中药含量测定技术.ppt

1,第四章-复习,杂质概念来源分类重金属概念检查原因检查方法干扰物排除最终产物砷盐检查原因药典收载方法检查中酸性SnCl2作用？,2,中药制剂含量测定技术,3,方法,化学方法*仪器分析方法,有效成分指标性成分毒性成分,分析成分,中药制剂含量测定技术,4,高效液相色谱法薄层扫描法可见-紫外分光光度法气相色谱法原子吸收分光光度法,方法,仪器分析方法,滴定法浸出物测定法重量法挥发油测定法总氮测定法,化学方法,5,仪器分析法之,紫外-可见分光光度法,6,A:吸光度K:吸收系数C:溶液浓度L:液层厚度,基本原理:Lamber-Beer定律,紫外-可见分光光度法,7,吸收系数两种表示法：摩尔吸收系数：一定，C=1mol/L，L=1cm时的吸光度百分含量吸收系数/比吸收系数一定，C=1g/100ml，L=1cm时的吸光度,紫外-可见分光光度法,*,8,紫外-可见分光光度法,吸收光谱（吸收曲线）：定性依据:吸收峰max吸收谷min肩峰sh定量依据:吸收峰max,9,光源,单色器,样品池,检测器,记录装置,紫外|可见分光光度计,数据处理,报告书,10,钨灯或卤钨灯：可见光源3501000nm氢灯或氘灯：紫外光源200360nm,吸收池：玻璃-能吸收UV光，仅适用于可见光区石英-不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）,光源,紫外-可见分光光度法,11,测定波长的选择：max吸光度读数范围的选择：A=0.30.7,UV吸光度测量的条件选择,样,参,调节光路,光学性质和厚度相同,样品池,样品溶液,，,参比池,空白溶液,样品池,参比池,配制样品的溶剂,空白溶液,A,T,A,+,=,=,+,%,100,0,12,样品A值,UV-标准曲线法,对照品溶液：一系列不同浓度的对照品溶液,相同条件下,A为纵坐标，C为横坐标,标准曲线（工作曲线）,样品的浓度和含量,一系列A值,13,标准曲线又称工作曲线。如吸光光度法，在绘制时，首先在一定条件下配制一系列具有不同已知浓度吸光物质的标准溶液，然后在确定的波长和光程等条件下，分别测量系列溶液的吸光度，绘制A-c曲线，从而得到一条通过原点的直线，即标准曲线。当需要对某未知液的浓度cx进行测定时，只需要在相同条件下测得未知液的吸光度Ax，就可由cx=Ax/b计算得出或直接在标准曲线上查得cx。在实际操作中，应注意调整cx的大小，使其对应的Ax处于标准曲线的直线范围（线性范围）之内。,UV-标准曲线法,14,UV-标准曲线法,标准曲线的直线部分所对应的被测物质浓度（或含量）的范围称为该方法的线性范围。,15,标准曲线是依据标准系列的浓度（或含量）和其相对应的相应信号测量值来绘制的。如浓度（或含量）分别为x1,x2xn，其相应信号(吸光度)的测量值分别为y1,y2yn，用简单的方法很难绘制出能准确反映y与x之间关系的标准曲线。通常，用“一元线性回归法”来给出y与x的关系式y=a+bx（1-1）式中其中式(1-1)称为一元线性回归方程，b称为回归系数，即回归直线的斜率，a为截距。,UV-标准曲线法,16,当两个变量之间直线关系不够严格，数据的偏离较严重时，虽然也可以求得一条回归线，但是，实际上只有当两个变量之间存在某种线性关系时，这条回归线才有意义。判断回归线是否有意义，可用相关系数r来检验。相关系数的定义式为：r值在-1.0000与+1.0000之间。相关系数的物理意义如下：（1）r=1时，y与x之间存在严格的线性关系，所有的yi值都在回归线上。（2）r=0时，y与x之间完全不存在线性关系。（3）0r1.5内标物为高纯度标准物质或含量已知物质,定量分析-内标法内标法是根据待测组分与内标物的峰面积比与其浓度比在一定浓度范围内呈线性关系，对组分进行定量分析，对照品溶液和供试品溶液中分别加入相同量的内标溶液，在相同条件下分别测定其中被测组分和内标物的色谱峰峰面积计算校正因子的计算含量计算,71,气相色谱法,检验依据（中国药典2010年版一部471页）【处方】川贝母流浸膏45ml桔梗45g枇杷叶300g薄荷脑0.34g川贝枇杷糖浆由川贝母流浸膏、桔梗、枇杷叶、薄荷脑四味中药制备而成。薄荷脑具局麻作用，有薄荷的特殊香气，味初灼热后清凉，可掩盖苦味；在乙醇、三氯甲烷、乙醚中极易溶解，在水中极微溶解。中国药典采用挥发油测定法（附录XD）试验，用环己烷为溶剂提取、气相色谱法测定薄荷脑含量。,72,气相色谱法-川贝枇杷糖浆中薄荷脑的测定,薄荷脑对照品气相色谱图,川贝枇杷糖浆气相色谱图,【含量测定】照气相色谱法（附录E）测定。色谱条件与系统适用性试验改性聚乙二醇毛细管柱（柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.25m）；柱温为110，分流进样，分流比为25:1，理论板数按萘峰计算应不低于5000。校正因子测定取萘适量，精密称定，加环己烷制成每1ml含15mg的溶液，作为内标溶液。另取薄荷脑对照品75mg，精密称定，置5ml量瓶中，加环己烷溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加环己烷至刻度，摇匀。吸取1l，注入气相色谱仪，计算校正因子。测定法精密量取本品50ml，加水250ml，照挥发油测定法（附录XD）试验，自测定器上端加水使充满刻度部分并溢流入烧瓶为止，加环己烷3ml，连接回流冷凝管，加热保持微沸4小时，放冷，将测定器中的液体移至分液漏斗中，冷凝管及挥发油测定管内壁用少量环己烷洗涤，并入分液漏斗中，分取环己烷液，水液再用环己烷提取2次，每次3ml，用铺有无水硫酸钠0.5g的漏斗滤过，合并环己烷液，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加环己烷至刻度，摇匀，即得。吸取1l，注入气相色谱仪，测定，即得。本品每1ml含薄荷脑（C10H20O）应不少于0.20mg。,73,气相色谱法-川贝枇杷糖浆中薄荷脑的测定,校正因子测定精密称定环己酮75.15mg，置5ml量瓶中，加无水乙醇适量溶解并稀释至刻度，作为内标溶液。另精密称取薄荷脑对照品73.26mg，置5ml量瓶中，加环己烷溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加环己烷至刻度，摇匀。吸取1l，注入气相色谱仪，计算校正因子。测定法精密量取本品50ml，加水250ml，照挥发油测定法（附录XD）试验，自测定器上端加水使充满刻度部分并溢流入烧瓶为止，加环己烷3ml，连接回流冷凝管，加热保持微沸4小时，放冷，将测定器中的液体移至分液漏斗中，冷凝管及挥发油测定管内壁用少量环己烷洗涤，并入分液漏斗中，分取环己烷液，水液再用环己烷提取2次，每次3ml，用铺有无水硫酸钠0.5g的漏斗滤过，合并环己烷液，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加环己烷至刻度，摇匀，即得。吸取1l，注入气相色谱仪，测定，即得。实验数据：m内为75.15mg、m对为73.26mg；A内=851302.0、A对=798023.5、=841603.2、A供=814180.5。,74,气相色谱法-川贝枇杷糖浆中薄荷脑的测定,75,气相色谱法-川贝枇杷糖浆中薄荷脑的测定,检验依据（中国药典2010年版一部1222页）【检查】乙醇量应为60%70%（附录M）测定:精密量取恒温至20的颠茄酊8ml和正丙醇5ml，置100ml容量瓶中，加纯化水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取恒温至20的无水乙醇5ml和正丙醇5ml，置100ml容量瓶中，加纯化水稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。取标准溶液和供试品溶液各2l，连续进样3次，测得校正因子（f）分别为0.6925、0.6921、0.6918。AX/AS分别为1.466、1.458、1.431。求出该供试品乙醇量及其相对标准偏差（RSD）。,76,气相色谱法-颠茄酊中乙醇量的检查,77,气相色谱法-颠茄酊中乙醇量的检查,78,气相色谱法,79,适用性,浸出物测定,有效成分不清楚的,无定量方法的,有效成分溶解性能,药用部位制剂处方,溶剂浸出物含量质量,测定方法水溶性浸出物测定法醇溶性浸出物测定法挥发性醚浸出物测定法前处理粉碎二号筛（水、醇）四号筛（醚）,80,浸出物测定,81,水溶性浸出物测定法,溶剂：水,水溶性成分,方法,冷浸法,热浸法,不含或少含淀粉、黏液质,浸出物测定,水溶性浸出物测定法冷浸法:取供试品约4g，称定重量，置250300ml的锥形瓶中，精密加入水100ml，塞紧，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时，用干燥滤器迅速滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20ml，置己干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴蒸干后，于105干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（%）热浸法:取供试品约24g，称定重量，置100250ml的锥形瓶中，精密加入水50100ml，塞紧，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过。弃去初滤液，精密量取续滤液25ml置干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（%）,82,浸出物测定,83,醇溶性浸出物测定法,醇溶性成分,溶剂,甲、乙醇,丁醇,含较多皂苷,方法同水溶性浸出物测定法,84,操作方法水溶液制剂：用饱和正丁醇提取，依法检查固体制剂：水溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取数次，合并提取液，照上述方法蒸干，干燥，称定浸出物重量，计算出制剂中正丁醇浸出物的含量（W/W%）儿康宁糖浆正丁醇浸出物的测定:精密量取本品20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，第1次30ml，以后每次20ml，合并正丁醇提取液，置已干燥至恒重的蒸发皿中，蒸干，置105干燥3小时,移置干燥器中、冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。本品含正丁醇提取物不得少于3.0,醇溶性浸出物测定法,85,醚溶性浸出物测定法,乙醚,溶剂,醚溶性成分挥发性成分,86,挥发油的测定,挥发油又称芳香油或精油，是广泛存在于植物中的一类可随水蒸气蒸馏得到的与水不相溶的油状液体的总称，内含有多种化学成分，组成复杂。中国药典中挥发油的测定系指采用水蒸气蒸馏法对药品中挥发油总量的测定。例如，正骨水、牡荆油胶丸、保妇康栓和满山红油滴丸中挥发油的测定测定原理：首先利用挥发油的挥发性用水蒸气蒸馏法将其提取完全；再利用其较强的亲脂性与水不相溶而分层，即可读测取油的总量并求算出含量,87,容量分析法,酸碱滴定法沉淀滴定法配位滴定法氧化还原滴定法适用范围生物碱的含量某些矿物药的含量,88,生物碱的含量测定,如果生物碱可溶于水或水-醇溶液中，且生物碱碱性较强，则可用强酸滴定液直接测定；如果生物碱在水中溶解度较小时，可先将其溶解在一定量过量的酸标准溶液中，再用强碱滴定液回滴剩余的酸，即用反滴定法测其含量。如北豆根片、止喘灵注射液及颠茄酊中总生物碱的含量测定均采用此法。对于某些不溶于水的生物碱或碱性比较弱（KC10-8）的生物碱也可采用非水酸