硕士学位论文-粉防己碱抗内毒素致炎症反应作用及机制研究.pdf

重庆医科大学硕士学位论文粉防己碱抗内毒素致炎症反应作用及机制研究申请学位级别：硕士专业：药理学20070501重庆医科大学硕士研究生学位论文英文缩写B C AC O X - 1C O X 2C O X 3E D T AE I AE L I S AE PF C SH C LI d 3I L 6I L l Oi N O SL B PL P SM L P KM O D SM O FM 田oM T TM y D 8 8N a O HN F r o bN ON S A J D sP B SP G E 2S I R SS T A T1 HT L R符号说明英文名称B i c i n c h o n i n i ea c i dC y c l o o x y g e n a s e - 1C y c l o o x y g e n a s e - 2C y c l o o x y g e n a s e - 3E t h y l e n ed i a m i n et e t r a a c e t i ca c i dE n z y m ei m m u n o a s s a yE n z y m e l i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a yE n d o g e n o u sp y r o g e nF e t a lc a l f s e r u mH y d r o c h l o r i ca c i dI n h i b i t o ro f N F ，d 3I n t e r l e u k i n - 6I n t e r l e u k i n - 1 0I n d u c i b l ei s o f o r m s o fn i t r i co x i d es y n t h a s eL i p o p o l y s a c c h a r i d eb i n dp r o t e i nL i p o p o l y s a c c h a r i d eM i t o g e n a c t i v a t e dp r o t e i nk i n a s eM u l t i p l eo r g a nd y s f u n c t i o ns y n d r o m e ，M u l t i p l eo r g a nf a i l u r eM y e l o p e r o x i d a s e3 - ( 4 ，5 一d i m e t h y l t h i a z o l - 2 - y 1 ) 一2 ，5 一d i ren y lt e r a z o l i u mb r o m i d eM y e t o i dd i f f e r e n t i a t i o nf a c t o r8 8S o d i u mh y d r o x i d eN u c l e a rf a c t o r - r J 3N i t r i eo x i d eN o n - s t e r o i d a la n t i i n f l a m m a t o r yd r u g sP h o s p h a t eb u f f e r e ds a l i n eP r o s t a g l a n d i nE 2S y s t e m i ci n f l a m m a t o r yr e s p o n s es y n d r o m eS i g n a lt r a n s d u c e ra n da c t i v a t o ro f t r a n s c r i p t i o nT e t r a n d r i n eT b Ul i k er e c e p t o r中文名称双喹啉一4 一羧酸环加氧酶1环加氧酶- 2环加氧酶3乙二胺四乙酸酶免疫分析法酶联免疫吸附实验内生致热原小牛血清盐酸N F r 3 3 抑制蛋白白介素6自介素1 0诱导性一氧化氮激酶脂多糖结合蛋白脂多糖促分裂原活化蛋白激酶多器官功能障碍综合征多器官衰竭髓过氧化物酶噻唑蓝髓样细胞分化因子8 8氢氧化钠核因子心一氧化氮非甾体类抗炎药磷酸盐缓冲液前列腺素E 2全身炎症反应综合征信号传导和转录活化子粉防己碱T o l l 样受体重庆医科大学硕士研究生学位论文T N F aT R A F 6T R A M1 1 5 u FT u m o rn e c r o s i sf a c t o r - aT N F - r e c e p t o ra s s o c i a t e df a c t o r6T R I F - r e l a t e da d a p t o rm o l e c u l eT o l V I L 1r e c e p t o r - c o n t a i n i n ga d a p t o rm o l e c u l e2肿瘤坏死因子一a肿瘤坏死因子受体相关因子6T R I F 相关接头蛋白分子T o l l I L 1 