益气活血方对早期糖尿病肾病大鼠肾脏相关指标的影响.doc

益气活血方对早期糖尿病肾病大鼠肾脏相关指标的影响 宋祖荣 （安徽新华学院药学院，安徽合肥230088） 摘要：目的：探析益气活血方对早期糖尿病肾病大鼠肾脏PKC、TGF-1及血清Chol、TG等指标的影响.方法：选择糖尿病肾病造模成功的64只SD大鼠，随机分为空白对照组（11只）、依那普利组11只、益气活血方大剂量组（观察组1，14只）、益气活血方中剂量组（观察组2，14只）、益气活血方小剂量组（观察组3，14只），并选择11只健康SD大鼠作为正常组.比较与分析各组大鼠的血清TG、Chol水平以及大鼠肾组织PKC、TGF-1指标表达情况.结果：DN空白对照组大鼠的血清TG、Chol水平、肾组织PKC、TGF-1表达均明显高于正常组、依那普利组以及益气活血方组.其中，益气活血方组的三个剂量组均可显著降低血清TG、Chol水平、肾组织PKC、TGF-1表达等，尤以大剂量组的效果最优.结论：益气活血方可以有效缓解肾小球纤维化病变，从而有效保护肾脏. 关键词：益气活血方；糖尿病肾病；sd大鼠 ：R285.5：A：1673-260X（xx）04-0071-03 基金项目：在研项目：两中医治法对脑缺血大鼠神经干细胞Wnt/-catenin通路影响及作用机制研究（安徽省教育厅自然研究重点项目：No.KJxxA098） 糖尿病肾病（diabeticnephropathy，DN）是糖尿病最为严重的并发症之一，也是糖尿病患者死亡的主要原因之一.在现代医学中，糖尿病的病因及发病机制还不是完全清楚，但主要涉及到遗传、代谢、自身免疫等方面，是多种致病因素共同所致；因此，目前缺乏病因的有效治疗方法，缺乏针对性的防治药物.通过相关研究表明1，蛋白激酶C（ProteinKinaseC，PKC）与转化生长因子1（TGF-1）与早期DN的发生有着十分密切的联系.在祖国医学中糖尿病被称为消渴病，而益气活血法是临床上治疗糖尿病的常用中医治法.本实验主要研究观察益气活血方对早期DA大鼠模型血清中甘油三脂（Triglyceride，TG）、胆固醇（cholesterol，Chol）水平变化的影响，同时观察对肾脏组织中PKC、TGF-1的表达，探讨益气活血方对早期DA的影响及其作用机制. 1材料 1.1实验动物 健康SD雄性大鼠80只，体重200g240g，由南京医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK（苏）xx-0031. 1.2药物与试剂 益气活血方（脑络欣通）：黄芪30g、三七10g、川芎10g、红花6g等，由安徽中医药大学中药制剂室制备；Zxx1185）；依那普利（杭州赛诺菲民生制药有限公司，批准文号：Jxx0113）；链脲佐菌素（Streptozin，STZ，美国Sigma公司）；TGF-1（兔多抗，上海科兴商贸有限公司）；PKC（兔多抗，上海丽臣商贸有限公司）；PKC试剂盒（北京博奥森生物技术有限公司）. 1.3仪器 ASP200组织脱水机（德国Leica公司），TB-718生物组织自动包埋机（湖北孝感泰维电子设备有限公司），LKB超薄切片机（日本太阳株式会社产品），TR-180II型生物组织全自动染色机（湖北泰维科技实业有限公司）TK-218I恒温摊片拷片机（湖北孝感泰维电子设备有限公司），OlympasBX-53光学显微镜（日本奥林巴斯光学株式会社产品），DP801形态学显微图像分析系统（江苏南京捷达科技发展有限公司）. 2方法 2.1DN模型大鼠复制方法 SD雄性大鼠，用普通饲适应性喂养1周后，用试纸法检测尿糖、尿蛋白阴性后，随机抽取11只作为正常组；其余69只大鼠作为造模组，按文献方法行左侧肾脏切除术+STZ复制DN模型2.造模前禁食12h，造模成功后一周，造模组按30mg/kg剂量腹腔内注射STZ，正常组腹腔内注射等量柠檬酸缓冲液.72h后经大鼠尾静脉采血测血糖，空腹血糖（FBG）16.7mmol/L，而且出现多饮、多食、多尿等临床表现，可以确认为糖尿病模型.在连续喂养8周后，测24h尿蛋白定量20mg，为DN造模成功.在造模过程中死亡5只，造模成功64只. 2.2分组及给药 将造模成功的64只大鼠随机分为空白对照组（11只）、依那普利组11只（1.04mg/kg/d）；益气活血方大剂量组（观察组1，14只）21.8g/kg/d；益气活血方中剂量组（观察组2，14只）10.9g/kg/d；益气活血方小剂量组（观察组3，14只）5.45g/kg/d.正常组、空白对照组同样方法予以等量的生理盐水灌胃，每天给药1次，各组连续给药12W. 2.3取材及指标的测定 于末次给药后，禁食不禁饮12h，用10%水合氯醛麻醉（3.6mL/kgBW，ip）大鼠，取仰卧位，行胸腹联合正中切口，充分暴露心脏及右肾，各组于心脏采血，肝素抗凝，测定血清TG、Chol；然后，摘取右肾，剥离肾包膜，称重，切取肾组织，置 于100ml的10中性甲醛溶液中固定48h后，脱水、透明、浸蜡、包埋后，采用免疫组