渝产续断多糖超声波辅助提取工艺的优化.doc

渝产续断多糖超声波辅助提取工艺的优化 张丹，陶燕铎，谈利红，余保，颜学伟，曹纬国 （重庆医科大学中医药学院，重庆；中国科学院西北高原生物研究所，西宁） 摘要：为建立渝产续断（）多糖的最佳超声波辅助提取工艺，设计正交试验，以续断多糖的提取率为评价指标，对续断多糖的超声波辅助提取工艺参数进行考察。结果表明，最佳超声波辅助提取工艺为料液比（），提取时间60min，提取次，测得续断多糖的平均提取率为，为，表明续断多糖超声波辅助提取工艺稳定，质量可控。 关键词：续断（）；多糖；正交试验；超声波辅助 ：；：（）431 ：44 续断为川续断科植物川续断（）的干燥根，又名川断，具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏、安胎等功效，主要用于胎漏、胎动不安、滑胎、腰膝酸软、跌打损伤和骨折等症。续断化学成分研究已较为深入，且多集中于其皂苷类成分，已有研究表明续断类药材多糖含量较高，重庆作为续断的主产区之一，目前尚未有关于重庆产续断多糖的研究报道。多糖尤其是中药多糖具有增强机体免疫功能及抗肿瘤等药理作用，因此续断药材中含量较高的多糖类成分具有潜在的研究价值。本试验以重庆产续断为原料，采用正交试验法优选续断多糖的超声波辅助提取工艺，为续断多糖的深入研究奠定基础。 材料与方法 材料与仪器 续断药材采自重庆武隆后坪乡，经重庆医科大学王刚副教授鉴定为川续断。 型紫外可见分光光度计（岛津仪器有限公司）；型数显恒温水浴锅（金坛市荣华仪器制造有限公司）；型电子分析天平（瑞士梅特勒托利多集团）；型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司），型电热恒温鼓风干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）。 葡萄糖标准品（中国药品生物制品检定研究院提供，批号为），浓硫酸、正丁醇、氯仿、丙酮、无水乙醇、乙醇、石油醚、纯净水等均为分析纯。 试验方法 标准品溶液的配制室温下精密称取干燥至恒重的葡萄糖标准品，置容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀即得。 供试品溶液的制备称取已烘干的续断药材粉末，置圆底烧瓶中加入石油醚回流提取脱脂，共计次，每次。药渣挥去溶剂后，加入乙醇回流提取次，每次，药渣挥去溶剂后，加水，水浴提取次，每次，合并提取液，浓缩并定容至，即得供试品溶液。 标准曲线的制备吸取上述标准品溶液、于容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，得系列葡萄糖标准品溶液。各吸取置于具塞试管中，再分别加入苯酚，摇匀后迅速加入浓硫酸，摇匀后水浴，冰水浴冷却，在下测定其吸光度，以吸光度为纵坐标，葡萄糖标准品浓度为横坐标制作标准曲线，。 正交试验设计，选定影响多糖提取率的料液比（，下同）、提取时间以及提取次数作为考察因素，以多糖提取率作为考察指标，选用（）正交表安排试验考察各因素的影响，因素与水平见表。 结果与分析 最大吸收波长的确定 精密量取供试品溶液与标准品溶液各，置容量瓶中，分别加去离子水、苯酚溶液，摇匀，加入浓硫酸，水浴加热，置冰水浴中冷却，以相应的试剂为空白，同时制备供试品与标准品的未显色样品，按照紫外可见分光光度法，在范围内进行光谱扫描，续断多糖与葡萄糖样品显色后均在处有最大吸收，且对应未显色样品在处基本没有吸收，结果见图。因此选择为测定波长。 标准曲线的绘制 精密吸取上述标准品溶液、于容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，得系列葡萄糖标准品溶液。以吸光度为纵坐标，葡萄糖标准品浓度为横坐标进行线性回归，得到标准曲线为：，结果表明，葡萄糖浓度在范围内线性关系良好。 正交试验结果 以续断多糖的提取率为评价指标，筛选续断多糖的超声波辅助提取工艺，正交试验结果见表。由表极差分析可知，各因素的主次顺序为、，最佳提取工艺为，即用120的料液比提取次，提取时间为，且续断多糖超声波辅助提取工艺中一定要控制好料液比和提取次数。分别精密称取份续断药材，每份，依据正交试验优选的最佳工艺条件提取续断多糖，结果测得续断多糖的平均提取率为，为，说明该工艺稳定可行。 小结与讨论 本研究通过正交试验设计，初步建立了渝产续断多糖的超声波辅助提取工艺为料液比，提取时间为60min，提取次，结果测得续断多糖的平均提取率为，为，表明该工艺稳定可行，为渝产续断的进一步开发利用奠定了基础。与已有研究结果相比，渝产续断多糖含量高于黔产续断和五鹤续断，说明续断多糖的含量产地差异性较大，重庆为续断主产区，续断质量较优。 苯酚硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，颜色持久，在左右有最大吸收，采用紫外可见分光光度法测定，简单、快速、灵敏、重复性好。 参考文献： 国家药典委员会中华人民共和国药典一部北京：中国医药科技出版社， 刘永，卫莹芳，闫婕，等不同产地续断中总皂苷的含量测定时珍国医国药，20（）： 董玉琼，何晓红，钟国跃，等正交法优选川续断的提取工艺中国中药杂志，（）： 王文平，郭祀远，李琳，等苯酚硫酸法测定野木瓜中多糖含量的研究食品科学，（）： 李妍，魏建和，许旭东，等苯酚硫酸法定量测定桔梗多糖的研究时珍国医国药，（）： 吴彦，魏和平大蓟多糖提取分离及含量测定光谱实验室，（）： 李强，谢杨，丁宗保，等正交设计优选黄石斛多糖提取工艺安徽农业科学，（）： 翟琨