GB-T7628-2008谷物中维生素B1测定.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB/T7628-2008代 替GB/T76281987谷物中维生素B1测定De t e r Il n i n a t i o o f v i t a l i u B1i c e r e a szOOB-05-27发布2008-10-01 男:白 色甬 严 嫦 齄 氅 旱 嬲垦发 布GB/T7s 28-2008曰本 标 准 参 考 了AACC Me t h o d 868砜Th i a m i e Th i o c h r o m e Me t h o d (z O00年英 文 版 )。本标准是对GB/T76281987谷物维生紊B浏定方法 的修订。本标准与GB/T76z B-19留的主要差异如下:规定了实验用水应符合GB/T66Bz 中三级水的规格 ,规定了扦样、 分样方法,盐酸水解改为硫酸水解,增加了硅酸盐离子交换树脂的使用,将正丁醇溶剂改为异丁醉溶剂;提取液色泽浅、 无干扰物质时,不箫进行提纯步骤;取消以干基计算测定结果的要求;增加了未通过提纯的试样中维生素Bl 含量的计箅公式;增加了谷饧中维生素Bl 低含量时的澍定重复性的要求。本标准由国家稂食局提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准起草单位:国家稂食局武汉稂油饲料质量监督检验中心。本标准主要起草人:杨林、 刘小敏、 屈利文、 何-帆、 钱防。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:GB/T76281987。前GB/T7628-2008谷物 中维生素B1测定1 范围本标准规定了用荧光分光光度计测定谷物中维生素Bl 的原理 、 试剂和材料 、 仪器设备 、 试样制备 、分析步骤 、 结果计算及重复性 。本标准适用于谷物中维生素Bl 的测定 。本标准检出限为005u g 。2 规范性引用文件下列文仵 中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。凡是注 日期 的引用文件 ,其 随后所有的修改单(不 包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准 ,然 而,鼓励根据本标准达成协议 的各方研究是否可使用这些文件 的最新版本 。凡是不注 日期的引用文件 ,其最新版本适用于本标准 。GB5491 粮食 、 油料检验 扦样 、分样法G B / T 6 6 8 2 分析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法( G B / T 6 6 8 2 1 9 9 2 , n c q I s o 3 6 9 6 : 1 9 8 7 )3 原理试样经稀硫酸 、 淀粉酶分解后 ,溶液中维生紊Bl (硫胺素 ,C】 z H17ON4s CI)在碱性条件下被铁氰化钾氧化生成硫色素 ,即荧光色素。硫色素在异丁醇中的荧光强度与试样 中维生素B】的含量成正 比,依 此测定维生素B】含量 .4 试剂和材料除另有规定外 ,所用试剂均为分析纯 ,实 验用水应符合GB/T6682中三级水的规格 。41 盐酸4 2 乙酸钠溶液c ( C H 3 C o o N D = 2 . 5 m o l / L取2 0 5 g 无水乙酸钠或3 4 0 g 水合乙酸钠( C H a C o o N a 3 H 2 0 ) 溶于水中, 稀释至1 0 0 0 m L 。43 乙酸溶液c (CH3Co o H)=3%(体积分数)取3 0 mL 冰乙酸用水稀释至1 0 0 0 mL .44 “化钾溶液c (KCI)=0.25g /m 【称取250g 氯化钾溶解于水 中,稀 释至1000m L。4 5 硝酸银溶液c( A gN O a) = 0 . 0 1 g/ mL称取1g 硝酸银溶解于水 中,稀 释至 100m L。4 , 6 淀粉酶悬浮液c = 0 . 