探讨母血胎儿DNA浓度与早产的相关性.doc

探讨母血胎儿DNA浓度与早产的相关性 谢莉莉 深圳市妇幼保健院儿科，广东深圳518000 摘要目的对母血母血胎儿DNA与早产的相关性进行分析与探讨。方法选取30例在该院接受治疗的早产孕妇先兆早产孕妇，将其划分为实验组，并选取30例争产孕周孕妇，将其划分为对照组，对应实验组孕妇孕周取其血液标本。所有标本都为Y染色体中的SRY位点，荧光定量PCR男性胎儿的DNA，对其中带有SRY基因胎儿的DNA浓度进行检测。结果与实验组孕妇相比，先兆早产转归，其中真性早产患者有20例，胎儿DNA平均浓度值是（625.652.3）拷贝/mL，假性早产患者有10例，胎儿DNA平均浓度值是（220.557.4）拷贝/mL，实验组与对照组产妇相比，假性早产升高比较明显，P0.05，差异有统计学意义。早产组孕妇平均宫颈长度是（29.106.7）mm，而假性早产组孕妇平均宫颈长度则为（41.96.3）mm，此外，对照组产妇平均宫颈长度为（42.35.7）mm.对照组与早产组相比，差异有统计学意义，P0.05，差异无统计学意义。母血母血胎儿DNA与孕妇宫颈长度呈负相关。结论研究表明，母血母血胎儿DNA与早产存在相关性。 关键词先兆早产；母血胎儿dna；荧光定量pcr；相关性 R4A1674-074（4）07（b）045-02 作者简介谢莉莉（1960.4-），女，锡伯族，天津人，本科，副主任医师，主要从事儿内科专业工作。 现阶段，早产在产科领域被称为最具挑战性的妇科问题，而且是导致新生儿死亡与疾病的首要因素，所以，早产在始终备受医学界的关注1。一些研究人员致力于对孕妇早产的预测，对真、假性早产进行区分，对早产临产与先兆早产的间隔时间进行有效掌握，适当与及时用药，确保早产儿成活率的提高，同时有效降低早产儿发病率2。为了对母血母血胎儿DNA与早产的相关性进行分析与探讨，确保孕妇与新生儿生命健康，该院选取30例xx年8月xx年7月在该院接受治疗的早产孕妇先兆早产孕妇，和30例初次妊娠正常孕妇，对母血母血胎儿DNA进行荧光定量PCR检测，结果表明母血母血胎儿DNA与孕妇宫颈长度呈负相关，报道如下。 1资料与方法 1.1一般资料 选取30例在该院接受治疗的早产孕妇先兆早产孕妇，将其划分为实验组，对其进行B超检测结果为男胎，其中早产孕妇平均年龄为（26.41.2）岁，平均孕周为（283.5）周，先兆早产孕妇平均年龄为（25.12.6）岁，平均孕周为（293.1）周。再选取所怀男胎的30例初次妊娠正常孕妇，作为对照组，平均年龄为（27.11.8）岁，平均孕周为（292.5）周。先兆早产诊断标准为，孕妇妊娠满7个月后，孕妇出现10min/次的宫缩，而且孕妇宫颈管缩短。孕妇早产诊断标准为，孕妇妊娠在28周以上，37周以下，规律性宫缩，宫颈扩张超过2cm。两组孕妇年龄、孕周等一般资料P0.05，差异无统计学意义，具有可比性。 1.2方法 所选用仪器设备为可调式微量移液仪，iCycler-IQ定量PCR仪，低温高速TGL-16C台式离心机以及恒温水浴锅。主要试剂为德国生产的DNA提取试剂盒，中山大学达安基因公司生产的PCR检测SRY荧光定量试剂盒、国产的无水酒精以及中国医学科学院生产的淋巴细胞分离液3。 通过抗凝管对所有先兆早产孕妇进行3mL的外周血抽取，3000r/min离心10min，将孕妇血浆吸取在离心小管中。依照孕妇先兆早产转归，将其具体分为真假性早产孕妇。 1.2.1胎儿DNA提取在1.5mL的离心管中加入20L的蛋白酶，并将分离出来的白细胞与200L血浆置于离心管中，在56下进行10min的温育，瞬时离心去上清。再于离心管中加入酒精200L，进行15s的混匀，瞬时离心去上清。最后将QIAampspincolumn加入到混合物中，助于2mL的收集管中，将存废液的收集管去除掉，置换一个新的收集管。 1.2.2荧光定量PCR所有标本都为Y染色体中的SRY位点，荧光定量PCR男性胎儿的DNA，对其中带有SRY基因胎儿的DNA浓度进行检测。 