辅酶Q10注射液热原标准的研究.doc

辅酶Q10注射液热原标准的研究 王丽娟肖中元周玲杨红涛陈真文程永刚 （西南药业股份有限公司，中国重庆400038） 【摘要】目的：探讨细菌内毒素检查法测定辅酶Q10注射液中细菌内毒素含量的可行性，并以此建立辅酶Q10注射液热原的质量标准。方法：按照中国药典xx版二部XIE进行。结果：细菌内毒素法能够用于辅酶Q10注射液的细菌内毒素的测定，检测结果与家兔法一致，其质量内控指标为：将样品稀释400倍后，按中国药典xx版二部细菌内毒素法测定，应符合规定。结论：细菌内毒素法质量内控指标可用于辅酶Q10注射液生产中的质量控制。 关键词辅酶q10；细菌内毒素；质量指标 作者简介：王丽娟（1978.01.21），女，汉族，重庆人，大学学历，西南药业股份有限公司，工程师，主要从事药品检测方法的研究。 辅酶Q10注射液广泛应用于充血性心力衰竭、冠心病、高血压、心律失常、原发性继发性醛固酮增多症、颈部外伤后遗症、脑血管障碍、失血性休克及肝炎等疾病的辅助治疗，但是，国家食品药品监督管理局明文规定，其成品进入市场前必须按照中国药典xx版二部的相关规定检查热原。目前，辅酶Q10注射液热原测定主要采用家兔法，该方法虽然准确度较高，然而存在操作不变且难以到达快速检测的目的等缺陷。研究表明，细菌内毒素检查法又称鲎试验法(bacterialendatoxintext，BET)检测药品中内毒素含量具有快速、灵敏、经济、重现性好等优点，并在国内外得到了日益广泛的应用。基于此，本文旨在研究细菌内毒素法检测辅酶Q10注射液中细菌内毒素的可行性，以期建立辅酶Q10注射液热原检测的替代质量标准。 1试验材料及仪器 1.1辅酶Q10注射液 规格：2ml：辅酶Q105mg， 批号：140808，141101，141102,141103,141104,141105,141106。 ：西南药业股份有限公司。 1.2细菌内毒素材料 细菌内毒素工作标准品：10EU/支，批号1309010，购自湛江安度斯生物有限公司。 鲎试剂：为0.25Eu/ml，批号：1301120，购自湛江博康海洋生物制品厂。 为0.25Eu/ml，批号：1302071，购自湛江安度斯生物有限公司。 BET水：5ml/支，批号：1209050，购自湛江安度斯生物有限公司。 1.3仪器 电热恒温干燥箱GZX-DH-5055（上海跃进医疗器械厂）；净化工作台（重庆利通空调净化设备公司）；电热恒温水浴锅H.S.G20-4（临海市东方仪器仪表厂）；实验所用玻璃器皿均进行250干燥2h处理。 2试验方法 2.1辅酶Q10注射液细菌内毒素限值 根据细菌内毒素检查法（中国药典xx年版二部附录XIE）的规定，按以下公式计算内毒素限值：L=K/M。式中内毒素限值L是以EU/ml、EU/mg或EU/u表示；K为按规定给药途径时人体每公斤体重每小时最大可耐受的内毒素剂量，以EU/（kgh）表示，注射剂规定为：K=5EU/（kgh）。一般我国人群平均体重按60kg计算，人体对细菌内毒素的最大耐受量为300EU/h；另我国人体的平均体表面积按1.55m2计算，人体每平方米的最大耐受剂量为(300EU/h)/1.55m2=（193EU/h）/m2。M为人体每公斤体重每小时接受的最大给药剂量，以ml/（kgh）、mg/（kgh）或u/（kgh）表示。 从辅酶Q10注射液的使用说明书可知，本品用于静脉滴注，每天用药量5-10mg辅酶Q10，与100-250ml的氯化钠注射液配伍需在2h内滴完。根据联合用药可知，K总=k1+k2,(k1为氯化钠注射液的耐受剂量，K2为Q10的耐受剂量。