受体接头蛋白分子重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的馈究成果据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其征人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机禚的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任学位论文作者签名：学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学本人保证毕业高校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阿和借阅学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，可以采用影印，缩印或其他手段保存论文论文作者签名：指导教师签名：日粉防己碱抗内毒素所致炎症作用及机制研究摘要目的：通过建立L P S 致大鼠发热模型和L P S 致小鼠疼痛增敏模型I观察粉防己碱( T e t r a n d r i n e ，1 e t ) 减轻L P S 诱导的动物发热和痛觉曾敏作用及其机制；观察T e t 对L P S 诱导R A W 2 6 4 7 细胞炎症模型的抗炎作用，并探讨可能的抗炎机制。方法：1 L P S1 0 0 鹇k 9 1i p 建立大鼠发热模型，连续6 小时监测大鼠体温变化，观察T e t 相对于对乙酰氨基酚对L P S 致大鼠发热的解热作用；运用W e s t e m b l o t t i n g 技术检测肝脏及脑组织中环氧酶2( c y c l o o x y g e n a s e 一2 ，C O X - 2 ) 的表达；试剂盒检测肝脏中髓过氧化物酶( m y e l o p e r o x i d a s e ，M P O ) 、血液中前列腺素E 2 ( P r o s t a g l a n d i nE 2 ，P G E 2 ) 的含量。2 L P S1 0 0l x g k 分1i p 建立小鼠疼痛增敏模型，分别用热板法和醋酸扭体法观察T e t 相对于对乙酰氨基酚对疼痛增敏小鼠的镇痛作用；W e s t e m b l o t t i n g 技术检测小鼠脑组织环氧酶( c y c l o o x y g e n a s eC O X ) I 、C O X - 2 、C O X - 3 的表达；E L I S A 试剂盒检测血浆中自细胞介索( i n t e r l e u k i nI L ) 6 、I L 1 0 、a 一肿瘤坏死因子( 0 【一t u l n o u rn e c r o s i sf a c t o r 耵师口) 的含量。重庆医科大学硕士研究生学位论文3 L P S 陷m l d 刺激生长良好的R A W 2 6 4 7 巨噬细胞建立细胞炎症模型。不同剂量 l e t 干预后，N F r , BP 6 5 核转位试剂盒检测P 6 5 核转位情况；W e s t e m b l o t t i n g 技术检测细胞C O X 一2 、i N O S 的表达；E L I S A 试剂盒培养液中I L 6 、I L 1 0 、T N F n 和E I A 试剂盒检测P G E 2 的含量。结果：1 L P S1 0 0 嵋k 9 1 ，i p 后，大鼠体温升高，最高超过正常2 5 C ，并在L P S 作用后0 5 h 、3 h 、6 h 左右各出现一个发热峰，与文献报道一致，说明建模成功。对乙酰氨基酚处理组动物体温升高不明显。T e t 药物组不同程度降低L P S 所致发热反应，大剂量组体温降到正常以下。W e s t e r n b l o t t i n g 技术显示模型组肝脏和脑组织中C O X 一2 表达增加，同时肝脏中M P O 上调，血液中P G F a 升高。T e t 药物组动物肝脏及脑组织中C O X - 2 蛋白则被不同程度抑制，同时肝脏中M P O 的含量，血液中P G E 2 的水平也相应降低。2 L P S1 0 0 陷蚝di v 后，小鼠扭体反应次数明显增加，舔足时间提前，呈现出明显痛觉过敏表现。对乙酰氨基酚组可显著减少扭体反应次数和延长舔足时间。T e t 药物组不同程度抑制扭体反应次数，延长热板实验的舔足阈，表现出良好镇痛效应。W e s t e m b l o t t i n g 技术显示模型组脑组织中C O X 。2 、C O X 3 表达增加，C O X - 1 无变化，血浆I L 6 、I L 1 0 、T N F 俚上调；T e t 不同程度抑制C O X 3 表达，降低血浆I L 6 、T N F a ，增加也1 0 含量。3 L P Sl 嵋m l 。干预R A W 2 6 4 7 细胞后，激光共聚焦显微镜下观察结果显示，红染的N F r BP 6 5 亚基聚集于细胞核，使胞核红色荧光明4重庆医科大学硕士研究生学位论文显强于胞浆。同时细胞C O X - 2 、i N O S 蛋白表达增加，并伴有培养液中I L 一6 、T N F a 、I L 一1 0 、P G E 2 上调。