傣药雅解沙把对高脂血症小鼠降脂作用研究.docVIP

傣药雅解沙把对高脂血症小鼠降脂作用研究 王磊段小花殷红陈普陈清华张超* 云南中医学院，云南昆明650500 【摘要】目的：观察雅解沙把对蛋黄乳致高脂血症小鼠血清的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白-胆固醇（HDLC）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDLC）的影响。方法：健康ICR小鼠100只，随机分为5组：正常对照组、模型组、辛伐他丁阳性组（0.02g/kg）、雅解沙把高剂量组、雅解沙把低剂量组。除正常组、模型组灌胃给予相同体积蒸馏水外，其余组灌胃给予相应药物。蛋黄乳剂复制小鼠高脂血症模型，观察小鼠血清TC、TG、HDLC、LDLC水平变化。结果：与模型组比较，雅解沙把组能显著降低小鼠血清TC、TG水平。结论：雅解沙把对高脂血症模型小鼠具有一定的降血脂作用。 关键词傣药；雅解沙把；高脂血症；解脂毒 【】R285.5【文献标志码】A【】1007-8517（xx）04-0021-03 基金项目：国家自然科学基金项目（编号：81160555）；国家中医药管理局五重点建设学科“傣医学”、“傣药学”学科；云南省卫生厅民族医药文献及中药民族药院内制剂研发项目（KY14）。 作者简介：王磊（1987-），男，河南信阳人，云南中医学院研究生，研究方向：民族药开发与研究。 通信作者：张超（1959-），男，云南腾冲人，主任医师，教授，E-mail：zhangc1921. 傣医认为“雅解（解药）”具有调节人体生理功能、解除人体的各种毒素、保持体内功能的平衡和协调的功效。雅解，即解药之意，是傣医常用的特色药物之一，是傣族医学中最具特色的药物及治疗方法之一，已成为傣族医学体系中的重要组成部分1。在长期医疗实践经验的积累过程中，傣族人民发现上百种解除各种毒物及有害物质的药物及方剂，统称为“雅解”2。雅解方药在临床应用十分广泛3。“解药”在傣族地区具有使用面广、疗效较好、家喻户晓、历史悠久的特点，从古至今，在傣族民间家家都备有不同的“解药”。几千年来傣族人在应用“解药”方面总结了许多的经验，认为解药具有调节人体的生理功能，解除人体的各种毒素，保持体内“四塔”（风、火、水、土）、“五蕴”（色、识、受、想、行）功能的平衡和协调，解毒养颜之功4。“未病先解”、“先解后治”是傣医独特的治疗疾病的“解毒”理论，是历代傣医经过长期的临床探索与实践的经验总结5。通过实地调研、收集、西双版纳州傣医院等单位进行的初步临床研究，结果表明：雅解沙把有解食物毒、药物毒、酒毒、烟毒、毒虫毒、热毒等作用。本实验在傣医雅解理论的指导下，主要是以蛋黄乳复制急性高脂血症模型为研究对象，拟探讨“雅解沙把”对蛋黄乳所致小鼠脂毒是否有解毒的作用，为其解毒机制研究奠定基础，以期为临床安全、合理用药提供理论依据，同时为雅解理论及雅解临床应用提供实验依据。 1实验材料 1.1药物与试剂“雅解沙把”（百解胶囊），滇药制字（Z）xx2252K，0.2g60粒/瓶，5粒/次，每日3次；云南省西双版纳州傣医院院内制剂，由西双版纳州傣医院提供；辛伐他汀片（杭州默沙东制药有限公司，批号：xx0001）；总胆固醇测定试盒TC（南京建成生物工程研究所，批号：140551）；甘油三酯测定试剂盒TG（南京建成生物工程研究所，批号：140551）；高密度脂蛋白测定试剂盒HDLC（南京建成生物工程研究所，批号：140551）；低密度脂蛋白测定试剂盒LDLC（南京建成生物工程研究所，批号：140551）；蛋黄乳液（75%）。 1.2动物健康ICR小鼠，雌雄各半，体重（202g），由四川省医学科学院实验动物研究所提供，合格证号：SCXK（川）xx-24，合格批号：OO14345；饲养以鼠粮、自来水，置于动物饲养箱内，以锯末作笼垫，室温（211），光周期12L12D条件下饲养；适应一周后开始实验。 