GB13089-1991饲料中恶唑烷硫酮的测定方法.pdf

中华 人 民 共 和 国 国家 标 准饲料中嗯哇烷硫酮的测定方法G B 1 3 0 8 9 一 9 1Me t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f o - s a n l i d i n e t h i o n ei n f e e d s 本标准参照采用国际标准I S O 5 5 0 4 -1 9 8 3 含油种子及其去油后饼粕中异硫氛酸醋和嗯哩烷硫酮的测定 。1 主题内容与适用范围本标准规定了饲料中嗯哇烷硫酮的测定方法。本标准适用于菜子饼粕和配合饲料中i l 哇烷硫酮的测定。2 原理 饲料中的硫葡萄糖昔被硫葡萄搪昔酶( 芥子酶E C 3 . 2 . 3 . 1 ) 水解， 再用乙醚萃取生成的嗯哇烷硫酮， 用紫外分光光度计测定。3 试荆和溶液 除特殊规定外， 本标准所用试剂均为分析纯， 水为燕馏水或相应纯度的水。3 . 1 乙醚: 光谱纯或分析纯。3 . 2 去泡剂: 正辛醇( C . H O H ) ,3 . 3 p H 7 . 0 缓冲液: 取3 5 . 3 m L 0 . 1 m o l / L柠檬酸( C 5 H 8 0 7 - H , O , H G 3 -1 1 0 8 ) 溶液( 2 1 . 0 1 g / L ) 于一个2 0 0 ml, 容量瓶中， 再用0 . 2 m o l / L磷酸氢二钠( G B 1 2 6 3 ) 溶液调节p H至7 . 0 .3 . 4 酶源: 用白芥( S i n a p i s a l b a L . ) 种子( 7 2 h内 发芽率必须大于8 5 %， 保存期不得超过两年) 制备。 将白芥籽磨细， 使8 0 %通过0 . 2 8 m m孔径筛子， 用正己烷或石油醚( 沸程4 0 -6 0 C ) 提取其中 脂肪， 使残油不大于2 %, 操作温度保持3 0 以下， 放通风橱于室温下使溶剂挥发。 此酶源置具塞玻璃瓶中4 下保存，可用6 周。4 仪器、 设备4 . 14 . 24 . 34 . 44 . 54 . 64 . 74 . 84 . 9分析天平: 感量0 . 0 0 0 1 g ,样品筛: 孔径。 . 2 8 m m .样品磨。玻璃干燥器。恒温干燥箱: 1 0 3 士2 0c ,三角烧瓶: 2 5 , 1 0 0 , 2 5 0 m L ,容量瓶: 2 5 , 1 0 0 m L .烧杯: 5 0 m l 。分液漏斗: 5 0 m L o国家技术监督局 1 9 9 1 一 0 7 一 1 6 批准1 9 9 2 一 0 4 一 0 1 实施免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 3 0 8 9 一 9 14 门0 移液管: 2 m L .4 . 1 1 振荡器: 振荡频率1 0 。 次/ m i n ( 往复)4 . 1 2 分光光度汁: 有1 0 m m石英比色池，可在2 0 0 3 0 0 n m处测量吸光度。5 试样制备采集具有代表性的样品至少5 0 0 g ， 四 分法缩分至5 0 g ， 再磨细， 使其8 0 %能通过。 . 2 8 m m筛。6 测定步骤6 . 1 称取试样( 菜籽饼粕1 . 1 g ， 配合饲料5 . 5 g ) 于事先干燥称重( 精确到。 . 0 0 1 g ) 的烧杯中， 放入恒温干燥箱( 4 - 5 ) ， 在1 0 3 f2 下烘烤至少8 h ， 取出置干燥器( 4 - 4 ) 中 冷至室温， 再称重， 精确到。 . 0 0 1 g o6 . 2 试样的酶解 将干燥称重的试样全倒入一2 5 0 m L三角烧瓶( 4 - 6 ) 中， 加入7 0 m L沸缓冲液( 3 - 3 ) ， 并用少许冲洗烧杯， 使冷却至3 0 C， 然后加入。 . 5 g 酶源( 3 - 4 ) 和几滴去泡剂( 3 - 2 ) ， 于室温下振荡2 h 。 立即将内 容物定量转移至1 0 0 m l _ 容量瓶( 4 . 7 ) 中， 用水洗涤三角烧瓶( 4 . 6 ) ， 并稀释至刻度， 过滤至1 0 0 m L三角烧瓶( 4 - 6 ) 中， 滤液备用。6 . 3 试样测定 取上述滤液( 菜籽饼粕1 . 0 m L ， 配合饲料2 . 0 m L ) ， 至5 0 m L分液漏斗( 4 - 9 ) 中， 每次用1 0 m L乙醚( 3 . 1 ) 提取两次， 每次小心从上面取出上层乙醚。 合并乙醚层于2 5 m L容量瓶( 4 - 7 ) 中， 用乙醚( 3 . 1 ) 定容至刻度。 从2 0 0 n m至2 8 0 n m测定其吸光度值， 用最大吸光度值减去2 8 0 n m处的吸光度值得试样测定吸光度值AE 。6 . 4 试样空白测定( 菜籽饼粕此项免去， A 。 为零) 按6 . 1 , 6 . 2 , 6 . 3 同样操作， 只 加试样不加酶源( 3 . 4 ) , 测得值为试样空白 吸光度值Ad ,6 . 5 酶源空白测定 按6 . 1 , 6 . 2 , 6 . 3 同样操作， 不加试样只加酶源 3 . 4 ) , 测得值为酶源空白 吸光度值Ac了 测定结果了 . 1 计算公式 ，、行_ _ _IA二一 A。一 A X=( A E 一A 。 一A c ) X C P X 2 5 X 1 0 0 X 1 0 - X - 二: 生 一 一 二 些 一 二 = X 2 0 . 5 刀 子刀s式中: X试样中P, 哇烷硫酮的含量， 以每克绝干样中P , 哇烷硫酮的毫克数表示; A t 试样测定吸光度值; A 试样空白 吸光度值; A c 酶源空白吸光度值; C . p 转换因素， 吸光度为1 时， 每升溶液中p 烷硫酮的毫克数， 其值为8 . 2 s y n 试样绝干质量+ H 若试样测定液经过稀释， 计算时应予考虑。7 . 2 结果表示 每个试样取2 个平行样进行测定， 以其算术平均值为结果。 结果表示到0 . 0 1 m g / g o了 . 3 重复性 同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定， 所得结果之间的差值: 在嗯哇烷硫酮含量小于或等于。 . 2 0 m g / H时， 不得超过平均值的2 0 /;免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B 1 3 0 8 9 一 9 1在嗯哇烷硫酮含量大于0 . 2 0 m g / g 而小于。 . 5 0 m g / g 时， 不得超过平均值的1 5 写;在嗯哇烷硫酮含量等于或大于。 . 5 0 m g / g时， 不得超过平均值的1 0 0 0 0附加说明: