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文档简介

第4章中药安全性质量控制技术研究及应用实例,关于中药有毒、无毒的现代认识,一、毒的涵义在本草中是一个广义的概念,有毒无毒是指药物对人体有无毒性而言。周礼谓:“聚毒药以共医事”,这里的毒药为中药的总称。明代张景岳认为:“药以治病,因毒为能,所谓毒者,因气味之偏也”。,中药毒性的含义:毒性即为偏性(药性)以偏纠偏是中药治疗疾病的基本原则用之得当即可发挥治疗作用用之不当则可毒害机体,两种误解,正确理解,中药安全无毒,无不良反应,中药有毒,全面禁用,中药西药都有不良反应,利大于弊者,应用,弊大于利者,禁用,二、中药安全性的观点,国家食品药品监督管理局公布2009年全国不良反应/事件报告638996例。,1、不良反应病例中:,化学药占86.7%,涉及3100多个品种。,中药占13.3%,涉及2600多个品种,化学药不良反应中,注射剂占61%。,中药不良反应中,注射剂占52%。,2、说明:化学药(西药)的不良反应超过中药。注射剂的不良反应超过口服药西药注射剂的不良反应超过中药注射剂,例1反应停,不良反应近10000例(海豹儿)死亡近5000例,三、举例说明,例22007年美国FDA对十大药品发出最严重的“黑框警告”,小柴胡汤“肺炎”马兜铃酸“肾衰”鱼腥草注射剂“过敏性休克”双黄连注射液“中毒死亡”活血破血中药脏器出血临床严重毒性报道频频,中药不良反应事件,关于中药毒性的热点问题,“马兜铃”的震撼“小柴胡汤”事件的反思“鱼腥草注射液”的风波,“马兜铃”的震撼,1993年比利时学者首先发现2例女性服中草药减肥治疗后,出现进行性肾间质纤维化,经调查发现该减肥药中加入了防己,患者服用后血肌酐于3个月内升高一倍,肾活检显示广泛间质纤维化。经药物成分分析发现,减肥胶囊中含有马兜铃酸。至1998年在比利时有100人患马兜铃酸肾病。,“马兜铃”的震撼,比利时学者报告了服用含有马兜铃酸的中草药致急进性肾功能衰竭,并称这种肾脏损害为“中草药肾病(ChineseHerbNephropathy,CHN)”。此后,有关马兜铃酸引起肾脏损害的问题,引起了国内外学者的广泛关注并陆续发表有关研究报告。,“马兜铃”的震撼,国内学者认为,不宜笼统地将马兜铃类植物引起的肾脏损害称作“中草药肾病”。马兜铃酸(aristolochicacid,AA)是引起CHN的一类药物的主要毒性成分之一,故称为“马兜铃酸肾病”(AAN)较为合适,目前国外学者也应用了这一病名。,“马兜铃”的连锁反应,中药马兜铃是马兜铃科多年生植物马兜铃的成熟果实。苦、微辛,寒,归肺、大肠经。清肺化痰,止咳平喘。用量不宜过大,以免引起呕吐。,中药马兜铃,“马兜铃”的连锁反应,AA是马兜铃科马兜铃属植物中所含的共同成分,含有或可能含有马兜铃酸的常用中药品种为马兜铃、天仙藤、青木香、广防己、关木通、寻骨风、朱砂莲、细辛等。,“马兜铃”的连锁反应,含马兜铃酸的常见中成药有:龙胆泻肝丸、耳聋丸、八正丸、纯阳正气丸、大黄清胃丸、当归四逆丸、导赤散、甘露消毒丹、排石颗粒、跌打丸、妇科分清丸、冠心苏合丸、苏合丸、辛荑丸、十香返生丸、济生桔核丸、止嗽化痰丸等。,“马兜铃”的连锁反应,我国发生了龙胆泻肝丸的“马兜铃酸事件”原因是用关木通替代木通2003年2月28日国家药品监管局发出关于加强对龙胆泻肝丸监督管理的通知,木通为木通科植物三叶木通Akebiatrifoliata(Thunb.)Koidz.的木质茎藤。功效:泻火行水通血脉。,关木通为马兜铃科植物东北马兜铃AristolochiamandshuriensisKom.的茎藤。功效:清心火,利小便,通经下乳。,“马兜铃”的连锁反应,2002年6月,美国食品药品管理局宣布禁售70多种含马兜铃酸的中成药。香港卫生署发言人宣布:将从2004年6月1日起,停止进口和销售含有马兜铃酸的中药材及其制剂。欧盟、澳洲等国也禁止含马兜铃的中药材及中成药进口。,“小柴胡汤”事件,“小柴胡汤”事件,小柴胡汤出自张仲景伤寒论组方:柴胡、人参、黄芩、大枣、半夏、生姜、甘草,共七味药功效:疏畅气机、调和胃肠、和解表里主治:伤寒少阳证。往来寒热、胸胁苦满,苔白,脉弦,“小柴胡汤”事件,常用于感冒、慢性肝炎、肝硬化、急慢性胆囊炎、胆结石、急性胰腺炎、胸膜炎、淋巴腺炎、胃炎、胃溃疡等国内外研究证明,小柴胡汤对肝癌、肺癌、结肠癌等肿瘤,预防其恶性转化具有一定作用,“小柴胡汤”曾风靡日本,20世纪70年代初期,日本的津村顺天堂制成了小柴胡汤颗粒制剂。1976年,日本京畿大学东洋医学研究所主任有地滋教授通过年研究,在和汉药研讨会上发表了“津村小柴胡汤颗粒对慢性肝炎有治疗效果”的报告,在日本引起不同凡响。,“小柴胡汤”曾风靡日本,此后有21家汉方厂家加入生产开发小柴胡汤行列,对小柴胡汤进行多方面的研究,呈现了空前的小柴胡汤热。20世纪70-90年代小柴胡汤在日本是使用最多的药物,广泛地应用于治疗慢性肝炎。估计每年服用小柴胡汤者有100万人,消费金额约90亿130亿日元。,“小柴胡汤”事件,1989年12月日本胸部疾患学会杂志首次报道了小柴胡汤引起药物性肺炎例,之后其他报刊也陆续刊登了小柴胡汤引起肝功损伤之类的报道,对间质性肺炎尤为重视。至1999年底,因服小柴胡汤造成间质性肺炎已升为188例,死亡22例。,“小柴胡汤”事件,1996年3月,日本厚生省在“紧急安全情报”中发出了“关于小柴胡汤严重的副作用间质性肺炎的警告”。日本厚生省2000年1月14日发出“医药品医疗用具等安全性情报”通令:全面禁止肝炎、肝硬化、肝癌患者使用小柴胡汤。,“小柴胡汤”事件的反思,药方无错辨证有误。滥用小柴胡汤是造成悲剧的主因。中医治病强调辨证论治。不根据症状反应使用小柴胡汤,又长期服用一个方药,脱离了中医辨证论治理论。,“小柴胡汤”事件的反思,中药必须在中医理论指导下应用。日本的“小柴胡汤副作用死亡事件”实质,是违反了中医辨证论治的原则,违反了中医治病必辨方证的原则。,“鱼腥草注射液”风波,目前上市的含鱼腥草的注射剂,鱼腥草注射液新鱼腥草素钠氯化钠注射液新鱼腥草素钠注射液注射用新鱼腥草素钠复方蒲公英注射液炎毒清注射液鱼金注射液目前在我国有100多家生产企业生产这类产品临床使用主要是抗感染治疗,鱼腥草注射液不良反应,鱼腥草注射液等7个注射剂在临床应用中出现了过敏性休克、全身过敏反应、胸闷、心急、呼吸困难和重症药疹等严重不良反应,甚至有引起死亡病例报告。,鱼腥草注射液不良反应,从目前收到的病例报告和文献资料分析表明,含鱼腥草的注射剂与其所引起的过敏性不良反应,存在较明确的关联性。过敏性休克的病例报告来源和涉及企业、批号无明显集中现象,说明过敏反应可能是该类品种的共性问题。,2006年6月6日,国家食品药品监管局发出的关于暂停使用和审批鱼腥草注射液等7个注射剂的通告2006年9月:国家药监局发出关于肌注用鱼腥草注射液等注射剂恢复使用申报资料和程序的通知(急件)(国食药监办2006461号),常见中药中毒原因1.剂量过大或长期持续服用。2.用法不当,没有按中药的正确用法使用。3.炮制不充分,有毒成分含量过高。4.患者不遵医嘱,自行服药。5.中药品种混乱、有毒药物管理不善。,四、中药中的有害物质(一)外源性污染:包括重金属和农药残留;(二)内源性毒性物质:一般是指中药自身的一些毒性次生代谢产物。,(一)中药材中重金属元素含量测定技术中国药典2010年版(一部)要求,在中药中通常监控的有害重金属主要包括铅、镉、汞、铜、砷等。1.前处理方法1.1湿法消解所谓湿法,是指借助化学反应使固体试样转化为溶液的分解方法。通常是采用单一或混合强酸,在适当的温度下,将样品中的有机成分氧化破坏,使金属化合物转变为离子状态。,1.2干法消解(灰化法)该法是通过高温方法将试样中的重金属元素游离。一般是将样品先于小火炭化至无烟,再移入马弗炉中高温灰化完全,冷却,用稀酸溶解灰分,定量转移至量瓶中。