职业教育论文-教学实验室医学真菌的保藏.doc

职业教育论文-教学实验室医学真菌的保藏【关键词】真菌保藏实验室微生物学医学真菌作为自然界重要的生物资源，已成为微生物学实验中不可或缺的基本材料，应用频率较高。这其中部分为病原性真菌，而如何有效地保存保管好真菌菌种，以何种方式长期稳定地保持其生物遗传特性，则成为我们日常工作中需要研究探讨的问题。1材料与方法1.1教学实验室保存的菌种(1)单细胞真菌：白色念珠菌、新生隐球菌。(2)多细胞真菌：黑曲霉菌、青霉菌、木霉菌。1.2医学真菌菌种的鉴定菌种使用前，均需进行形态学、生化学方面的鉴定，合格后方可使用。具体鉴定方法：(1)单细胞真菌：碳源发酵试验、产子囊孢子及芽管试验、咖啡酸试验、尿素酶试验；单细胞与多细胞真菌鉴定共用实验：玉米粉吐温80琼脂小培养显微镜下观察。(2)多细胞真菌：蛋白水解试验、37生长试验、温度试验、PDA小培养实验。1.3真菌菌种的保藏方法由于教学实验各时期使用的真菌菌种在数量及种类上不尽相同，所以与其相适应的培养方法与保管方式亦不相同。大体上分为定期传代保存法、超低温冻结保存法两种。1.3.1定期传代保存法(1)液体培养基保存法：单细胞真菌接种于RPMI1640培养基中,37培养24h，取出后置4冰箱保存。该方法用于学期初低温冻结菌种的复苏、增菌培养。(2)琼脂平板培养基保存法：学期开始，多细胞冻结菌种解冻后，划线接种于察氏平板培养基上面，28培养78d，再将培养菌络移种于改良马丁平板培养基上，28培养7d，待培养菌络生长良好,置4冰箱保存。为多细胞真菌的复苏与鉴定试验。(3)琼脂斜面培养基保存法：单细胞真菌由液体培养基中多细胞真菌从马丁培养基表面，分别挑取菌种菌络，蜿蜒化线接种于各自相对应的琼脂斜面培养基中,经37或28培养生长良好后，置4冰箱保存备用。该方法用于学期中，真菌菌种即将使用，实验课前的菌种纯化和制备阶段。(4)液体石蜡覆盖保存法：将无菌液体石蜡油覆盖于菌络生长良好的琼脂斜面真菌培养物表面，厚度约1cm左右，置4冰箱保存。该法用于学期末对真菌菌种较长时期的保存方法。1.3.2液氮超低温冻结保存法将单细胞或多细胞真菌培养物,以无菌生理盐水洗下并计数，加入等量脱脂牛奶保护剂，分装进安瓿后封口。选择菌种不同的适宜冷却速度，使瓿内菌悬液急速或慢速冻结成冰。置液氮超低温下保存。2结果2.1定期传代保存法(1)液体培养基保存法，可保存单细胞真菌15d左右。(2)琼脂平板培养基保存法，保存多细胞真菌15d。(3)琼脂斜面培养基保存法，保存单细胞、多细胞真菌1个月。(4)液体石蜡覆盖保存法，可保存真菌菌种6个月。2.2液氮超低温冻结保存法可保存冻结菌种1年。3小结一般认为，传代移种保存法保存的菌种，易失去病原性，而超低温保存法能够完整的保存菌种的致病性。为此，我们针对实验的初、中、末3个时期，实验显示，反复的移种传代会使菌种的致病力和生理活性下降，孢子形成能力减弱，故超低温冻结保存菌种，是最佳保藏菌种的方法，唯一不足的是菌种复苏启动时间较长。【参考文献】1王家俊.临床真菌检验M.上海：上海医科大学出版社,1995:312.2张卓然.医学微生物实验学M.