实验九人体X-染色质的观察.ppt

实验九人类X染色质的观察,哈尔滨师范大学生命科学与技术学院遗传学教研室2010年3月,一、实验目的,1.掌握观察与鉴别X染色质的简易方法；2.识别X染色质的形态特征及所在部位。,1.X-染色质的发现1949年M.L.Barr等研究发现：雌猫神经元细胞间期核内凝缩的深染小体。进一步发现：其它雌性哺乳动物（包括人类）也同样有这种结构。而且在其它细胞的间期核中也可以见到这一结构，称之为Barr小体（巴氏小体）。研究表明，巴氏小体是X染色体异固缩的结果，也称为X染色质或X小体，在细胞周期中比有活性的X染色体复制稍晚。,二、实验原理,2.莱昂氏假说(Lyonhypothesis),1961年M.F.Lyon提出：正常雌性哺乳动物体细胞中的两条X染色体之一在遗传性状表达上是失活的；在同一个体的不同细胞中，X染色体失活是随机而恒定的；失活现象发生在胚胎发育的早期。,3.剂量补偿效应(dosagecompensation),由于雌性体细胞中的两个X染色体中的一个发生异固缩（也称为Lyon化现象），失去活性，这样保证了雌雄两性体细胞中都只有一条X染色体保持转录活性，使两性X连锁基因产物的量保持在相同水平上，这种效应称为X染色体的剂量补偿。Barr小体的数目X染色体数目1,4.莱昂氏假说的修正（新莱昂氏假说）,（1）提出：1967年，美国的遗传学家Ohno提出45，X46，XX；47XXY46，XY，这两个不等式是否成立的疑问。（2）按照莱昂假说应该是两者完全相同，但45，X与47，XXY实际是两种综合症。（3）修正：1974年，失活的X染色体上并非全部基因都呈莱昂化失活。,5.X染色质检查的应用,X染色质检查广泛应用于临床，作为性别鉴定和性染色体异常的一种辅助诊断方法。例如：克氏综合症（XXY）、特纳氏综合征（XO）、其它性染色体异常的患者如XXX，XXYY等。,三、实验材料、器具和药品,材料：女性口腔黏膜细胞、发根细胞。器具：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌牙签等。药品：60%醋酸、45%的醋酸、石炭酸品红。,四、实验方法,1.口腔黏膜细胞X染色质（Barr小体）显示方法取材：漱口34次后，用无菌牙签从面颊部内侧刮取口腔黏膜细胞，第一次的刮取物弃去，在原位重复刮23下，涂在载玻片上；固定：加一滴60%醋酸固定5min，用滤纸吸去多余醋酸；染色：加一滴石炭酸品红染色2min；制片：盖上盖片，垫上滤纸用拇指压片；镜检：低倍高倍。,2.发根毛囊细胞的X染色质（Barr小体）显示方法取材：拔取女性带毛囊细胞的头发，置于载玻片上；固定：在毛囊上滴加一滴45%的醋酸（或5mol/L盐酸）固定5min，吸掉多余的醋酸；染色：用镊子将软化的毛囊剥下，加一滴石炭酸品红染色23min；制片：盖上盖片，垫上滤纸用拇指压片；镜检：低倍高倍。,X染色质的辨别：,（1）低倍镜下检出典型的可数细胞，标准是：核质呈网状或细颗粒状分布核膜清晰，核无缺损染色适度周围无杂菌在高倍镜下进一步观察。,五、观察结果,X染色质是一结构致密的浓染小体，轮廓清楚，大小11.5m；形态：微凸形、三角形、卵形、短棒形等，常附于核膜边缘或靠近内侧。,（2）高倍镜下观察X染色质的形态特征及所在部位：,箭头所示为巴氏小体（女性细胞左中存在，男性细胞右中没有）,从理论上讲，正常女性的间期细胞中都应该有一个X染色质，但事实上由于个体的生理状态、染色方法、染色技术以及X染色质在细胞核中的位置不同，实际检查中不可能在每个细胞中都看到。正常女性间期细胞核中X染色质阳性率一般约为1030%，有的可高