T e t 药物组细胞胞核红染较弱，C O X 一2 、i N O S 表达不同程度下调，培养液中炎性细胞因子I L 一6 、T N F a 、P G 磅降低，抗炎细胞因子I L 1 0 增加。结论：本实验结果显示：( 1 ) T e t 具有解热作用，其机制可能与共抑制肝脏和脑组织中C O X 一2 的表达，降低肝脏组织M P O 的含量，抑制发热介质P G E 2 的表达有关；( 2 ) T e t 具有抗炎镇痛活性，其作用机制可能与其抑制中枢C O X 3 、血液中I L 一6 、T N F d 的产生，促进抗炎因子I L 1 0 的表达有关；( 3 ) T e t 可以抑制L P S 所致的R A W 2 6 4 7 巨噬细胞炎症反应，其抗炎机制与其抑制N F - r BP 6 5 核转位，下游炎性蛋白C O X - 2 、i N O S 的表达，和炎性细胞因子I L 一6 、T N F c 、P G E 2 的产生有关；另外T e t 还可促进抗炎细胞因子几1 0 的表达，这可能是其发挥抗炎作用的又一原因。关键词：粉防己碱，脂多糖，解热，镇痛，抗炎重庆医科大学硕士研究生学位论文S T U D Yo FT E T R A N D R I N EA G A I N S TI N F L A M M A T o R YR E S P o N S E SC A U S E DB YE N D o T o X I NA N DI T SM E C H A N I S MA B S T R A C To b j e c t i v e ：T oi n v e s t i g a t et h ee f f e c t so fT e to nL P S i n d u c e df e b r i si nS Dr a t s ，h y p e r a l g s i ai nK u n m i n gm i c e ，a n di n f l a m m a t o r yr e s p o n s ei nR A W 2 6 4 7c e l la n di t sp o s s i b l em e c h a n i s m s M e t h o d s ：I R a tf e b r i sm o d e lw a sc o n s t r u c t e db Yi n t e r a p e r i t o n e a li n j e c t i o nw i mL P S10 0P g k g B a s e do nc h a n g e so ft h ec o r eb o d yt e m p e r a t u r eo ft h ea n i m a l s ，t h ea n t i p y r e t i ca c t i o no f T e tW a so b s e r v e d ，c o m p a r e dw i t ht h a to fa c e t a m i n o p h e n W e s t e m b l o t t i n gt e c h n o l o g yw a sa p p l i e dt oa n a l y z et h ee x p r e s s i o no fc y c l o o x y g e n a s e 一2 ( C O X - 2 ) i nl i v e ra n db r a i nt i s s u e s ，a n ds p e c i a lk i t sw e r eu s e dt ot e s tt h el e v e l so fm y e l o p e r o x i d a s e ( M P O ) i nl i v e ra n dp r o s t a g l a n d i nE 2 ( P G E a ) i ns e r u m 2 M o u s eh y p e r a l g e s i am o d e lw a se s t a b l i s h e db yi n t e r a p e r i t o n e a li n j e c t i o nw i t hL P S10 0P g k g H o t - p l a t ea n dw r i 吐1 啦t e s t sw e r eu s e dt oe v a l u a t ea n a l g e s i ce f f e c t so fT e tc o m p a r i n gw i ma c e t a m i n o p h e n W e s t e r n b l o t t i n gt e c h n o l o g yW a sa p p l i e dt oa n a l y z et h ee x p r e s s i o no f C O X 一1 ，C O X 一2a n dC O X - 3i nb r a i n ，a n ds p e c i a lE L I S Ak i t sw e r eu s e dt od e t e r m i n et h el e v e l so f l L - 6 I L 一1 0 ，a n dT N F - ai ns e r u m 6重庆医科大学硕士研究生学位论文3 C e l li n f l a m m a t o r