1.3仪器酶标仪（InfiniteM200PRO，瑞士Tecan公司）；分析天平（型号：AL104METTLERTOLEDO，Switzerland，0.0001g）；高速低温离心机（CF16RXseries，HITACHI公司）；电动玻璃匀浆机（DY89-型，宁波新芝生物科技股份有限公司）；数字恒温水浴锅（HH-S28S，金坛市大地自动化仪器厂）。 2方法 2.1雅解沙把提取物的制备取“雅解沙把”生药粉末500g放置于不锈钢锅中，分三次加入5倍、3倍、2倍体积的70%乙醇50水浴温浸24h，过滤，将三次滤液合并，旋转蒸发仪上浓缩成稠浸膏，置于4冰箱中冷藏保存备用，临用前按剂量现配至所需浓度。 2.2试剂剂量设置与配制蛋黄乳液的配制：取12d的新鲜鸡蛋，除去蛋清，用消毒生理盐水搅拌混匀，配成75%的蛋黄乳液备用，4贮藏备用6。 原雅解沙把的浓度为：“雅解沙把”70%醇煎提取、过滤制备稠浸膏，其中含有生药2g/ml溶液，临用时稀释成不同质量浓度备用。动物注射蛋黄乳后最佳取血点的确认：取体重（202）g的健康ICR小鼠30只，按体重与性别随机分到5组，每组6只，正常对照组腹腔注射生理盐水（0.5ml/只），其余4组腹腔注射75蛋黄乳（0.5ml/只），每组分别于注射后0、6、12、18、24、48h后小鼠眼眶静脉丛取血，离心后测定血清TC、TG，找寻小鼠注射蛋黄乳液后胆固醇升高到极大值所对应的时间点7。 2.3高脂血症模型复制参考文献方法8-10，除正常对照组腹腔注射生理盐水（0.5ml/只）外，其余4组腹腔注射75蛋黄乳（0.5ml/只），注射后雄性小鼠20h或者雌性小鼠5h后，末次给药后1h，摘取眼球取血，取血前禁食不禁水12h。 2.4实验分组与给药取100只（体质量1822g，雌雄兼用）健康ICR小鼠，适应性喂养1周后，随机分成5组。分组为：正常对照组、模型对照组、阳性对照组（辛伐他汀片20mg/kg）、雅解沙把高剂量组、雅解沙把低剂量组，每组20只。每只小鼠按0.2ml/10g灌胃给药，正常对照组和模型组灌胃给予等体积蒸馏水；给药组灌胃于相应组的药物，给药前禁食不禁水12h，连续给药7d。 2.5实验用药剂量的选定雅解沙把剂量组的配制：雅解沙把（百解胶囊）临床用量：0.2g*5粒*3次=3g/人-1d-1药物浓度设置为等效量、9倍等效量两个剂量。根据人和动物的体表面积折算法，计算得出“雅解沙把”小鼠口服给药的等效量为0.39g/kg，再参考实验组前期所完成的“雅解沙把”抗炎实验的有效剂量（P0.05）为9倍临床等效剂量，故本实验小鼠选择3.51g/kg、0.39g/kg为高、低剂量。 2.6指标检测 2.6.1一般情况实验期间每天称体重，观察小鼠食欲行为、粪便、毛发及死亡情况，做好记录，实验结束时处死小鼠，称量体重。 2.6.2血清样品制取末次给药后1h，小鼠摘取眼球取血，以3600r/min离心10min分离血清，离心温度设置为4，样本放置于48可稳定7d，-20可稳定一个月。 2.6.3实验样品测定按总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒说明书，依次测定血清中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量，并做好记录。 2.7数据统计与处理采用SPSS16.0数据软件进行分析，计量资料用均数标准差（xs）表示，数据方差齐进行组间t检验；方差不齐进行组间t检验。组间差异比较采用t检验，P0.05为差异具有统计学意义。 3结果 不同剂量雅解沙把醇提物对蛋黄乳致高脂血症小鼠血脂水平的影响，分别测定各组实验小鼠血清中的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），实验与分析结果如下。 