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柴胡有效成分研究及注射液研制班级：药剂二班 姓名：刘佳 学号：1046030202一、柴胡药理研究 1.对中枢神经系统的作用： 1.1 抗惊厥作用： 小鼠（10只）灌胃柴胡煎剂20g（相当生药）/kg，l小时后皮下注射不同剂量的咖啡因，与对照组相比，15分钟内各组发生惊厥的动物数，求出用药组与对照组的半数有效量分别为350（385.O-318.2）mg/kg和250（302.5-206.6）mg/kg，表明柴胡煎剂对小鼠咖啡因惊厥有对抗作用。 1.2 解热镇痛作用： 给大鼠（每组6只）腹腔注射北柴胡油300mg/kg（1/4半数致死量），北柴胡总皂甙 380和635mg/kg（1/5和1/3半数致死量）。结果表明，在注射酵母后5-8小时内均有明显的解热作用。采用电击鼠尾法，北柴胡总皂甙478mg/kg（1/4半数致死量）有明显的镇痛作用。小鼠灌胃柴胡煎剂10g（相当生药）/kg亦具有镇痛作用，其镇痛作用可破阿托品灌胃25mg/kg或纳络酮皮下注射0.26mg/kg部分拮抗。 1.3 镇静作用： 柴胡制剂和柴胡总皂甙均有明显镇静作用，小鼠口服粗柴胡皂甙200-800mg/kg即可出现镇静作用。在小鼠攀登试验中，粗柴胡皂甙有与眠尔通相似的镇静作用，口服的运动半数抑制剂量（CD50）为347mg/kg。粗皂甙对大鼠的条件性回避、逃避反应均有明显的抑制。小鼠口服柴胡总皂甙500mg/kg能延长环己巴比妥钠的睡眠时间。 1.4 抗炎作用： 大鼠肌肉注射50mg/kg、25mg/kg2%柴胡总皂甙水溶液，能明显抑制由右旋糖酐（6%溶液0.1ml/只）引起的足浮肿，抑制作用与剂量相关，大鼠去两侧肾上腺后抑制作用明显减弱。小鼠腹腔注射l00mg/kg总皂甙的2%水溶液和0.6%醋酸0.2ml/只，对醋酸引起的小鼠腹腔液的渗出有明显的抑制作用。柴胡总皂甙和挥发油腹腔注射对角叉菜胶所致大鼠足肿均有明显的抑制作用。粗柴胡皂甙口服600mg还能抑制5-羟色胺和巴豆油引起的小鼠足肿。粗柴胡皂甙对醋酸、组胺和5-羟色胺引起的血管通透性增加具有抑制作用。柴胡皂甙a和d肌肉注射或口服均有抗渗出和抗肉芽肿作用。柴胡皂甙a和d 腹腔注射后，大鼠血浆皮质酮大量增加，其肾上腺重量也有不同程度增加，可能抗炎作用与刺激肾上腺，促进肾上腺皮质系统有关。 2.对心血管系统的影响：北柴胡醇浸出液能使麻醉兔血压轻度下降。柴胡总皂甙对犬能引起短暂的降压反应，心率减慢；对兔亦有降压作用。离体蛙心及豚鼠离体心耳试验可见柴胡总皂甙1-210（-4）浓度有抑制心肌作用。粗皂甙有明显的溶血作用。柴胡皂甙的溶血作用强度为柴胡皂甙d ac，但其溶血作用可被腺嘌呤、肌酐所抑制。犬静脉注射粗皂甙5mg/kg时，可出现暂时性的血压下降及心率减少。柴胡地上部分含有6-8%类黄酮，具有增强毛细血管作用。 3.对消化系统的作用： 3.1 对肝脏的作用： 柴胡的水浸剂与煎剂（1：20）均能使犬的总胆汁排出量与胆盐成分增加。粗柴胡皂甙每日口服500mg/kg连续3天，能使四氯化碳肝损伤大鼠的肝功能恢复正常，还能使半乳糖所致的肝功能与组织损伤恢复。柴胡皂甙a对四氯化碳引起的小鼠肝损伤实验，可见过氧化质含量降低，肝脏中GSH含量升高，而血清中GTP含量下降，肝脏中甘油三酯含量降低，表明具有保护肝细胞损伤和促进肝脏中脂质代谢。 3.2 对胃、十二指肠的作用： 柴胡总皂甙浓度在l-210（-4）时,能兴奋离体肠平滑肌，且不为阿托品所对抗。在310（-6）浓度时对离体肠鼠小肠能增强乙酰胆碱引起的收缩作用。