ym o d e lw a ss e tu pb yL P S ( 1嵋m l 1 ) s t i m u l a t i n gR A W2 6 4 7c e i l s P 6 5t r a n s l o c a t i o nk i tw a su s e dt ot e s te f f e c t so fT e to na c t i v a t i o no fN F 一1 ：w e s t e r n b l o t t i n gt e c h n o l o g yw a sa p p l i e dt oa n a l y z ei t si n f l u e n c e so ne x p r e s s i o n so fC O X 一2a n di N O S ；m o r e o v e rs p e c i a lE L I S Aa n dE I Ak i t sw e r eu s e dt ot e s ti t sc o n t r i b u t i o nt ot h el e v e l so f I L 6 ，I L 一1 0 ，T N F a ，a n dP G E 2i nc u l t u r em e d i a R e s u l t s ：1 T h a tc o r et e m p e r a t u r e so fr a t si n c r e a s e da p p a r e n t l ya f t e rL P Si n j e c t i o n ，a n dt h eh i g h e s to f w h i c hr e a c h e dt o2 5 6 Ca b o v en o r m a li n d i c a t e dt h a tt h er a tf e b f i sm o d e lW a ss u c c e s s f u l l yc o n s t r u c t e d M o r e o v e r ，t h r e ep e a k so ft e m p e r a t u r ec u r v ea p p e a r e da tt i m ep o i n t so f0 5 h ，3 h ，a n d6 h r e s p e c t i v e l y , w h i c hW a ss i m i l a rt ot h a to fp r e v i o u sr e p o r t s ，A tt h es a l r l et i m e ，n of e b r i l er e s p o n s e sw e r eo b s e r v e di na c e t a m i n o p h e n t r e a t e da n i l m a l s T e tt r e a t m e n td e c r e a s e dh i g hf e v e rc a u s e db yL P Si nd o s e d e p e n d e n tm a n n e r ，e v e nm a d et h et e m p e r a t u r el o wt ot h en o r m a ll e v e l C o r r e s p o n d i n g l y , C O X - 2p r o t e i nw a sh i g h l ye x p r e s s e di nl i v e ra n db r a i nt i s s u e so fm o d e lg r o u pw i t hh i g h l yi n c r e a s i n gP G F _ ，2a n dM P Ol e v e l si ns e r u l l lo rl i v e r O nt h ec o n t r a r y ，t h ev a r i o u sd e c r e a s e so fa l lt h e s ep r o - i n f l a m m a t o r ym o l e c u l e sw e r ef o u n di nT e t t r e a t e da n i m a l s 2 H y p e r a l g s i am o d e lo f m i c ew a se s t a b l i s h e d 、 ，i t hs h o r t e n e dl a t e n c yo fl i c k i n gh i n dp a w sa n di n c r e a s e dt h en u m b e ro fw r i t h i n gr e s p o n s ea f t e ri n j e c t i o no fL P S A c e t a m i n o p h e nt r e a t m e n ts h o w e da p p a r e n t l yp r o l o n g e d7重庆医科大学硕士研究生学位论文l a t e n c yo fl i c k i n gh i n dp a w sa n dd e c r e a s e dn u m b