酵母核糖核酸的提取及组分鉴定-卢忠燕.ppt

实验七 酵母核糖核酸的提取,核 酸(nucleic acid),是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子，携带和传递遗传信息。,Nucleic Acid,基因的化学本质核酸,核酸的分类及分布,除RNA病毒以外，所有有机体的遗传物质（基因）都是DNA。,一、实验目的 1. 掌握从酵母中提取核糖核酸的原理。 2. 学会核糖核酸提取的基本操作。,二、实验原理 酵母，即酵母菌，是一些单细胞真菌，是人类文明史中被应用得最早的微生物，繁殖速度快，生长周期短，其细胞质中的核酸大部分是RNA，而DNA很少；RNA提取液与菌体分离比较容易，所以生产中常选用酵母作为RNA提取的原材料。,工业上提取RNA的方法主要有三种，包括稀碱法、浓盐法和自溶法。本实验采用的是稀碱法。稀碱法是利用RNA可溶于碱性溶液的性质，先使RNA溶于稀NaOH溶液中，然后再利用核酸不溶于乙醇的性质，向溶液中加入酸性的乙醇溶液，从而使RNA沉淀出来，如此得到的即是RNA的粗制品；再用乙醇、乙醚等有机溶剂洗涤脂类杂质，即得到纯化的RNA。,三、 实验步骤 1. 酵母RNA的提取 (1) 准确称取15g酵母，加入干净的研钵中,加入适量石英砂；然后，向研钵中加入30-40mL0.04M的NaOH溶液，并用力研磨约10min。 (2) 待研磨均匀后，将钵中溶液倒入锥形瓶中，并再取30-40mL0.04MNaOH溶液洗涤研钵，一并转入锥形瓶中，然后放于沸水浴中加热20-30min，取出冷却。,2.酵母RNA分离及沉淀 将锥形瓶中溶液转移到100ml离心管中，在4200rpm离心8-15min后，将上清液缓缓倾入30ml酸性乙醇溶液中，边倾倒边轻轻搅拌，待RNA沉淀完全后，3500rpm离心3-5min，弃上清，沉淀即为RNA粗制品。,3.洗涤及干燥 （1） 向离心管中加15-20ml的95%乙醇，轻摇后，静置3-5min, 3500rpm离心3-5min，弃上清，留沉淀。 （2）再加入15-20ml乙醚，轻摇后，静置3-5min, 3500rpm离心3-5min，弃上清，沉淀即为酵母RNA。,四、 实验结果 将提取的RNA在空气中或用吹风机风干，称重，计算RNA的含量。 参考公式如下：,实验八 核糖核酸的组分鉴定,核酸组成,核苷酸是构成核酸的基本组成单位,碱基,苦碱基,甜戊糖,酸磷酸,一、实验目的 掌握核糖核酸组分鉴定的原理。 学会鉴定核糖核酸组分的方法。,二、实验原理 核糖核酸的组成成分主要包括核糖、磷酸和碱基。 在碱性环境下，嘌呤碱能与银离子反应形成沉淀，但此处碱性环境不能用一般的强碱，否则强碱会与银离子反应产生沉淀而干扰结果判定。,3. 核糖核酸与浓盐酸共热时，会发生降解，形成的核糖继而转变成糠醛，后者可与3，5-二羟基甲苯（地衣酚）反应，在Fe3+或Cu2+催化下，生成绿色复合物。 4. 磷酸组分可与定磷试剂在酸性环境中反应，生成蓝色物质。因此，可以根据以上性质，设计实验对各组分进行鉴定。,三、 实验步骤 1. 取200-500mg实验七中提取的酵母RNA，加入1.5M H2SO4溶液10mL，在沸水浴中加热10-20分钟，使核酸充分水解后，用于对各组分的鉴定。 2. 磷酸组分鉴定：取水解液1mL，加入干净的试管中，再加入等体积的新配制的定磷试剂1mL，混匀后，在45左右的水浴中加热15-30min，观察颜色变化。,3. 嘌呤碱的鉴定：取水解液1mL，加入干净的试管中，加入过量的浓氨水，再加入1mL的0.1M的硝酸银溶液，观察沉淀的生成。 4. 核糖的