0 6 g / m L取6g 淀粉酶制剂(t a k a d Ia s t a ),其 活性为1:250或相 当活性 的其他磷酸酯晦 ,用 2.5m l /L乙酸钠溶液(42)制成悬浮液 ,稀释至100m L,当日制备当 日使用 。47 硅酸盐离子交换剂47.1 活性沸石将沸石按规定筛层 进行 筛选 ,称 取通过 上层 筛 (孑 L径 0297m m ,5o 目)、留存 在下 层筛 (孑 1径 o .177m m ,80目)上 的沸石100g 于布氏漏斗中,用 3%的热乙酸(改 3,约 50 )溶 液洗涤15m i n ,应使乙酸与沸石保持接 触10m i n 15m i n ,用真 空泵减 压抽 滤 乙酸 ,再 用025g /m L的热 氯化 钾 溶 液(4.4,约50 )250m L进行洗涤 ;最后用热水 (约 50 )洗 涤 ,直 至洗 出液用硝酸银 (4.5)检查时不 出现1GB/T7628-2008氯离子。在室温或低于100烘箱中将沸石干燥后,在干燥器中冷却至室温,储存于磨口瓶中备用。4 . 7 , 2 硅酸盐离子交换树脂, o R e x , 0 ( H 型)将硅酸盐离子交换树脂按规定筛层进行筛选, 称取通过上层筛( 孑1 径 0 2 9 7 m m , 5 o 目) 、留存在下层筛( 孔径 0 . 1 4 9 m m , 1 0 0 目) 上的硅酸盐离子交换树脂5 0 g , 加人3 0 0 m L 盐酸( 4 , D , 振摇1 0 m i n 1 5 m i n , 将酸倒出, 再加3 0 0 m L 水, 振播1 m l n , 将水倒出。重复数次, 直至树脂的p H 为改5 7 . 0 , 抽滤或离心除去多余的水分, 冷藏储存( 4 ) 。当时使用, 可以不除去多余的水分。4 . 8 氢筑化钠溶液( N aoH ) = 0 , ls g/ mL将15g 氢氧化钠溶于水中,冷却,稀释至4 . 9 铁“化钾溶液c匚K 3 F e( C N ) s彐=将1g 铁氰化钾溶于水中,阴凉处倮存。4.10 孩性铁原化钾取0 。0 1 g / m L 铁佤化8)稀释定容至 100m L,现配现用 。也可以按每配制 。4. 异丁醇匚 (CH3)2空 白荧光值应低将异丁醇在全玻璃仪器上蒸馏,或加4.12 硫胺素溶液4.12.1 磙胺素将硫胺素溶于25%乙醇(4.14)中,并用4.12.2 磙胺素淮确量取54.123 硫胺素准确量取4配现用 。100m L。至1 0 0 mL , 现4.13 硫酸奎宁溶4 . 1 3 . 1 硫酸奎精确称取100稀释至1 0 0 O mL ,储存于棕色瓶中冷藏保4.13.2 硫酸奎宁工作准确量取3m L硫酸奎1 0 0 0 mL , 储存于棕色瓶中冷藏保存。4.l 0 乙醇溶液z s %(体积分数)将25m L无水 乙醇加人到水 中,4 . 1 5 硫酸溶液c ( 2 H 2 s o 。) = 0 , 1 m d / L将2.8m L浓硫酸加人到水中,稀释定容至 1000m L。5 仪器设备5.1 荧光分光光度计 。5.2 电热恒温水浴 :100 。5.3 实验室用真空泵 。5 . 4 电热恒温箱: 3 7 4 o。5.5 吸附分离柱(见 图1):容器全长约235m m ,上端储液槽 (外 径长度)30m m 70m m ,容量为50m L;中部吸附管(夕卜 径长度)8m m 130m m ;下端为35m m 的毛细管,其孔径在液体通过时的流23 mL , 用0 1 5 g/ mL 氢氧化钠溶液(4.8)加 人 1滴铁氰化钾溶液(I)精确称取(4 ),可()c (1姓 )稀 释溶液()13D,用01m l /L硫酸(至1 0 0 mL , 摇量应控 制在不 大 于1m L/m i n 。56 反应管 (见 图2):25m L具塞 刻度 玻璃试 管 。单位为毫米分析天平2实验磨 。容量瓶 :1移液管 :注射器 :金属丝离心机 :干燥器 。6 试样制备6 1 亡良GB54916.2 粒状样品:63 粉状样品 :混匀 ;如有适 当方法充分混匀 。7 分祈步骤7.1 称样根据试样 中硫胺素含量 ,按表15.7585.95.105115.125.135 14GB/T7628-2008单位为毫米当方法充分混匀 。或其他适当方法充分),再 用混样器或其他,置于100m L容量瓶中。