TNFa和NO在病毒性脑炎患儿脑脊液中的表达及临床意义.doc

TNFa和NO在病毒性脑炎患儿脑脊液中的表达及临床意义 杨聪琴张玲陈娟 河南科技大学第五附属医院儿科，河南洛阳471000 摘要目的探讨TNF-a（肿瘤坏死因子-a）和NO（一氧化氮）在病毒性脑炎患儿脑脊液中的表达及临床意义。方法选择xx年10月xx年10月收治的病毒性脑炎患儿86例（观察组），留取治疗前后脑脊液标本2mL室温下以2000r/min离心后，取上清液置-20冰箱保存。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）测定脑脊液中的TNF-a；通过比色法测定NO2/NO3值表示NO的浓度。与无中枢神经系统病变的患儿40例（对照组）进行比较。结果观察组急性期患儿脑脊液中TNF-a（1.780.44）ug/L，明显高于对照组的（0.910.37）ug/L。差异有统计学意义（t=9.8139，P0.05）；急性期患儿脑脊液中NO(23.896.54)mol/L，明显高于对照组（7.242.31）mol/L，比较差异有统计学意义（t=5.46,P0.05），具有可比性。 1.2方法 所有患儿入院24h内取脑脊液做常规检查的同时，留取脑脊液标本2mL室温下2000r/min离心后，取上清液置-20冰箱保存，检测脑脊液中TNF-a和NO的浓度。TNF-a检测方法：用由海南华美公司提供的试剂盒，美国HyperionMR2III型酶标仪作为检测仪器，由专业人员用双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ELISA）进行测量。NO检测方法：通过比色法测定NO2/NO3值表示NO的浓度，试剂盒用美国CAYMAN,由专业人员严格按说明书进行检测。两组患儿治疗7d后按上述方法复查脑脊液中TNF-a和NO的水平。 1.3统计学方法 应用SPSS13.0软件进行统计学分析，计量资料以均数标准差表示，比较采用t检验，P0.05为差异有统计学意义，P0.01有显著统计学差异。 2结果 两组患儿急性期和恢复期脑脊液中TNF-a、NO比较见表1、2。 注：*P0.05重症组急性期与恢复期患儿脑脊液中TNF-a水平比较，*P0.01重症组急性期与恢复期患儿脑脊液中NO水平比较,明显高于对照组患儿，差异有统计学意义。 注：P0.05观察组急性期与恢复期患儿脑脊液中TNF-a水平比较，P0.01观察组急性期与恢复期患儿脑脊液中NO水平比较,明显高于轻症组患儿，差异有统计学意义。 3讨论 病毒性脑炎是由各种病毒入侵脑组织引起的急性炎症反应，可引起相应的细胞功能受损病刺激机体发生免疫反应，而细胞因子TNF-a和NO也参与了病毒与机体的反应。TNF-a是一种由单核巨噬细胞分泌的具有广泛生物活性的多肽调节因子，是体内重要的炎症因子，具有双重作用3。由于各种病毒侵入脑组织引起急性炎性反应，会引起相应的细胞功能受损并刺激机体产生免疫反应，而细胞因子TNF-a也参与了病毒和机体的反应4。当病毒侵犯机体时，可激活免疫系统，产生各种细胞因子和体液因子，适量的TNF-a对机体抵抗疾病有益，而过量的TNF-a可使组织严重损伤，器官衰竭5。TNF-a可进一步诱导IL-6、8、10等细胞因子的产生，参与体内急性期反应，引起趋化肽等释放、发热，使内皮细胞活化而导致血管通透性增加。Babu等6发现日本脑炎患者病死率随脑脊液中TNF-a水平的增加而增加，脑脊液中高水平的TNF-a与致死性的预后有关。TNF-a可直接破坏血脑脊液屏障使其通透性增加，可直接刺激下丘脑体温调节中枢引起发热，作用于神经细胞和神经胶质细胞，使其表面表达更多的细胞因子及受体，加重神经细胞损伤，从而引起炎性反应，感染性休克及恶病质的发生。本研究结果显示，病毒性脑炎急性期血清TNF含量明显高于对照组。说明TNF-a水平与病毒感染程度密切相关。过多的TNF-a除引起局部症状外，还可引起全身症状。因此可以通过检测TNF-a水平，有助于判断病毒性脑炎患儿的病情和脑损伤程度，可作为早期诊断参考指标，并检测病毒性脑炎的病程及可能死亡的病例，早期干预，降低病死率。 内源性NO是在一氧化氮合酶（NOS）催化下由L精氨酶转化为L-瓜氨酸和NO，由于NO半衰期短，所以体内NO水平的高低完全依赖NOS。NOS在体内至少有两种存在形式即结构型钙依赖性NOS(cNOS)当其受生理刺激后活化释放少量NO，发挥生理调节作用；而另一种是诱导型钙非依赖性NOS（iNOS），它广泛分布在感染，炎症条件下，内毒素和某些细胞因子诱导下进行释放和转录，合成大量NO而且持续时间较长，引起细胞毒素的作用7-8。病毒性脑炎患儿，由于病毒对机体的入侵，可激活以单核巨噬细胞为代表的防御体系，被激活的巨噬细胞通过非依赖性一氧化氮酶（iNOS）产生高水平的NO，病毒性脑炎急性期脑脊液的NO含量明显高于正常人，且随着病情的恢复，NO的含量较急性期明显下降9。脑脊液中NO的增高虽可抑制病毒的复制，但过量的NO可导致脑组织的损伤。脑损伤严重时，颅内压增高，NO含量可明显增高，因此,NO参与病毒性脑炎的发生、发展过程，脑细胞损伤越严重，NO含量越高成正相关系。所以，通过检测脑脊液中NO的变化，判断分析病情发展，早期干预，降低病死率。 本组资料结果显示：观察组急性期患儿脑脊液中TNF-a（1.780.44）ug/L，明显高于对照组的（0.910.37）ug/L。差异有统计学意义（t=9.8139，P0.05）；急性期患儿脑脊液中NO(23.896.54)mol/L，明显高于对照组（7.242.31）mol/L，比较差异有统计学意义（t=5.46,P0.01）。恢复期患儿脑脊液中NO水平（9.73.8）mol/L与对照组比较差异无统计学意义。故观察组急性期重症患儿脑脊液中TNF-a和NO水平，明显高于轻症及对照组患儿，差异有统计学意义。由此可见，检测TNF-a和NO在病毒性脑炎患儿脑脊液中的水平，有助于临床诊断和判断病情的发展。 参考文献 1SutherlandLJ,CashAA,HuangYJ,etal.SerologicevidenceofarboviralinfectionsamonghumansinKenyaJ.AmJTropHyg，xx，85(1):158-161. 2KimuraS.ClinicalvariabilityinviralnfectionrelatedencephalitisOrencephalopathyJ.NihonRinsho,xx，69(3):545-549. 3刘江海，黄丽素.病毒性脑炎患儿脑脊液中肿瘤坏死因子a水平的检测及其临床意义J.中国医师进修杂志，xx,34(36):39. 4杨金良，任金海.B细胞活化因子在免疫疾病中的研究进展J.中国医师进修杂志，xx,34（12）:72-74. 5刘治学，徐朝辉，张秋业，等.全身炎症综合征患儿血清TNF-a及可溶性受体变化及临床意义J.山东医学，xx（49）:56-59. 6BabuGN,KalitaJ,MisraUR,etal.InflammatorymarkersinthePatientsofJapaneseencephalitisJ.NearolRes,xx,28(2):190-192. 7韦丽华.NO在儿科领域的研