口服柴胡总皂甙能抑制胃酸的分泌，增加胃液的pH值。对大鼠实验性的醋酸溃疡，每日口服粗皂甙10mg/kg，连续15天，有促进胃溃疡的治疗作用，但较大剂量50或100mg/kg反而出现溃疡恶化倾向。在用固定水浴法所致应激性溃疡中，口服粗皂甙500mg/kg有明显的抑制作用。另外，柴胡总皂甙对胰蛋白酶有较强的抑制作用。 4.抗病原体作用：柴胡有抗病原体作用：北柴胡注射液及其蒸馏出的油状物对流感病毒都有强烈抑制作用。柴胡皂甙a的体外实验表明对流感病毒也有抑制作用。柴胡还有抗结核菌作用。柴胡注射液也可治疗单疱病毒角膜炎，能促进溃疡愈合，后层皱折及实质层浸润水肿消失，有助于恢复视力。 5.对物质代谢的影响： 5.1对蛋白代谢的影响： 柴胡皂甙a、c、d混合物（3 ：2 ：2）能明显增加大鼠的蛋白质生物合成。肌肉注射柴胡总皂甙也有这种作用。 5.2对糖代谢的影响： 柴胡总皂甙能使肝糖无明显增加，促进葡萄糖在总脂质和胆甾醇生物合成中的利用率明显增加。 5.3对脂质代谢的影响：柴胡总皂甙能抑制肾上腺素和ACTH诱导的脂库中的脂肪分解作用，也抑制胰岛素促进脂肪的生成作用，使血中脂肪量降低。 5.4柴胡中所含的a-菠菜甾醇有降低血浆胆固醇的作用，能对抗硫脲嘧啶降低家兔基础代谢的作用。 二、柴胡有效化学成分研究柴胡其成分主要含柴胡皂苷（saikosapoins a、 b、 c、 d 四种），甾醇（柴胡醇、丁香酚等），脂肪酸（油酸、亚麻油酸、棕榈酸、硬脂酸等）和多糖等。可归结为以下几类： 1皂苷类皂苷类化合物有3种结构类型：木脂内酯类、单环氧木脂素及双环氧木脂素。 2黄酮类柴胡中的黄酮类成分主要为黄酮醇类，又分为山奈酚、槲皮素、异鼠李素三个主要苷元。3木脂素类柴胡中的木脂素类大多为油状物，且多从植物叶中分离得到。目前已从该属植物中分到30个木脂素类化合物，这些化合物有3种结构类型：木脂内酯类、单环氧木脂素及双环氧木脂素。4香豆素类柴胡中分得的香豆素类多为简单香豆素类，它们是(脱肠草素)、(莨菪亭)、(蒿属香豆素)、(白柠檬素)、(白蜡树亭)、(七叶亭)，此外还有一个吡喃香豆素的双酯ancInalh。5多糖 柴胡总皂苷为混合物，其中包含皂苷a、b、柴胡多糖基本由阿拉伯糖、核糖、木糖、葡萄糖、半乳糖及鼠李糖组成，南柴胡多糖成分与北柴胡相近，但无鼠李糖而有甘露糖。 6.甾醇类 柴胡的地上部分含有A_菠菜甾醇，柴胡的茎中还含有B一谷甾醇。三、柴胡注射液有效成分药理研究 1、解热、抗病毒、抗细菌内毒素作用解热作用 现代药理学证明大剂量柴胡煎剂对人工发热的家兔有解热作用，其有效成分为柴胡挥发油。柴胡对外感，内伤所致高热均可奏效，且退热平稳，无反跳现象也可安全用于儿童及孕妇，这是其他退热药无法比拟的，故而现在临床上常用柴胡制成的柴胡注射剂治疗各种热症。柴胡皂苷对大肠杆菌、伤寒杆菌、副伤寒疫苗或酵母液等所引起的动物实验发热均有明显解热作用，而且还能使正常动物的体温降低，人体试验及临床研究发现柴胡皂苷对感冒发热总有效率高达95：尤其对风热外感发热疗效最佳。 2、抗病毒作用 柴胡对鸡胚内流感病毒有显著抑制作用，能显著降低鼠肺炎病毒所致小鼠肺指数增高，阻止肺组织渗出性变性，降低肺炎病毒所致小鼠的死亡率，对抗地塞米松对巨噬细胞吞噬活性的抑制作用，柴胡能抑制病毒对机体的损伤，增加机体对抗原的处理。柴胡中的有效成分柴胡皂苷a，d和二次生成的柴胡皂苷b，b。，b3。对于M，I有很强的抑制作用，能引起能量和水盐代谢的变化从而起到抗病毒作用H3由于柴胡具有较强的抗病毒能力，因此柴胡常被用来治疗病毒性流感和病毒性呼吸道感染，如流行性腮腺炎这一急性呼吸道传染病。