蛋白检测及应用,第三临床医学院 临床检验教研室 王飞 副主任医师，副教授,第一节 体液中IgG、IgA、IgM测定的临床应用 一、血液免疫球蛋白测定的临床测定 二、尿液免疫球蛋白测定的临床意义 三、脑脊液免疫球蛋白测定的临床意义,第二节 血清IgD和IgE测定及临床意义 一、IgD测定及临床意义 二、IgE测定及临床意义,第三节 血清IgG亚类测定及临床意义,第四节 M蛋白测定及临床意义 一、血液蛋白区带电泳 二、血清免疫球蛋白定量测定 三、免疫电泳 四、免疫固定电泳 五、本-周蛋白测定 六、-Ig和-Ig定量测定 七、冷球蛋白测定,思考题 小结,一、教学目的： 1、掌握IgG、IgA、IgM、IgD和IgE的检测方法及临床意义。 2、掌握M蛋白、冷球蛋白的特性，检测方法及临床意义。 3、熟悉尿液及脑脊液Ig的检测方法及临床意义。 4、了解血清IgG亚类和免疫球蛋白轻链检测的方法及临床意义。,免疫球蛋白（Ig）：抗体活性、化学结构与抗体相似 重链性质，Ig分5类：IgG()、IgA()、IgM()、 IgD()、IgE() 轻链性质，Ig分2型：、 Ig占血浆蛋白总量：20% 检测意义：反应机体的免疫功能、诊断疾病 Ig含量：血清 IgG、IgA、IgM：g/L、 IgD、IgE：mg/L 体液 IgG、IgA、IgM：mg/L,第一节体液中IgG、IgA、IgM测定的临床应用,IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，是血液和细胞外液中的主要抗体，也是机体再次免疫的主要抗体。 IgA分为血清型和分泌型，是参与黏膜局部免疫的主要抗体，主要存在于胃肠道和支气管分泌液、初乳、唾液和泪液中。 IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是个体发育过程中最早合成和分泌的抗体，也是抗原刺激诱导的体液免疫应答中最早出现的抗体。,一、血液免疫球蛋白测定的临床测定,（一）年龄 年龄不同其血液中的Ig含量有一定变化。,低Ig血症:先天性低Ig血症（免疫缺陷病）； 获得性低Ig血症(蛋白丢失). 高Ig血症:多克隆Ig增高（感染）； 单克隆Ig增高（免疫增殖病）.,高Ig血症: （二）多克隆高免疫球蛋白血症 肝实质性疾病时多种Ig均增高，慢性活动性肝炎，肝硬化，肝癌，相一致，恶性肿瘤（细胞瘤，转移癌）。 常见于各种感染，尤其是慢性细菌性感染，结核，慢性支气管炎，胶原性疾病，结缔组织疾病。 （三）单克隆免疫球蛋白增高 血清中存在异常增多的单克隆蛋白M蛋白，理化性质十分均一，某类Ig增高30g/L。 多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症，丙球蛋白血症，重链病，轻链病。,（四）低Ig血症: 1.先天性低Ig血症（免疫缺陷病）； 先天性低Ig血症,主要见于体液免疫缺陷和联合免疫缺陷病，一种是Ig全缺，如Bruton型无Ig血症，血中IgG1g/L, IgA、IgM为参考值的1。另一种是缺失一种或两种 。 IgA：常见，呼吸道易反复感染。 IgG：化脓性感染 IgM：G 菌败血症 2.获得性低Ig血症(蛋白丢失). IgG5g/L,主要与下列疾病有关：蛋白丢失过多，严重胃肠道疾患，肾病综合征，恶性肿瘤骨转移，重症传染病，淋巴系统恶性肿瘤，白血病，中毒性骨髓病等。,二 尿液免疫球蛋白测定的临床意义,正常人尿液中的Ig含量甚微，当机体的免疫功能异常或炎症反应引起肾脏疾病时，可导致肾小球滤过膜分子屏障破坏或电荷屏障受损，从而引起球蛋白及其他大分子蛋白质漏出增多。,尿液： 肾小球滤膜受损程度：选择性蛋白尿指数 增高有临床意义：肾病、免疫增殖病 可根据尿内Ig增高的类型帮助鉴别诊断肾小球疾病的种类 选择性蛋白尿时，尿中以IgG为主，非选择性蛋白尿时，以IgM为主。 SPI=（尿IgG/血清IgG）/（尿TRF/血清TRF ）,三、脑脊液免疫球蛋白测定的临床意义,生理情况下，Ig根据其分子量大小，通过血脑屏障的难易度不同，IgG、IgA、IgM在脑脊液中的浓度递减。病理状态时，脑脊液组分发生改变。 血脑屏障受损程度：白蛋白商值、CSF-IgG指数 增高有临床意义：多发性硬化症、中枢神经系 统感染,一般以白蛋白商值反映血脑屏障功能， 以IgG指数反映中枢神经系统鞘内合成 IgG能力。