尻m o .149m 幅(粉碎 ,过孔径叻 o表1 试样旦及样液体积试样 中硫胺素含量 (X)/(m g /k g )试样量()/g加人到离子交换柱 的样液体积(V)/m L收集洗脱液体积( )/m Lo 1 141 3- 3 83红 0 6 626 8 13 2113 4 22.0122.244 015衽4以上12硫胺紊标准工作液3GB/T7628-200872 提取加人0.1m l /L硫酸(415)50m L到容量瓶(7.D中,在 100电热恒温水浴 中加热10m i n ,并不时摇动容量瓶 ,以 防结块 。7.3 酶解冷却容量瓶(7,2)至40 以下 ,加人 5m L淀粉酶悬浮液(4.6),充分混匀 ,在 37 硐温度环境中至少放置4h ,冷却至室温 ,用水稀释定容至100m L,摇匀 ,将试液通过滤纸干过滤 ,弃去最初 的5m L滤液后再收集滤液于锥形瓶 中,作为样品提取液 。如提取液色泽浅 、 无干扰物质时 ,不需进行提纯步骤 ,按 7.6进行氧化操作 。测定结果按第8章的式 1)计箅 。7.4 净化7.4.1 当提取液色泽很深或含有干扰物质时 ,按 7.42、 7。 43、 7.4,姓的步骤净化 ,测 定结杲按第8章的式(2)计 算 。7.4.2 取适量玻璃棉置于吸附分离柱吸附管底部 ,然 后将05g 活性沸石 (4.7.D或制备好 的硅 酸盐离子交换树脂 (4.7,2)放人吸附管 ,在使用前用沸水充分洗涤吸附分离柱 。7.4.3 准确移取适量体积E见 表1(V)彐的样液 ,加人到已处理好 的吸附分离柱 中(吸 附剂应保持被沸水完全浸泡),用 5m L热水 (约 50 )洗 涤吸附分离柱 ,连续操作三次 ,弃 去洗出液 ,以 确保硫胺 素在柱上分配完全 。7.4.4 取适量煮沸的025g /m L氨化钾溶液(准 4),分 三次连续加人吸附分离柱 ,用 25m L具塞刻度玻璃试管收集洗脱液 ,收集的洗脱液体积匚 见表1(V2).冷却后用水稀释定容至 25m L,充分混匀 。7.5 外标溶液准确吸取25m L硫胺素标准工作液 ( 4123),重复7.1 73操作 ,作为外标溶液 。7.6 氧化分别准确移取5m L样液 (7.3)或洗脱液 (74.3)于两只具塞离心试管 中,编 为1号试管 和2号试管 。在1号具塞离心试管中,加人 3m L碱性铁氰化钾溶液(4.10),在2号具塞离心试管 中加人 3m Lo ,15g /m L氢氧化钠溶液(4.8),振摇约30s ;再分别准确加人15m L异丁醇(4.11),剧烈振摇1m i n 。将1号、2号具塞离心试管置于离心机 中以 1g OO r /m i n 的速度离心1m In 后,用注射器吸去水层 ,在异丁醇层 中加人1m L无水乙醇 ,混匀 。| 77 测定 7,7.1 调整荧光分光光度计用硫酸奎宁工作液(4,13.2)调整荧光分光光度计 ,使其处于正常工作状态 。7.7.2 浏定样液的荧光强度将10m L异丁醇层倒人 比色杯中,于激发波长365n m 、发射波长435n m 处测定硫胺素的荧光值 ,分别记录1号试管试液的荧光值R和2号试管试液空 白的荧光值R玷 。同时分别准确吸取5m L外标溶液(75)置人另两只具塞离心试管 中,编 为3号和4号 (作 为标准空 白),按 76操作后 ,测定3号试管的硫胺素标准工作溶液 ( 4123)的荧光值R每和4号试管 的硫胺素标准工作溶液空 白的荧光值Rb 。8 结果计箅未经过提纯 的试样 中维生素B1含量 (X1)按式 (1)计 箅 ,经过提纯 的试样 中维生紊Bl 含量 (X2)按式(2)计箅 :凡= 螂 “1 )4屁=(Rx -Rb )V蚝 cGB/T7628-2008 (2)(R,R山 V】 X式中:Xl 未经过提纯的试样中维生紊B!含量,单位为皂克每千克(m g /k g );X:经过提纯的试样中缑生素Bl 含量,单位为毫克每千克(m g /k g ),R:1号管试液的荧光值 ;R山2号管试液空白的荧光值,R:3号管硫胺素标准工作溶液的荧光值 ;R -4号管碗胺亲标准工作溶液空白的荧光值;Vl 分取过离子交换柱样液的体积,单位为毫升(m L),%收集洗脱液体积,单位为毫升 m L);试样质迳,革位为克(g );V薛解提取液的体积,单位为毫升(m L);c 硫胺素标准工