,1.3压力消解罐消解法(高压密封溶样法)样品仍采用强酸消解,与湿法消解不同的是样品要置于聚四氟乙烯罐内密封,置于烘箱内在一定温度下保持一定时间。,1.4微波消解法将样品和相应的试剂放置于高温,高压密闭样品罐或敞口容器中。利用微波加热容器中的消解液,使各样品快速溶解的湿法消化。,2.测定方法2.1原子吸收光谱法(AAS)该法已被中国药典2010年版收载为测定中药材中重金属的法定方法之一。根据各种元素的性质及原子化的方法不同,该法又可分为火焰原子化法、非火焰原子化法和低温原子化法。(1)火焰原子化法:该法是利用化学火焰使物质分解并原子化的方法。可用于铜、铁、锌、锰、钙等常量元素的检测,缺点是原子化效率不高,火焰中自由原子浓度很低,灵敏度低。,(2)非火焰原子化法该法是利用石墨管高温下使样品原子化通过炉内光路产生吸收的原理来测定的。与火焰原子化法相比,石墨炉原子化法样品消耗少,特别适用于分析非常少量的试样,灵敏度高;缺点是石墨管昂贵,不能同时测定多个元素。该法可用于除汞以外的重金属元素测定。,(3)低温原子化法该法是利用化学反应方法预处理试样,在室温至摄氏几百度的条件下使其原子化,因此又称为化学原子化法。冷原子化法:该法专用于汞元素的测定。将样品消解后还原生成汞,在汞蒸气发生器中,用载气将汞蒸气吹出,通过石英吸收池的汞蒸气对汞空心阴极灯的辐射产生吸收,从而进行定量分析。氢化物原子化法:一般用于铅、砷、汞等元素的测定。将气态分析物引入石英炉内在较低温度下实现原子化的一种方法。它主要是与蒸气发生法配合使用。,2.2原子荧光光谱法(AFS)原子荧光光谱是介于原子发射光谱和原子吸收光谱之间的光谱分析技术。它的基本原理是基态原子(一般蒸汽状态)吸收合适的特定频率的辐射而被激发至高能态,而后激发过程中以光辐射的形式发射出特征波长的荧光,通过测定原子荧光的强度即可求得样品中该待测元素的含量。,2.3电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)本法为中国药典2010年版附录新收载的方法。基本原理是样品由载气引入雾化系统进行雾化后,以气溶胶形式进入等离子体的中心通道,在高温和惰性气氛中被充分蒸发、原子化、电离和激发,使所含元素发射各自的特征谱线。根据各元素特征谱线的存在与否,鉴别样品中是否含有某种元素(定性分析);由特征谱线的强度测定样品中相应元素的含量(定量分析)。,2.4电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)与ICP-AES相比,该法最大的优点是检出限极低,达到了pg.ml-1级的水平。其次分析精密度高、分析速度快、可同时测定含量差别较大的各组分,可用于绝大多数重金属元素的定性分析和定量分析,同时进行多种元素及同位素的测定,是目前痕量元素分析领域中最先进的方法。,2.5其他方法(1)比色法:主要用于重金属总量和总砷的测定。(2)紫外分光光度法:该法是利用重金属元素与试剂反应后显色,在紫外光下有吸收的原理来测定重金属的含量。多用于铅、汞的测定。(3)高效液相色谱法(4)极谱法(5)免疫学方法(6)激光诱导击穿光谱法,第二节中药中农药残留测定技术,一.前处理技术中药材的提取与净化:目的是将中药材中残留的微量农药残留物提取出来,又不能引入新的溶剂污染。实际上是分离与净化技术的综合应用。1.超临界流体萃取技术(SFE)超临界流体,是指温度和压力处于临界温度和临界压力之上的流体。常用的萃取剂是二氧化碳,适宜非极性和极性较小的物质的提取。若要提取极性大的成分,可以加入适宜的夹带剂(如甲醇、乙醇和水等)。,2.固相萃取(SPE)和固相微萃取技术(SPME)固相萃取:是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附,使其与样品的基体和干扰化合物分离,然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附,达到分离和富集目标化合物的目的。