,白蛋白商值CSF中白蛋白/血清白蛋白1000 IgG生成指数= （CSF中IgG*血清白蛋白）/（血清IgG*CSF中白蛋白）,白蛋白商值 9表示血脑屏障无明显损害 9 15为轻度损伤 15 33中度损伤 33 100重度损伤 100完全破裂,脑脊液中IgG增高见于 中枢神经系统内源性合成增加 血中IgG增高 血脑屏障通透性增高,第二节 血清IgD和IgE的测定及临床应用,正常人血清中IgD含量很低，膜结合型IgD(mIgD)构成BCR，是B细胞分化发育成熟的标志。 IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，引起I型超敏反应；与机体抗寄生虫免疫也可能有关。,一、 血清IgD测定及临床意义,测定方法： 放射免疫分析法 化学发光免疫分析法 免疫比浊法 酶联免疫吸附法,IgD：生物功能不详 增高：妊娠末期、IgD型骨髓瘤、甲状腺炎和大量吸烟者。 降低：原发性唔丙种球蛋白血症、肺硅沉着病和细胞病毒药物治疗后。,二、 血清IgE测定及临床意义,测定方法 总IgE测定：放射免疫分析法 化学发光免疫分析法 免疫比浊法 酶联免疫吸附法 特异性IgE测定：免疫斑点法 酶联免疫吸附法,IgE临床意义： 增高：I变态反应性疾病、寄生虫感染、病毒感染、自身免疫性疾病。 降低：意义不大,第三节 血清IgG亚类测定及临床意义,Ig亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，其含量依次下降 测定方法： 单向免疫扩散法 免疫比浊法（常用） 放射免疫分析法 酶联免疫吸附法 临床意义：IgG亚类的含量随年龄的不同而变化 免疫缺陷病降低明显,第四节 M蛋白测定及临床意义,M蛋白： B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖所产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常单克隆免疫球蛋白 临床上多见于多发性骨髓瘤、高丙种球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等,M蛋白测定,蛋白区带电泳：经典方法 计算蛋白含量和百分比 免疫比浊法： 免疫球蛋白定量 准确性高、快速 免疫电泳： M蛋白分型 免疫固定电泳： M蛋白分型及鉴定，分辨 率高,免疫电泳示意图,G,A,M,IgG-型M蛋白,Marker,免疫固定电泳模式图,左图为IgG 型, 中图为IgG 型，右为正常,免疫固定电泳示意图,五 本-周蛋白测定,本-周蛋白即尿中游离的免疫球蛋白轻链。 检测方法：免疫电泳、加热沉淀（简便易行）,六 -Ig和-Ig定量测定,Ig和-Ig定量检测 方法：单向免疫扩散法、免疫比浊法（常用，准确、快速） 应用：M蛋白血症的分型及鉴定,七 冷球蛋白测定,冷球蛋白：是血清中的一种病理蛋白质，该蛋白在04时发生沉淀，在37 又溶解。 在低温时产生冷沉淀的机制尚不十分明确 多数冷球蛋白为免疫复合物，其抗原可以是外源 性的，也可以是内源性的,冷球蛋白的类型及临床意义 I型：为单克隆冷球蛋白型，大约25%，多见于免疫增生性疾病 型：单克隆和多克隆混合型冷球蛋白，大约25%;多见于自身免疫性疾病 型：多克隆混合型冷球蛋白，约占50% ;多见于自身免疫性疾病以及感染性疾病,免疫球蛋白是由浆细胞所产生能与相应抗原特异性结合的球蛋白 分为IgG 、IgA、IgM、IgE和IgD五类，其相应重链分别称为链、链、链、链和链 轻链分为型和型，两型轻链无功能差异 免疫球蛋白定量测定方法： 单向环状免疫扩散法、火箭免疫电泳法、 ELISA、免疫比浊法、放射免疫分析法,小结,临床意义： 选择性蛋白尿指数来评估肾小球滤过膜破坏程度及观察治疗和预后效果；测定尿液免疫球蛋白含量，来对肾小球疾病类型鉴别。 测定脑脊液蛋白质，对判断CSF中蛋白质的来源，区分中枢神经系统疾病类别有着重要意义。临床上常通过白蛋白商值和脑脊液免疫球蛋白指数来反映血脑屏障受损程度。 血清IgG亚类测定对研究免疫缺陷病和超敏反应性疾病有重要价值。,1.免疫应答主要分为哪几个阶段？ 2.什么是免疫球蛋白?其分子基本结构? 3.免疫球蛋白分类及亚类? 4.血清免疫球蛋白测定方法有哪些