e r so fw r i t h i n gr e s p o n s e S i m i l a rr e s u l t st ot h a to fa c e t a m i n o p h e nw e r eo b t a i n e dw h e nv a r i o u sd o s e so fT e tw e r eu s e d ，a n di tc o u l dn o to n l yi n h i b i tL P S i n d u c e de x p r e s s i o no fC O X - 3i nb r a i n ，b u ta l s ol o w e rc o n t e n t so fI L 一6a n dT N F - q 。m e a n w h i l e ，i n c r e a s et h el e v e lo fI L - 10i ns e r u mi nL P S - t r e a t e dm i c ew i t h o u to b v i o u se x p r e s s i o nc h a n g e so f C O X 一1a n dC O X - 2 3 B e i n gs t i m u l a t e dw i t hL P S1 “g m l 一，R A W2 6 4 7c e l l sw e r eo b s e r v e du n d e rL A S E Rc o n f o c a lm i c r o s c o p y E r y t h r i n eP 6 5s u b u n i to fN F - r , Ba g g r e g a t e da tn u e e l u s e s ，w h i c hm a d eE r y t h r i n ef l u o r e s c e n c eo fn u c e l u s e sm u c hs t r o n g e rt h a nt h a to fe n d o c h y l e m a C o r r e s p o n d i n g l y ,C O X 一2 ，i N O Sw e r ei n d u c e da n dh i g h l ye x p r e s s e di nt h e s ec e l l s w i 廿lu p r e g u l a t e dl e v e l so f l L 一6 ，I L 一1 0 ，T N F a ，a n dP G F _ 2i ns u p e m a t e n t O nt h ec o n t r a r y , i nt h eT e t - t r e a t e dc e l l st h e r ew e r ew e a kE r y t h r i n ef l u o r e s c e n c ei nt h en u c e l u s e sw i t hd o w n r e g u l a t e de x p r e s s i o n so fC O X 一2 ，i N O S ，I L 一6 ，T N F a ，P G E 2a n du p r e g u l a t e de x p r e s s i o no f l L 一1 0 C o n c l u s i o n s ：A l lt h er e s u l t e si n d i c a t et h a t ：1 t e th a sa n t i p y r e t i ce f f e c t , I t sm e c h a n i s mm a yb er e l a t e dt oi n h i b i t i n gt h ee x p r e s so f C O X - 2i nl i v e ra n db r a i n ，l o w e r i n gt h ec o n t e n to f P G E 2i ns e r u m 2 t e ta l s oh a sa n a l g e s i ce f f e c t ，w h i c hm a c h a n i s mm a yb er e l a t e dt oi n h i b i t i n ge x p r e s so fC O X 一3i nb r a i n ，a n dd e c r e a s i n gg e n e r a t i o no fI L 一6a n dT N F 一伐a sw e l la sp r o m o t i n gl e v e lo fI L - l Oi ns e r u m 3 t e th a ss t r o n ga n t i i n f l a m m a t o r ye f f e c t w h i c hm a yb ei n v o l v e di ni n h i b i t i n gt r a n s l o c a t i o no f P 6 5s u b u n i to f N F 一心i n t ot h en u c l e u s 。