有文献报道巧，用柴胡治疗流行性腮腺炎，症状消失快，腮腺肿胀明显好转为显效，没有出现并发症，未见毒副作用。近期还有人使用柴胡治疗病毒性心肌炎，也取得了很好的疗效。 3、抗炎的作用柴胡具有显著的抗炎作用，柴胡抗炎的有效成分为柴胡皂苷。柴胡皂苷对许多炎症过程包括渗出、毛细血管通透性、炎症介质释放、白细胞游走和结缔组织增生等都有影响。 4、降血脂的作用柴胡可以显著降低小鼠血清总胆固醇、甘油三脂，作用程度优于已知的降脂药物，能抑制小鼠实验性高脂血症的形成，其有效成分为柴胡皂苷。柴胡可以抑制高脂血症的形成，有效的防治动脉粥样硬化，而且对于身体机能日渐衰退的老年人来讲，柴胡的毒副作用小这一点非常重要。四、柴胡注射液有效成分理化性质 柴胡注射液有效成分主要分为黄酮类，皂苷类，木质素类和香豆素等几种，其理化性质分别为： 1、黄酮类（主要为黄酮醇类，又分为山奈酚、槲皮素、异鼠李素三个主要苷元）(1 )山奈酚性状：黄色精细粉末。物理性质：山奈酚属于黄酮醇类，黄色针晶，熔点276-278 山奈酚微溶于水，溶于热乙醇，乙醚和碱。药理作用：抗菌，对黄色葡萄球菌及绿脓杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌均有抑制作用。止咳，治疗支气管炎。抑酶，抑制眼醛糖还原酶，有利于糖尿病白内障的治疗。具有诱变剂活性，当浓度为110-4mol/L时，可抑制淋巴细胞增殖。主要用于抗癌、抑制生育、抗癫痫、抗炎、抗氧化剂、解痉、抗溃疡、利胆利尿剂、止咳。 2、槲皮素性状：二水合物为黄色针状结晶（稀乙醇），在95-97C成为无水物物理性质：熔点314C（分解）。能溶于冷乙醇（1:290），易溶于热乙醇（1:23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等，不溶于水、苯、乙醚、氯仿、石油醚等，碱性水溶液呈黄色，几乎不溶于水，乙醇溶液味很苦。化学性质：1.抗氧化剂。主要用于油脂、饮料、冷饮、肉类加工制品。2.一种天然染料。可用作介质染料。用于羊毛和棉，用铝盐得黄色，用铬盐得橄榄黄色，用锡盐得橙色，用铁盐得橄榄绿。耐皂洗很好，耐晒中等。药理作用：槲皮素具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用，用于慢性支气管炎。此外还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量等作用。对冠心病及高血压患者有辅助治疗作用 3、异鼠李素性状：淡黄色针状结晶。物理性质：分子量：316.2623 密度：1.634g/cm3 熔点：307 沸点：599.4C at 760 mmHg 闪点：227.8C 蒸汽压：5.79E-15mmHg at 25C 药理作用：止咳祛痰，消食化滞，活血散瘀。用于咳嗽痰多、消化不良、食积腹痛、跌扑瘀肿、瘀血经闭。 4、皂苷类（主要为三萜皂苷）性状：柴胡皂苷分子大，不易结晶，大多数为白色或乳白色无定形粉末，仅少数为结晶体，皂苷元大多有完好的结晶。.物理性质：柴胡皂苷分子大，不易结晶，大多数为白色或乳白色无定形粉末，仅少数为结晶体，皂苷元大多有完好的结晶。皂苷多数为具有苦味和辛辣味，且多具有吸湿性。三萜皂苷有降低水溶液表面张力的作用，其水溶液经常强烈振摇能产生持久性泡沫，不因加热而消失。三萜皂苷的熔点都很高，常在熔融前分解，分解点多在200-300之间。三萜皂苷一般可溶于水，易溶于热水、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中，几乎不溶或难溶于丙酮、乙醚、苯等有机溶剂。