,固相微萃取法:根据吸附-解吸原理,在进样器的针头部分涂一层固定液或键合一层固定相,直接将其插入液体样品或样品的顶空,萃取、浓缩有机化合物后,将进样器直接插入GC进样口加热,使被测物质进入分析器进行测定。主要和气相色谱以及液相色谱联用。,3.加速溶剂萃取(ASE)加速溶剂萃取是在较高的温度(50200)和压力(10003000psi或10.320.6MPa)下用溶剂萃取固体或半固体样品的新颖样品前处理方法。优点:有机溶剂用量少,10g样品一般仅需15ml溶剂;快速,完成一次萃取全过程的时间一般仅需15min;基体影响小;萃取效率高,选择性好,已进入美国EPA标准方法;且使用方便、安全性好,自动化程度高。,4.凝胶渗透色谱(GPC)凝胶渗透色谱基于体积排阻的分离机制,是利用有机溶剂和疏水凝胶大分子从样品中提取分离不同分子量干扰物的一种常用有效分离技术。被测量的高聚物溶液通过一根内装不同孔径的色谱柱,柱中可供分子通行的路径有粒子间的间隙(较大)和粒子内的通孔(较小)。当聚合物溶液流经色谱柱时,较大的分子被排除在粒子的小孔之外,只能从粒子间的间隙通过,速率较快;而较小的分子可以进入粒子中的小孔,通过的速率要慢得多。经过一定长度的色谱柱,分子根据相对分子质量被分开,相对分子质量大的在前面(即淋洗时间短),相对分子质量小的在后面(即淋洗时间长)。,二、定量技术气相色谱法定义:以惰性气体为流动相,以固定液或固体吸附剂作为固定相的色谱法称为气相色谱法。以固定液作为固定相的色谱称为气液色谱,以固体吸附剂作为固定相的色谱称为气固色谱。原理:使混合物中各组分在两相间进行分配,其中一相是不动的(固定相),另一相(流动相)携带混合物流过此固定相,与固定相发生作用,在同一推动力下,不同组分在固定相中滞留的时间不同,依次从固定相中流出。通常采用的检测器有:热导检测器,火焰离子化检测器,氦离子化检测器,超声波检测器,光离子化检测器,电子捕获检测器,火焰光度检测器,电化学检测器,质谱检测器等。,中国药典2010年版一部附录收载气相色谱法用来测定农药残留量,包含了3中有机氯类、12种有机磷类和3种拟除虫菊酯类农药。,定量分析与方法学验证,生药中化学成分的定量分析是评价生药质量的重要手段。常用:分光光度法和色谱法。用于生药定量分析的方法必须进行验证,以证明采用的含量测定符合相应的分析要求。验证内容:准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。,(一)准确度指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度,一般用回收率表示。应在规定的范围内测试。测定方法的准确度用已知纯度的对照品做加样回收率测定,加入对照品的量要适当对照品的加入量与供试品中已知含有量之和必须在标准曲线线性范围之内。数据要求同一浓度供试品溶液,6个测定结果或3不同浓度分别制备3份不同溶液。一般中间浓度为所取供试品含量的100%水平,80%120%,(二)精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。重复性(批内精密度)系指同一分析人员在同一条件下对同一批样品至少制备6份以上或3个不同浓度分别制备3粉供试品溶液(9份),进行测定,计算相对标准偏差(RSD),RSD值一般要求不大于5。中间精密度系指在同一个实验室,在不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度。考察随机变动因素对精密度的影响。,3.重现性系指在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度。(三)专属性又称为选择性。通常以不含被测成分的供试品作为空白样品进行试验来说明。(四)检测限供试品中被测成分能被检出的最低浓度或最小量,无需准备定量。,(五)定量限指供试品中被测成分能被定量测定的最低量,反应分析方法是否具备灵敏的定量检测能力。