R重庆医科大学硕士研究生学位论文d o w n r e g u l a f i n ge x p r e s s i o no fC O X 一2 ，i N O Sp r o t e i n s ，d e c r e a s i n gc o n t e n t so f I L 一6 ，P G E 2a n dT N F c 【a sw e l la si n c r e a s i n gl e v e lo f l L 一1 0 K e yw o r d s ：t e t r a n d r i n e ，l i p o p o l y s a c c h a r i d e ，a n t i p y r e s i s ，a n a l g e s i a ,a n t i i n f l a m m a t i o n9重庆医科大学硕士研究生学位论文粉防己碱抗内毒素所致炎症作用及机制研究前言革兰阴性细菌感染所致疾病是临床常见疾病，也是威胁人类健康的严重危险因素之一，尤其对于年老体弱患者，革兰阴性细菌所应起全身感染往往难于控制，严重时可引起全身炎症反应综合征( s y s t e m i ci n f l a m m a t o r yr e s p o n s es y n d r o m e 。S I R S ) ，甚至导致毒血症、感染性休克及多器官功能衰竭，危及生命。虽然近年来大量广谱、高效抗生素的应用为临床治疗感染性疾病提供了有力的措施，但并没有从根本上改变毒血症患者高病死率的现状。原因在于内毒素与机体相互作用引起全身失控性炎症反应，抗生素虽然能抑制和杀灭细菌，但却不能拮抗内毒素，而且可能在杀灭细菌的同时引起内毒素释放“】，此外，某些抗生素如头孢菌素类同时还抑制抗炎细胞因子I L 1 0 的表达，从而进一步加重炎症反应。】。内毒素( e n d o t o x i n ) 是革兰阴性细菌细胞壁外膜的结构成分之，是全身炎症反应综合征( S I R S ) 及脓毒症中重要的致病因子，其化学本质为脂多糖( 1 i p o p o l y s a c c h a r i d e ，L P S ) ，由亲水性的多糖( O - 特异性多糖、核心多糖) 及疏水性的类脂L i p i dA 组成。其中L i p i dA 由两个葡糖胺、磷酸盐和一定量的脂肪酸组成，为其活性中心。L P S 作为一种经典的病原体相关模式分子( p a t h o g e n - a s s o c i a t e dm o l e c u l a rp a t e m s ，P a M r , s ) 通过与之相应的模式识别受体( p a t t e r nr e c o g n i t i o nr e c e p t o r s , P R R 卜主要是T o l l 样受体( T o l l - l i k er e c e p t o r ，T L R ) 作用，然后与M y D 8 8分子结合，再与白介素1 ( I L 1 ) 受体相关激酶( 珉A K ) 结合，I R A K 磷酸化后结合T N F 受体相关因子6 ( T R A F 6 ) 后，并通过接转蛋白T A B 激活激酶1 ( 吖岖1 )作用于I r 3 3 和N F K B ，N F x B 的激活可促进早期相应基因的表达，产生一系列细胞因子及其它生物活性分子，引起一系列炎性事件啪。随着对L P S 致病作用机制研究的不断深入，已研制出一些拮抗内毒素的药物和针对L P S 信号通路中某些信号蛋白的特异性抗体，其中一部分已进入临床应用并取得一定效果，但对于L P S所致严重感染疗效仍然不够理想删。因此，研究L P S 所致炎症过程中，药物的抗炎机制，寻求有效的抗内毒素药物成为基础医学和临床医学领域的重要任务之一。发热和疼痛是内毒素诱导的常见临床表现。内毒素诱导机体，引起大量炎性1 0重庆医科大学硕士研究生学位论文细胞因子的释放，其中有些炎性细胞因子同时又是内生致热原和疼痛介质( 如I L 6 ，T N F - a ，P G E 2 ) ，可引起发热和疼痛反应。粉防己碱( t e t r a n d r i n e ，T e t ) 主要存在于防己科多年生木质藤本植物粉防己( S t e p h a n i a t e t r a n d r a S M o o r e ) 的根中，又名汉防己碱或汉防己甲索。为一双苄基异喹啉生物碱( 6 ，6 ，7 ，1 2 四甲氧基2 ，2 - 二甲基小檗胺) ，分子质量6 2 2 7 6 ，分子式C 3 8 H 4 2 0 6 N 2 ，是由两个苄基异喹啉亚单位通过两个分别以头头，尾尾相连通过醚健而形成的二聚体。在我国，粉防己根作为药物用于临床并有记载的，可追溯到东汉时期，始载于神农本草经，列为上品，具有祛风止痛、利水消肿作用。T e t 为粉防己中主要有效成分。现代药理研究表明，T e t 具有抗炎”1 、镇痛、降压叫、抗矽肺嘲、抗内风湿关节炎“”等作用，T e t 还是天然的非选择性的钙通道阻滞剂，又是钙调蛋白的拮抗剂“”，还有较强的抗肿瘤“”作用。临床上主要用于治疗高血压，矽肺等。目前国内外对T e t 的药理作用研究有大量的文献报道，其解热、镇痛方面报道不多，且机理不清楚。对于其在L P S 诱发的全身炎症反应动物的解熟镇痛作用，还未见报道。虽然T e t 的抗炎作用研究较为广泛而且深入，但其抗炎机制仍然不清楚。