皂苷在正丁醇或戊醇提取皂苷，可使之与亲水性杂质分离。三萜皂苷元能溶于石油醚、苯、乙醚、三氯甲烷等有机溶剂，而不溶于水。化学性质：1金属盐类反应 三萜皂苷的水溶液可与一些金属盐类，如铅盐、钡盐、铜盐等产生沉淀。酸性皂苷水溶液，加入中性盐类即生成沉淀；中性皂苷水溶液则需加入碱式醋酸铅或氢氧化钡等碱性盐类才能产生沉淀。 2显色反应 三萜皂苷在无水条件下，与强酸（硫酸、磷酸、高氯酸）、中强酸（三氯乙酸）或Lewis酸（氯化锌、三氯化锑）作用，会出现一系列显色变化或荧光。4、木质素类（木脂内酯类、单环氧木脂素及双环氧木脂素）性状：多数为无色结晶，一般无挥发性，不能随水蒸气蒸馏，只有少数木脂素在常压下能因加热而升华。物理性质：游离的木脂素是亲脂性的，一般难溶于水，易容于亲脂性有机溶剂和乙醇中。具有酚羟基的木脂素还可溶于碱性水溶液中。木脂素与糖结合成苷时则亲水性增加，对水的溶解性也增大。化学性质：1、光学活性木脂素分子中常具有多个手性碳原子或手性中心结构，所以大部分都有光学活性。木脂素的生理活性常与手性碳的构型有关，因此在提取过程中应注意操作条件，以避免提取的成分发生结构改变。2、酸碱异构化作用许多木脂素类成分，由于饱和的环状结构部分可能有立体异构存在，在受到酸碱作用后，很容易发生异构化转变成立体异构体。此外双环氧木脂素类常具有对称结构，在酸的作用下，呋喃环上的氧原子与苄基碳原子之间的键易于开裂，在重新闭环时构型即发生了变化。某些木脂素类遇到矿酸后还能引起结构的重排。3、功能基基团木脂素分子中常有醇羟基、酚羟基、甲氧基、亚甲二氧基、羧基及内酯等基团，因而也具有这些功能团的性质和反应。三氯化铁或重氮化试剂可用于酚羟基的检查，Labat试剂（没食子酸浓硫酸试剂）或Ecgrine试剂（变色酸浓硫酸试剂）可用于亚甲二氧基的检查。5、香豆素类主要为简单香豆素，其中包括(脱肠草素)、(莨菪亭)、(蒿属香豆素)、(白柠檬素)、(白蜡树亭)、(七叶亭)性状：白色晶体。物理性质：熔点：69。沸点：297299。溶解性：溶于乙醇、氯仿、乙醚，不溶于水，较易溶于热水。化学性质：.1. 异羟肟酸铁反应 碱性条件下，香豆素内酯可开环，与盐酸羟肟缩合成异羟肟酸，然后在酸性条件下与三价铁离子络合呈红色。2. 三氯化铁反应 含有酚羟基的香豆素可与三氯化铁试剂产生颜色反应。3.GIBBS反应： 2，6-二氯（溴）苯醌氯亚胺，在弱碱性条件下可与酚羟基对位的活泼氢缩合成蓝色化合物。4.EMERSON反应： 氨基安替比林和铁氰化钾，可与酚羟基对位活泼氢生成红色缩合物。五、柴胡注射液有效成分提取工艺研究传统提取工艺研究中药治疗的传统提取方法包括水煎煮法、浸渍法、渗漉法、改良明胶法、回流法、溶剂提取法、水蒸气蒸馏法和升华法等。其中水煎煮法是最常用的方法。溶剂提取法溶剂提取法是应用最广泛的方法，它是根据中草药中各种有效成分溶解度的性质，选用对需要成分溶解度大而对其他成分溶解度小的溶剂，将所需要的活性成分从药材组织内溶解出来的一种提取方法。常见的提取溶剂可分为以下三类:1、水：水是一种强的极性溶剂。中草药中亲水性的成分，如无机盐、糖类、分子不太大的多糖类、鞣质、氨基酸、蛋白质、有机酸盐、生物碱盐及甙类等都能被水溶出。为了增加某些成分的溶解度，也常采用酸水及碱水作为提取溶剂。酸水提取，可使生物碱与酸生成盐类而溶出，碱水提取可使有机酸、黄酮、蒽醌、内酯、香豆素以及酚类成分溶出。但用水提取易酶解甙类成分，且易霉坏变质。某些含果胶、粘液质类成分的中草药，其水提取液常常很难过滤。2、亲水性的有机溶剂：也就是一般所说的与水能混溶的有机溶剂，如乙醇（酒精）、甲醇（木精）、丙酮等，以乙醇最常用。