3.1雅解沙把对蛋黄乳致小鼠高脂血症TC、TG含量影响比较模型组与正常组相比，模型组小鼠血清的TC、TG浓度均升高且差异具统计学意义（P0.05），说明高脂血症小鼠模型复制成功。与模型组相比，雅低组、阳性组，TC均降低且差异具有统计学差异（P0.05）；与模型组相比，雅高组、辛伐他汀阳性组，TG均降低且差异具有统计学意义（P0.05）。说明雅解沙把在降TC、TG水平方面具有一定的作用，且雅高、雅低组降低TC、TG的侧重点有所不同。见表1。 3.2雅解沙把对蛋黄乳致小鼠高脂血症TC、TG含量影响比较模型组与正常组相比，模型组小鼠血清的LDL-C、HDL-C浓度水平均分别升高、降低且差异具有统计学意义（P0.05）。表明雅解沙把对该模型的降血脂作用不是很明显。见表2。 4讨论 “雅解”学说是傣医学最具民族特色的理论之一，它以四塔、五蕴为理论核心，“未病先解，先解后治”的解毒理论是其核心内容，雅解能解除人体内各种毒素，调节因精神因素所导致体内“四塔、五蕴”功能失调而发生的各种疾病，达到防病治病，保持人体健康之目的11。在长期医疗活动中傣族人民陆续发现了上百种具有解毒功效的药物及方剂，统称为雅解。雅解功能以解毒为主，针对各种食物、药物、动物叮咬及各种原因过敏等所致的体内毒素而设，它属于傣医“解”理论的重要组成部分12。傣医广义的“解药”包括的内容非常广泛；狭义的“解药”内容包括：解除食物毒性、解除毒性动物叮咬毒、解除毒热、解除药物毒性和解除药物作用五个方面13。目前，从国人饮食的发展趋势来看，饮食结构已发生了较大改变，特别是高脂饮食的摄入明显增加，脂肪摄入过量则产生“脂毒”（高脂血症）。“雅解沙把”是傣医广泛用于治疗烟、酒、药物、食物中毒行之有效的方药，临床上除用于解“酒毒”外，更多的是用于解“食物毒”，包括解脂毒等。项目组成员前期和西双版纳州傣医院临床研究均表明多种傣医解药具有明显的解毒、保肝、促进消化功能的作用，临床主要用于消化系统疾病、代谢性疾病等。 鸡蛋黄中的胆固醇和脂肪含量十分丰富，腹腔注射75%的蛋黄乳后，外源性脂质通过腹膜迅速进入血液循环，从而快速升高实验动物的血脂。所以本实验采取腹腔注射75%蛋黄乳方法成功复制急性高脂血症模型。本实验主要是以蛋黄乳复制急性高脂血症模型为研究对象，拟探讨“雅解沙把”对蛋黄乳所致的脂毒（高脂血症）是否有解毒的作用。实验结果表明：总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）是判定高脂血症的重要指标，雅解沙把灌胃7d后，对实验小鼠血清TC、TG浓度水平均显著降低，且雅高、雅低组降低TC、TG有所侧重。提示：雅解沙把对高脂血症模型小鼠具有降血脂的作用，也即是具有解脂毒的作用。 参考文献 1方洁，许建新.傣医“雅解”发展与应用J.中国中药杂志，xx，37（14）：2190-2192. 2王辉，郑进，代蓉，等.傣医解药雅解沙把对大鼠肝药酶活性的影响J.中国民族医药杂志，xx，18（11）：52-55. 3段小花，郑进，王辉，等.傣药雅解沙把解药物毒作用的研究J.云南中医中药杂志，xx.34（10）：56-57. 4林艳芳，依专，岩罕单，等.论特色傣药雅解（解药）J.云南中医中药杂志，xx，14（2）：38-40. 5玉腊波，林艳芳.傣药“雅解”（解药）临床应用举隅J.中国民族医药杂志，xx，14（7）：25-29. 6徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学M.3版.北京：人民卫生出版社，xx：1203. 7凌树森，张菊，孙维林.小鼠高胆固醇血症快速造型法的研究J.中国药学杂志，1985，70（1）：15-17. 8闫志芳，王永辉，李季英，等.建立高血脂症动物模型的实验研究J.山西中医学院学报，xx，5（4）：15-16. 9翟羽佳，陈邦添，李善兵，等.TritonWR-1339诱发小鼠高脂血症模型的研究J.中国药理学通