本课题首先用L P S 诱导建立大鼠发热模型和小鼠疼痛增敏模型，观察T e t 对发热和疼痛曾敏的作用及机制，从整体水平评价T e t 解热镇痛抗炎作用；然后再以L P S 诱导R A W 2 6 4 7 巨噬细胞建立细胞炎症模型，分析L P S 作用R A W 2 6 4 7 细胞后，T e t 对转录因子N F 诏，及其下游炎性蛋白C O X 2 、i N O S ，以及细胞因子I L 6 、I L - 1 0 、N O 、P G E 2 的影响，探求T e t 可能的抗炎机制。参考文献 1 】M o m m nD C ，B u c l d i nS E E v i d e n c ef o ra n t i b i o t i c - m e d i a t e de n d o t o x i nr e l e a s ea sac o n t r i b u t i n gf a c t o rt ol e t h a l i t yi ne x p e r i m e n t a lg r a m - n e g a t i v es e p s i s 阴S c a n dJI n f e c tD i sS u p p l 1 9 9 6 ，1 0 1 ：3 - 8【2 】Z i e g e l e rS ，R a d d a t zA ，H o f fG ，e t a 1 A n t i b i o t i c sm o d u l a t et h es t i m u l a t e dc y t o k i n er e s p o n s et oe n d o t o x i ni nah u m a ne xv i v o ，i nv i t r om o d e l 阴A c t aA n a e s t h e s i o lS c a n d 闭2 0 0 6 ，5 0 ( 9 ) ：11 0 3 - 1 0 3 】G r e g o r yM B a r t o n , R u s l a nM e d z h i t o v ，e ta 1 T o l l - l i k eR e c e p t e rS i g n a l i n g重庆医科大学硕士研究生学位论文p a t h w a y s J S c i e n c e 2 0 0 3 ，3 0 0 ：1 5 2 4 - 1 5 2 5【4 】M o t z k u sD ，S c h u l z - M a r o n d eS ，H e i t l a n dA ，e ta 1 T h en o v e lb e t a - d e f e n s i nD E F B l 2 3p r e v e n t sl i p o p o l y s a c c h a r i d e - m e d i a t e de f f e c t si nv i t r oa n di nv i v o 5 1 F A S E BJ 2 0 0 6 ，2 0 ( 1 0 ) ：1 7 0 1 2 5 】M o t o b uM ，A I T l e rS ，K o y a m aY ，e ta 1 P r o t e c t i v ee f f e c t so fs u g a rc a n ee x t r a c to ne n d o t o x i cs h o c ki nm i c e ：阴P h y t o t h e rR e s 2 0 0 6 ，2 0 ( 5 ) ：3 5 9 6 3【6 】P r i s t o v s e kP ，K i d r i cJ ，P e p t i d e sn e u t r a l i z i n gl i p o p o l y s a c e h a r i d e s t r u c t u r ea n df u n c t i o n 阴M i n iR e vM e dC h e m 2 0 0 1 ，1 ( 4 ) ：4 0 9 1 6 7 1C h o iH S ，K i mH S ，M i nK R e ta 1 A n t i - i n f l a m m a t o r ye f f e c t so ff a n g c h i n o l i n ea n dt e t r a n d r i n e J JE t l m o p h a r m a c 0 1 2 0 0 0 ，6 9 ：1 7 3 - 9 8 】Y uX C ，W uS ，C h e nC F ，e ta 1 A n t i h y p e r t e n s i v ea n da n t i - a r r h y t h m i ce f f e c t so fa ne x t r a c to fR a d i xS t e p h a n i a eT e t r a n d r a ei nt h er a t J JP h a r mP h a r m a c 0 1 2 0 0 4 ，5 6 ( 1 ) ：1 1 5 - 2 2 9 】P a n gL ，H o u l t 瓜C y t o t o x i c i t yt om