乙醇的溶解性能比较好，对中草药细胞的穿透能力较强。亲水性的成分除蛋白质、粘液质、果胶、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。难溶于水的亲脂性成分，在乙醇中的溶解度也较大。还可以根据被提取物质的性质，采用不同浓度的乙醇进行提取。用乙醇提取比用水量较少，提取时间短，溶解出的水溶性杂质也少。（3）亲脂性的有机溶剂：也就是一般所说的与水不能混溶的有机溶剂，如石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷等。这些溶剂的选择性能强，不能或不容易提出亲水性杂质。但这类溶剂挥发性大，多易燃（氯仿除外），一般有毒，价格较贵，设备要求较高，且它们透入植物组织的能力较弱，往往需要长时间反复提取才能提取完全。现代提取工艺研究1 仪器岛津LC-20A高效液相分析仪（SPD-20A紫外检测器）；752紫外分光光度计（上海精密仪器科技有限公司）；RE 5286A 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；METTLER AE240电子分析天平（瑞士）2方法2.1 单因素试验 分别以药材浸渍温度、浸渍时间、料液体积比、蒸馏液收集量等为因素，在不同水平下进行单因素试验，筛选出影响柴胡挥发油提取的主要因素和水平，同样分别以乙醇浓度、PH值、柴胡皂苷提取时间、料液体积比等为因素，在不同水平下进行单因素试验，筛选出影响柴胡皂苷的提取的主要因素和水平。从而为正交试验设计提供依据。2.2挥发油的提取和测定方法随机称取50g柴胡干燥粗粉，置于500ml圆底烧瓶中，采用水蒸气蒸馏法在不同条件下提取柴胡挥发油，收集蒸馏液，加3%丙二醇摇匀，精密量取上述蒸馏液2ml两份，一份置5ml容量瓶中，加水定容，摇匀，作为样品液，另一份置蒸发皿中，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水溶解，转移至5ml容量瓶中，加水定容，摇匀，作为空白。用752紫外分光光度计在277nm波长处测定蒸馏液中挥发油的吸收度。2.3柴胡皂苷的提取取提取挥发油后的药渣，滤干，置于500ml圆底烧瓶中，在不同条件下回流提取柴胡皂苷，过滤得滤液,减压低温浓缩成每1ml含0.5g柴胡的浓缩液,备用。2.4柴胡皂苷a 含量测定2.4.1色谱条件大连伊利特C18(4.6mm250mm,5m)；流动相：乙腈-水37：63；流速：1ml/min；检测波长208nm；柱温：35；进样量20l.2.4.2 对照品溶液的制备精密称取柴胡皂苷a对照品5.09mg，加甲醇溶解并定容至10ml，摇匀，配成0.509mg/ml对照品溶液,冷藏备用。2.4.3 供试品溶液的制备取上述浓缩液10ml减压蒸干，加20ml甲醇溶解残渣，过滤得滤液。再取2ml滤液至10ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，冷藏备用。 2.4.4 线性范围考察 精密吸取对照品储备液2.0、6.0、10.0、14.0、18.0l，在“2.4.1”项下色谱条件下进样测定,记录峰面积，以峰面积积分值Y为纵坐标，对照品溶液进样量X（l）为横坐标，进行线性回归（n=5）, 得线性回归方程为Y=209413.7X162379.4，线性范围为：0.9720 9.635g，相关系数为r=0.9997，线性关系良好。2.4.5 精密度试验 精密吸取对照品20l，在“2.4.1”项下色谱条件下重复进样5次测定，记录峰面积，RSD为1.5%（n=5），表明精密度良好。