尖顶羊肚菌胞外多糖抗氧化实验研究.ppt

尖顶羊肚菌胞外多糖抗氧化实验研究,组 员：潘志福 李华贵 罗盛伟 指导老师： 张 松,自由基：指含有奇数价电子并因此在一个轨道上具有 一个未成对电子的原子或原子团。 自由基危害： 1.心脏疾病 2.癌症 3.炎症 4.老年痴呆症 5.白内障 提高自由基清除效率具有较高的应用价值和实践意义！,尖顶羊肚菌多糖：,抗肿瘤 免疫调节 抗疲劳 降血脂 抗菌 达到延缓衰老！,主要实验步骤：,测定尖顶羊肚菌结晶物成分： 总 糖测定：苯酚-硫酸法 还原糖测定：3，5-二硝基水杨酸法 清除羟基自由基： 亚铁-邻二氮菲法 清除超氧阴离子自由基： 邻苯三酚自氧化法 抗脂质过氧化： 硫代巴比妥酸法测定丙二醛,图1：苯酚-硫酸法测定多糖样品总糖标准曲线 （y = 0.007x - 0.0032，R2 = 0.9977）,图2：DNS法测定多糖样品还原糖标准曲线 （y = 0.0006x-0.0063，R2 = 0.9995）,表1：待测样品中主要成分的含量（%）,1.多糖样品总糖与还原糖含量的测定：,2.清除羟基自由基： 清除率I( %) =A (样) - A (损)/A (未) - A (损) 100%,图3：不同浓度尖顶羊肚菌胞外多糖清除羟基自由基,多糖对羟基自由基的清除率在7%的水平附近波动,在 1000g/mL多糖样品作用下，羟基自由基的抑制率接近9%。,3.清除超氧阴离子自由基：,与阴性对照组比较发现，加入多糖样品后邻苯三酚自氧化反应曲线明显加快了邻苯三酚的自氧化反应。 依据化学平衡推测，氧化反应速度加快，与超氧阴离子自由基被清除有关。,图4：325nm下不同浓度梯度多糖样品邻苯三酚氧化曲线,图5：不加入多糖自氧化回归直线方程 （y = 0.0076x + 0.5098，R2 = 0.9973）,图6：62.5g/ml多糖自氧化回归直线方程 （y = 0.0118x + 0.9888，R2 = 0.994）,清除率： 超氧阴离子自由基清除率=（V-V0）/V0 V =多糖样品组邻苯三酚自氧化反应速率 V0 =阴性对照组邻苯三酚自氧化反应速率,图9：500g/ml多糖自氧化回归直线方程 （y = 0.0139x + 0.8128，R2 = 0.991）,图10：1000g/ml多糖自氧化回归直线方程 （y = 0.0138x + 0.8605，R2 = 0.9945）,图7：125g/ml多糖自氧化回归直线方程 （y = 0.0134x + 0.844，R2 = 0.9947）,图8：250g/ml多糖自氧化回归直线方程 （y = 0.0126x + 0.9511， R2 = 9916）,图11: 不同浓度尖顶羊肚菌胞外多糖对超氧阴离子自由基的清除作用,在62.5g/mL多糖浓度对超氧阴离子自由基的清除率只有55.26%，随着 多糖浓度的上升，对超氧阴离子自由基清除率也逐渐升高，在500g/mL多糖 浓度下，清除率达到最大，清除率超过80%，此后即使再增大多糖浓度，多糖 样品对超氧阴离子自由基的清除率也没有明显的增加。,4.多糖样品抗脂质过氧化的作用： 抑制率(%) = (对照组-样品组 ) / 对照组 100 %,图12：不同浓度尖顶羊肚菌胞外多糖对脂质过氧化的抑制,不同浓度的尖顶羊肚菌胞外多糖样品对脂质过氧化的抑制率大约为40%-50%， 在125g/mL多糖浓度下，抑制率达到最大，超过了50%，,实验结果总结：,尖顶羊肚菌胞外多糖有较强清除自由基能力。,实验评价：,有效清除自由基是当前实验研究的热点； 通过探究尖顶羊肚菌胞外多糖清除自由基能力，研制成保健品或医药开发，提高全民身体素质，达到延缓衰老目的，该实验结果实际运用价值高； 实验结合小鼠实验，从生理生化的角度探究抗氧化能力，实验结果贴近生物化学水平，具有一定的科学性和创新性，理论水平高； 清除自由基是比较成熟的技术，本实验中方法步骤和实验设计可行性高，实验涉及到的仪器设备、药品试剂均比较常见；,实验时间安排：,实验准备：0.5小时； 尖顶羊肚菌结晶物成分测定：1小时； 多糖清除羟基自由基：2小时； 多糖清除超氧阴离子自由基：1小时； 多糖抑制脂质过氧化：2.5小时； 撰写论文：1小时； 共：8小时,致谢：,感谢学院生物化学实验室为本实验顺利开展提供相关的仪器和试剂； 感谢院学生会为本次生化实验技能比赛所付出辛勤的劳动和不懈的努力，给予我们很多有益的