(六)线性范围(八)耐用性系指在测定条件有小的变动时,测定结果不受影响的承受程度。,二、定量技术2.高效液相色谱法(HPLC)定义:高效液相色谱是以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。特点:高压、高效、高速。尤其适合于高沸点、受热不稳定易分解的农药残留检测,如取代脲、氨基甲酸酯、黄酰脲类农药。,2019/11/20,根据流动相和固定相的相对极性的不同可以将HPLC分为2种类型,即正相和反相色谱。在正相液相色谱中,流动相的极性小,通常为非极性的烷烃,固定相的极性大,通常为硅胶、纤维素等;在反相液相色谱中,流动相的极性大,通常为水一甲醇溶液、水一乙氰溶液等,固定相通常为键合的C18、C4等,极性较弱。反相液相色谱的应用相对广泛。,2019/11/20,液相色谱的定性依据是保留时间的相对性,通常相对误差不能大于5。定量参数常常采用峰高、峰面积、相对峰高、相对峰面积等。定量方法通常采用外标法、内标法和面积归一化法。外标法可分为外标一点法、标准曲线法等。,2019/11/20,l、外标一点法(直接比较法)用与样品类似的浓度的标准溶液,等量进样,比较它们的峰高或峰面积。Cx一未知样浓度Cd标样浓度Ax未知样峰面积A标样峰面积,2019/11/20,2、外标法(工作曲线法)Cx一未知样浓度Ax未知样峰面积Kx一直接斜率,(1)柱切换高效液相色谱技术柱切换技术是指用阀来改变流动相走向和流动相系统,从而使洗脱液在一特定时间内从预处理柱进入到分析柱的在线固相分离技术。优点:提高色谱系统的分辨率和选择性;使待测组分富集,提高灵敏度;在一个网络系统中实现多个分离目标;在线衍生化,提高灵敏度和重现性;在线净化样品,样本不需预处理或预处理大大简化,可直接进样分析。,(2)高效液相色谱柱后衍生荧光法该方法主要是针对氨基甲酸酯类农药。衍生化是药物分析中常用的一种分析手段。其原理是待测样品与衍生化试剂定量快速反应,并加入特定的功能的基团生成符合检测要求的衍生化物,通过检测生成衍生化物的量间接测定待测样品的量。,通过合适的化学反应,生成特殊衍生化物,1.改变待测物的色谱保留特性以改善分离度;2.改变待测物的检测特性,以增加其对检测器的响应(例:紫外标记、荧光标记、电化学标记);3.生成稳定的衍生化物,改善待测物的不稳定性(例:-SH基团易氧化的问题可通过酰化来解决)。,化学衍生化的目的:,HPLC化学衍生化分类在线化学衍生化是否与HPLC系统联机离线化学衍生化柱前衍生化发生衍生化发应的先后柱后衍生化,柱前衍生化在色谱分离前,预先将样品制成适当的衍生物,然后再进入色谱柱进行分离检测。优点:(1)对用作流动相的溶剂体系没有限制;(2)反应条件,反应速率不受限制;(3)通过选择合适的试剂以及萃取方法,可以消除许多干扰;(4)过量溶剂、试剂容易除去;(5)转变成合适的衍生物,可使分离度改进。,缺点:(1)操作过程繁琐,容易影响定量准确性。(2)当一个复杂组分样品经过衍生化反应后,有可能产生多种衍生化产物给色谱分离带来困难。,柱后衍生化,将样品先注入色谱柱,按选定的色谱条件使样品组分得以分离,当各个组分从色谱柱流出后,分别与衍生化试剂相遇,在一定的反应条件下,生成具有某种检测特性的衍生化产物再进入检测器。,要求:(1)对流动相的选择更严格,必须考虑衍生化试剂、反应产物的溶解度,以及它们与流动相可能发生的副反应;(2)由于在高效液相色谱中采用高流速,因此反应速率必须很快(小于30s);(3)检测器对衍生化试剂不能有响应。,柱后衍生流程图如下:,泵,进样阀,色谱柱,衍生化试剂泵,反应器,检测器,记录仪,紫外衍生化荧光衍生化电化学衍生化手性衍生化固定化酶反应器(IMER),衍生化反应类别:,荧光衍生反应在液相色谱法中,荧光检测器是一种高灵敏度、高选择性的检测器

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