2.4.6 稳定性试验 将供试品溶液在室温下贮存，在“2.4.1”项下色谱条件下，分别于0，2h，4h，6h，8h进样测定，记录峰面积，RSD为2.0%，表明样品在8h内稳定。2.4.7重现性试验 精密称取同一批样品5份，按供试品溶液处理方法制备样品溶液，在“2.4.1”项下色谱条件下重复进样测定5次，记录峰面积，RSD为2.1%（n=5）2.4.8样品测定精密吸取20l样品溶液，在“2.4.1”项下色谱条件下进样测定，记录峰面积，计算各样品中柴胡皂苷a的含量。2.5正交试验以柴胡蒸馏液中挥发油的吸收度和柴胡皂苷a的含量为检测指标，参照单因素试验结果，分别以药材浸渍温度、挥发油收集量、柴胡皂苷提取时间、柴胡皂苷提取溶剂料液比等主要因素及不同水平进行（L9(34)正交设计，筛选最佳工艺。正交试验因素和水平见表1 表1 正交试验因素及水平 Tab1 Factor and level of orthogonal test因素水平因素浸渍温度A收集量B提取时间C料液比D1402倍1h5倍2604倍2h6倍3805倍3h8倍3结果与分析3.1 浸渍温度对挥发油提取效果的影响分别在30、40、60、80温度下浸渍6h,料液比1:6，提取一次，考察浸渍温度对挥发油提取效果的影响。测得吸收度依次为：0.303、0.984、0.758、0.587。由测定结果可知，在40下浸渍吸收度达到最大。且变化显著，所以浸渍温度应选在40左右。3.2浸渍时间对挥发油提取效果的影响在40下，分别浸渍0h、2h、4h、6h、8h,料液比1：6，提取一次，考察浸渍时间对挥发油提取效果的影响。测得吸收度依次为：0.470、0.559、0.650、0.940、0.722。由测定结果可知，浸渍6h吸收度最大，浸渍4h和8h吸收度相当。3.3料液比对挥发油提取效果的影响料液比分别为1：5、1:6、1：8、1:10,提取一次，考察料液比对挥发油提取效果的影响，测得吸收度依次为：0.316、0.443、0.337、0.258。由测定结果可见，料液比1：6吸收度最大。且变化显著。3.4挥发油收集量对挥发油提取效果的影响分别收集100ml、200ml、300ml蒸馏液，考察挥发油收集量对挥发油提取效果的影响，测得吸收度依次为：0.454、0.507、0.596。由测定结果可知。随着收集量的增多，吸收度逐渐增大，但增加趋势不显著。3.5乙醇浓度对柴胡皂苷提取效果的影响分别以95%、75%、60%、45%乙醇，料液比为：1:6，提取柴胡皂苷。考察不同乙醇浓度对柴胡皂苷提取效果的影响，柴胡皂苷a含量依次为：0.20%、0.15%、0.12%、0.12%。由测定结果可知，柴胡皂苷提取率随乙醇浓度的降低而降低。在95%乙醇浓度时最大。且变化较显著。因此选用95%乙醇提取。3.6 PH值对柴胡皂苷提取效果的影响分别用0、5%、10%、15%的氨水95%乙醇液提取皂苷。考察PH值对柴胡皂苷提取效果的影响，柴胡皂苷a含量依次为：0.20%、0.25%、0.24%、0.24%。由测定结果可知，碱性乙醇提取效果比较好，含5%10%氨水95%乙醇条件下提取液中柴胡皂苷a变化不显著，因此选用含5%氨水。3.7提取时间对柴胡皂苷提取效果的影响用95%乙醇分别在0.5h、1h、2h、3h、提取皂苷。考察提取时间对皂苷提取效果的影响。柴胡皂苷a含量依次为：0.20%、0.25%、0.20%、0.20%。由测定结果可知，提取1h时提取率最大。提取时间再长提取率就逐渐下降。3.8料液比对柴胡皂苷提取效果的影响 在10倍、8倍、6倍、5倍、3倍不同料液比条件下回流提取柴胡皂苷。