1.3判断与评价标准 依照IAMS所描述的具体措施对宫颈长度进行测量，反复测量3次，宫颈长度取最短者。用单因素方差分析进行显著性检验，判断胎儿游离DNA浓度与先兆早产的关系。 1.4统计方法 采用SPSS10.0软件对数据进行统计学处理，计量资料以均数标准差（xs）表示结果，通过q检验进行两两对比。 2结果 2.1对比正常孕妇与真假性早产母血中胎儿的DNA浓度 实验组孕妇对比，先兆早产转归，其中真性早产患者有20例，胎儿DNA平均浓度值是（625.652.3）拷贝/mL，假性早产患者有10例，胎儿DNA平均浓度值是（220.557.4）拷贝/mL，实验组与对照组产妇相比，假性早产升高比较明显，P0.05，差异有统计学意义，见表1。 2.2母血胎儿DNA和宫颈长度相关性分析 通过回归系数假设检验，采用方差进行相关性分析，结果显示，母血胎儿DNA和产妇宫颈长度相关性非常大，P0.05（P=0.012），r=-0.676，呈现负相关性。 3讨论 3.1游离母血胎儿DNA和早产的关系 相关研究结果表明4，母血母血胎儿DNA会由孕妇妊娠的上升而呈现增加的趋势，到晚孕时会出现明显升高的趋势，此现象在很大程度上和孕妇分娩期逐渐临近有关，也就是说，早产孕妇血浆中的胎儿DNA会呈现高浓度的情况5-6。 孙阳等7对母血母血胎儿DNA与早产相关性研究结果表明，孕妇在孕周为35周时，胎儿DNA平均浓度为74拷贝/mL，在晚孕的情况下，母血胎儿DNA和孕周呈现正相关性，而且每周呈29.3%的增加趋势，同时胎儿血浆中总DNA浓度和产妇孕周并没有相关关系，然而，总的来说，母血胎儿DNA与总DNA浓度呈正相关性，由此表明，母血母血胎儿DNA可以作为早产的重要指标。对比12位足月产孕妇与早产孕妇血浆中母血胎儿DNA，结果显示，发生自发性早产前，就在孕妇血浆中检测到母血胎儿DNA比较高，对其进行相应保胎治疗后，母血胎儿DNA出现一定程度的下降情况，在该研究中，实验组孕妇对比，先兆早产转归，其中真性早产患者有20例，胎儿DNA平均浓度值是（625.652.3）拷贝/mL，假性早产患者有10例，胎儿DNA平均浓度值是（220.557.4）拷贝/mL，实验组与对照组产妇相比，假性早产升高比较明显，P0.05，差异有统计学意义，与孙阳等7人研究结果具有一致性。所以，母血胎儿DNA可当做筛查早产的重要指标。 3.2宫颈长度和母血胎儿DNA的关系 对于正常孕周的孕妇而言，其宫颈长度会随着其孕周时间的增加出现宫颈长度缩短的情况，而对于早产孕妇而言，其宫颈缩短的情况相比于正常孕妇，差异有统计学意义8。此外，随着先兆早产孕妇宫颈的不断缩短，其母血胎儿DNA会呈现不断升高的情况，由此可见，母血胎儿DNA和宫颈长度呈现负相关性。 无创性产前诊断在近些年始终是我国学者进行研究的探索途径与主要思路。而由孕妇血中将胎儿细胞分离出来属于无创性产前诊断的范畴，然而，因为胎儿细胞量比较少，而且分离和富集技术操作比较复杂，诊断所需的价格也比较昂贵，所以不适合常规临床应用。随着近些年分子生物技术的不断发展与完善，为母血母血胎儿DNA检测成为可能，同时也为妊娠并发症筛查与无创性产前诊断开辟新途径。 研究表明，母血母血胎儿DNA与早产存在相关性，而且宫颈长度也和胎儿早产呈现相关性，随着宫颈长度的缩短，母血胎儿DNA会逐渐增加。 参考文献 1梁峰冰.先兆早产孕妇牙周病、血清细胞因子水平与妊娠结局的关系D.杭州：浙江大学，xx：120-121. 2琚竹梅.妊娠早期孕妇外周血中胎儿游离DNA的定量分析D.太原：山西医科大学，xx：1369-1370. 3张春利.脂代谢相关基因ADRP和LPL在妊娠高血压综合征胎盘组织中的表达及意义D.西安：第四军医大学，xx：184-186. 4陶红.母外周血母血胎儿DNA与子痫前期的相关性研究D.青岛：青岛大学，xx：148-149. 5罗轶楠.硫酸镁防治妊高征的临床分析J.医学信息，xx（7上旬刊）：12