根据xx版中国药典可知，k1=250*0.5/(60*2)=125/120EU/（kgh）,K2=5-125/120=475/120EU/（kgh）,辅酶Q10注射液的L值为K2/M=475/120/10/120=47.5EU/mg。 2.2样品最大有效稀释倍数 最大有效稀释倍数（MVD）是指在实验中供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。计算样品最大有效稀释倍数，按以下公式计算：MVD=CL/，式中L为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度，当L以EU/ml表示时，则C等于1.0ml/ml，当L以EU/mg或EU/U表示时，C的单位需为mg/ml或U/ml；为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml）。 由L值可求得最大有效稀释倍数。本品的MVD=CL/=2.547.5/0.25=475. 2.3鲎试剂灵敏度复核 根据中国药典xx年版二部附录XIE项下“鲎试剂灵敏度复核试验”方法用湛江海洋生物制品厂和湛江安度斯生物有限公司内毒素样品用于试验，结果如表1和表2所示。灵敏度复核的测定值C1（湛江海洋生物制品）为0.25Eu/ml，C2（湛江安度斯生物有限公司）为0.2Eu/ml，其结果均约0.52.0之间，可用于试验。 2.4干扰试验 取141101批样品，分别稀释50倍、100倍、200倍、400倍、450倍、475倍后，分别用为0.25Eu/ml的鲎试剂（购自湛江海洋生物制品厂）和为0.25Eu/ml的鲎试剂（购自湛江安度斯生物有限公司）进行干扰试验。结果如表3和表4。 从表3和表4可见：用灵敏度为0.25EU/mL的TAL进行试验，50倍稀释液有干扰，100倍稀释液无干扰。表明本品最小不干扰稀释倍数为100倍。 2.5样品测定 将家兔法检查合格的141101批样品分别稀释100倍、200倍、400倍、475倍后，按中国药典xx版二部附录测定，结果如表5。将家兔法检查不合格的140808批样品分别稀释100倍、250倍、500倍、800倍和1000倍后，按中国药典xx版二部附录测定，结果如表6。 2.6质量指标的建立 如上所述，通过鲎试剂灵敏度试验、干扰试验及样品测定，说明细菌内毒素法能够应用于辅酶Q10注射液的细菌内毒素测定，其检测结果与家兔法一致，表明该法可以替代热原法对辅酶Q10注射液的质量控制。 为了保证辅酶Q10注射液产品的安全性，根据细菌内毒素测定的原理，将质量内控指标定为：样品稀释400倍后，按中国药典xx版二部细菌内毒素法测定，应符合规定。 2.7质量监控 对6个批次辅酶Q10注射液生产灌封前样品采用细菌内毒素法检测，成品采用家兔法检测，结果如表7。细菌内毒素法与家兔法的检测结果一致，说明细菌内毒素法完全适用于对本品的质量控制，且能保证成品质量。 3讨论 细菌内毒素检查法是一种体外热原试验法，它是通过考察药品中存在的微量细菌内毒素而建立起来的，具备操作简单实验费用少.结果迅速可得等优点，现已经被各国药典正式收载。近年来，作为一项新技术、新方法，细菌内毒素检查法虽然广泛应用于药品的热原检查，但其是否能够满足辅酶Q10注射液生产中成品的质量控制，目前鲜见报道。 本实验研究发现，细菌内毒素检查法能够用于辅酶Q10注射液中细菌内毒素的测定，其检测结果与家兔法一致，这表明该方法可以替代热原法对辅酶Q10注射液的质量控制，并由此建立了用细菌内毒素检查法测定本品的内控指标，即将样品稀释400倍后，按中国药典xx版二部细菌内毒素法测定，应符合规定。如将此标准应用于生产，完全能够满