考察料液比对柴胡皂苷提取效果的影响。柴胡皂苷a含量依次为：0.15%、0.15%、0.20%、0.21%、0.14%。由测定结果可知，料液比为在5倍时提取率最大。3.9 正交试验结果与分析3.9.1 综合评分标准:因柴胡中的挥发油和柴胡皂苷a均为有效成分,权重应相等。则规定吸收度中最大值0.945及柴胡皂苷a含量中最大值0.33%为100,其余值对应比较,两项加和后平均得综合评分值,结果见表2,方差分析见表3。表2 正交试验结果与分析Tab 2 Result of orthogonal test试验号列号试验结果综合评分1234因素吸收度含量（%）y(%)ABCDy1y211（40）1（2倍）1（1h）1（5倍）0.9450.2486.2621（40）2（4倍）2（2h）2（6倍）0.470.2766.2231（40）3（5倍）3（3h）3（8倍）0.5730.2873.8442（60）1（2倍）2（2h）3（8倍）0.7180.3287.9352（60）2（4倍）3（3h）1（5倍）0.4350.2256.0362（60）3（5倍）1（1h）2（6倍）0.6330.2469.0673（80）1（2倍）3（3h）2（6倍）0.540.2971.7983（80）2（4倍）1（1h）3（8倍）0.4680.3374.7693（80）3（5倍）2（2h）1（5倍）0.4650.2664综合评分Ij226.32245.98230.08206.29j213.02197.01218.15207.07j210.55206.9201.66236.53Rj5.2616.329.4710.08表3误差分析Tab 3 Error analysis方差来源离均差平方和自由度方差F值显著性A 47.962 23.981.00B 447.012223.5059.32显著C135.772 67.8852.83D198.11299.0554.13一般显著由表2和表3可知，收集量的极差最大，其次是料液比和提取时间，故对于柴胡提取效果影响的大小顺序为BDCA,由于A和C影响不显著，故综合考虑，选择最佳提取方案为A1B1C1D3，即40浸渍，收集100ml挥发油，8倍量含5% 氨水的95%乙醇提取1h。3.10最佳方案的验证实验取50g柴胡粗粉置500ml圆底烧瓶中，在最佳提取条件下提取。重复两次。验证实验结果见表4表4 验证实验结果Tab 4 Result of verification test实验次数 挥发油吸收度柴胡皂苷a的含量1 0.9380.33 2 0.9430.32 平均值 0.941 0.32由表4可见，采用优化最佳工艺提取有效成分柴胡挥发油和皂苷，其挥发油吸收度和柴胡皂苷a的含量都较高，且工艺条件稳定可靠，重复性好。六、柴胡注射液有效成分质量评价 有效成分提取实验方法 1. 色谱 - 质谱条件:色谱柱为 HP - 5MS(30m0. 25mm 0. 25 m)弹性石英毛细管柱 ,柱流量 0. 8mlP min。柱温:初温50,以4 P min的速率升温到 250。载气:高纯氮气 ,进样品温度250。进样方式:不分流。GC - MS接口温度 290。EI源(70ev) ,EM电压1249V。溶剂延迟3. 0分钟。扫描范围:29 - 400amu。1. 2. 2 药典法提取:称取柴胡根干粉 500g ,用 5 倍量水浸泡20小时 ,进行水蒸气蒸馏 ,收集初馏液 4000ml 之后 ,进行二次水蒸气蒸馏 ,收集精馏液1000ml。然后用乙酸乙酯萃取 ,无水硫酸钠干燥脱水 ,回收乙酸乙酯得柴胡挥发油(A) 。