a c r o p h a g e so ft e t r a n d r i n e ，a l la n t i s i l i c o s i sa l k a l o i d ，a c c o m p a n i e db ya no v e r p r o d u c t i o no fp r o s t a g l a n d i n s f 1 B i o c h e mP h a r m a c 0 1 1 9 9 7 ，5 3 ( 0 3 ：7 7 3 - 8 2 1 0 】H oL J ，L a iJ H C h i n e s eh e r b sa si m m u n o m o d u l a t o r sa n dp o t e n t i a ld i s e a s e m o d i f y i n ga n t i r h e u m a t i cd r u g si na u t o i m m u n ed i s o r d e r s f 1 C u r tD r u gM e t a b 2 0 0 4 ，5 ( 2 ) ：1 8 1 9 2 11 】W a n gG ，L e m o sJ R T e t r a n d r i n e ：an e w l i g a n dt ob l o c kv o l t a g e d e p e n d e n tC a 2 +a n dC a ( + ) - a c t i v a t e dK 十c h a n n e l s J L i f cS c i 1 9 9 5 ，5 6 ( 5 ) ：2 9 5 3 0 6【1 2 】W a n gB ，Y a n gL ，Y a aH L E f f e c to ft e t r a n d r i n eo nc a l c i u m - d e p e n d e n tt u r t l o u rn e c r o s i sf a c t o r - a l p h ap r o d u c t i o ni ng i l a - n e u r o n em i x e dc u l t u r e s J B a s i cC l i nP h a n n a c o lT o x i c o l 阴2 0 0 5 ，9 7 ( 4 ) ：2 4 4 - 8【1 3 C h i o uW F ，L e eW S ，Y e hP H T e t r a n d r i n es e l e c t i v e l yp r o t e c t sa g a i n s ta m y l o i d - b e t ap r o t e i n b u tn o ta g a i n s tM P T P - i n d u c e dc y t o t o x i c i t yi nS K - N - S Hn e u r o b l a s t o m ac e l l s J P l a n t aM e d 2 0 0 6 ，7 2 ( 1 4 ) ：1 3 0 0 - 4【1 4 C h e nY J P o t e n t i a lr o l eo ft e t r a n d r i n ei nc a t l c e rt h e r a p y J A c t aP h a r m a c o lS i n 2 0 0 2 ，2 3 ( 1 2 ) ：11 0 2 - 6 1 2重庆医科大学硕士研究生学位论文第一部分：粉防己碱对脂多糖致大鼠发热的解热作用及机制哺乳动物和人类的体温相对恒定，这主要依赖于体温调节中枢控制着产热和散热过程来维持的。革兰阴性细菌感染引起的发热反应主要由其细胞壁中内毒素( L P S ) 有关，后者作用于循环血液中单核细胞、淋巴细胞和组织中的巨噬细胞等，释放内生致热原( e n d o g e n o u sp y r o g e n ，E P ) ，包括I L 1 ，I L 6 ，I L 8 ，T N F a ，P G E 2等，其中P G E 2 是最强的E P 之一。这些E P 可以通过多种机制作用于下丘脑，引起体温调定点上移，使机体产热增加，散热减少，体温上升“3 。本实验通过腹腔注射L P S 建立大鼠发热模型，观察粉防己碱对内毒素所致发热的解热作用，并探讨其可能的解热机制。1 材料和方法1 1 材料1 1 1 动物清洁级雄性S p r a g u e D a w i e y ( S D ) 大鼠，1 8 0 2 2 0g ，1 0 周龄，重庆医科大学动物中心提供。( 合格证号：S Y X K ( 渝) 2 0 0 2 0 0 7 ) 。1 1 2 主要药品和试剂粉防己碱( 纯度 9 8 )M P O 试剂盒对乙酰氨基酚L P S 0 5 5 ：B 5 L 2 8 8 0P G E ：E I A 试剂盒苯甲基磺酰氟( P M S OS D S过硫酸铵T d s丙烯酰胺浙江金华制药厂南京建成生物制品公司( 批号：2 0 0 5 0 5 7 8 ) 中国上海集团化学试剂有限公司s i g m a 公司C a y m a n 化学公司G e n f i e w 公司S i g m a 分装，北方同科S i g m a 分装