实验六PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测.ppt_第1页
实验六PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测.ppt_第2页
实验六PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测.ppt_第3页
实验六PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测.ppt_第4页
实验六PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测.ppt_第5页
已阅读5页，还剩7页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验六 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测,常祖明,实验目的,1.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理 2.学会琼脂糖凝胶的制作和进行电泳的方法,实验原理,1.DNA琼脂糖凝胶电泳的原理,琼脂糖是一种线性多糖聚合物，天然聚合长链状分子，在沸水中溶解，45开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小取决于琼脂糖的浓度，浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。,实验原理,（1）电荷效应 DNA分子在PH值高于其等电点的溶液中带负电荷，在电泳时向阳极移动。,（2）分子筛效益 在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度主要取决于分子筛效益，即DNA分子本身的大小和构象（共价闭环DNA线状DNA开环DNA），而且其迁移速度与其相对分子质量的对数值成反比，所以不用相对分子质量的DNA分子可以在琼脂糖凝胶电泳中分离。,2. DNA分子进行染色的原理（以溴化乙锭为例）,观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖凝胶中的DNA分子。溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动，这样溴化乙锭分子就会嵌入到DNA分子中的碱基对之间形成络合物，这种络合物在紫外光下发射的荧光要比单纯的DNA分子要强的多，便于DNA的检测。,实验仪器、材料、试剂,实验仪器及用具 电泳仪、移液枪、电磁炉、锥形瓶、容量瓶、紫外分析仪 实验材料及试剂 实验材料：鸡血DNAPCR扩增产物 DNA Marker 、GoldView核酸染色剂 、琼脂糖、三羟甲基氨基甲烷（Tris） 、硼酸 、乙二胺四乙酸二钠、 6DNA LodingBuffer 实验试剂：0.5TBE（PH8.0）缓冲液 、1.0%琼脂糖溶液、,实验步骤,琼脂糖凝胶的配制,1g琼脂糖,100mlTBE缓冲液,5l GoldView,冷却到60,1.将适量的DNA Marker用移液枪加入凝胶的第一个孔中。 2.在PCR产物中加入6DNA LodingBuffer（每5ul产物加入1ul），混匀后，用移液枪加入到样品孔内，每孔加2ul。,点样,肉眼可见指示剂泳至距制胶板前端约2-3cm处即可停止电泳。切断电源，取出凝胶，置于紫外线透射仪上观察电泳结果，或用凝胶成像分析系统拍照保存。,电泳、观察,注意事项,1.琼脂糖融化时，档位不宜太高。 2. 制胶和加样过程中要防治气泡的产生。 3. 操作过程必须戴手套操作，严格注意防护。 4. 加样时，Tip 头不宜插入样品孔太深，也不要穿破胶孔壁，否则样品渗漏或DNA 带型不整齐。 5. 电源接通时，应核实凝胶的方向是否正确。 6. 电泳仪有电压显示，并不一定标志电泳槽已接通，应观察电极气泡出现情况。负极的气泡比正极多
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论