2. 原生药柴胡提取:称取柴胡根干粉 500g ,用 5 倍量含20 %NaCl 的(pH = 1)的硫酸水溶液浸泡 20 小时 ,进行蒸馏。收集初馏液4000ml 之后 ,进行二次水蒸气蒸馏 ,收集精馏液1000ml。然后用乙酸乙酯萃取 ,无水硫酸钠干燥脱水。回收乙酸乙酯得柴胡挥发油(B) 。3柴胡纤维提取:称取柴胡根 2000g ,依次用石油醚、 冷水、 热水分别浸泡提取两次 ,用 5 倍量含 20 %NaCl 的(pH = 1)的硫酸水溶液浸泡20小时 ,进行蒸馏。收集初馏液3000ml 之后 ,进行二次水蒸气蒸馏 ,收集精馏液 700ml。然后用乙酸乙酯萃取 ,无水硫酸钠干燥脱水 ,回收乙酸乙酯得挥发油(C) 。4. 柴胡皂苷提取:称取柴胡根 2000g ,用 95 %乙醇渗漉 ,渗漉液减压回收溶剂后 ,石油醚脱脂 ,经硅胶 H柱脱糖 ,活性炭脱色素 ,得柴胡总皂苷。用 5 倍量含 20 %NaCl 的(pH = 1)的硫酸水溶液浸泡20小时 ,进行蒸馏。收集初馏液2000ml 之后 ,进行二次水蒸气蒸馏 ,收集精馏液 500ml。然后用乙酸乙酯萃取 ,无水硫酸钠干燥脱水 ,回收乙酸乙酯得挥发油(D) 。七、柴胡注射液生产设备研究1、工艺设备设计与选型的步骤 工艺设备设计与选型分两个阶段，第一阶段包括以下内容：定型机械设备和制药机械设备的选型；计量贮存容器的计算：定型化工设备的选型；确定非定型设备的形式、工艺要求、台数、主要规格。第一阶段是解决工艺过程中的技术问题，例如过滤面积、传热面积、干燥面积以及各种设备的主要规格等。设备选型应该以下步骤：首先了解所需设备的大致情况国产还是引进，使用厂家的使用情况，生产厂家的技术水平等；其次是搜集所需资料，目前国内外生产制剂设备的厂家很多，技术水平和先进程度也各不一样，要做全面比较；再次，核实与本设计所要求的是否一致；最后到设备制造厂家了解其生产条件和技术水平及售后服务等。总之，首先要考虑设备的适用性，使用能达到药品生产质量的预期要求。2 、全套生产线概述2.1 BSY50/500型玻璃瓶大输液生产线主要用途：本生产线适用于50ml、100ml、250ml、500ml玻璃瓶瓶装输液生产。全线由理瓶机、启盖机、外洗机、超声波洗瓶机、灌装机、压塞翻塞机、扎盖机组成，能自动完成理瓶、输瓶、启塑料外盖、瓶内外表面粗清洗、灌装、压塞、翻塞理盖、压盖、扎盖等工序。3 、启盖机QG180型启盖机-专供50ml、100ml、250ml、500mlA型和B型玻璃输液瓶在进行洗瓶前将塑料外盖启掉，以便于洗瓶机清洗瓶内。3、1 QG180型启盖机主要用途：专供50ml、100ml、250ml、500mlA型和B型玻璃输液瓶在进行洗瓶前将塑料外盖启掉，以便于洗瓶机清洗瓶内。 主要技术参数: 生产能力：60-200瓶/分功率：1.5Kw380v50Hz外形尺寸：10106601200（长宽高） 机器净重：800kg4 、外洗机 QJW6型外洗机-本机主要用于对玻璃输液瓶的外表面进行清洗： 4、1 QJW6型外洗机 主要用途：本机主要用于对玻璃输液瓶的外表面进行清洗。适用规格：50-1000ml生产能力：30-200瓶/分电机功率：2.2Kw380v50Hz外形尺寸：7505501320（长宽高）机器净重：300kg5、 超声波洗瓶机5、1 QJB24（16）型超声波洗瓶机主要用途：专供50ml、100ml、250ml、500mlA型和B型玻璃输液瓶在灌装之前进行外表、内腔清洗用。 主要技术参数： 生产能力：60-400瓶/分（20-200瓶/分） 每次进瓶数：24（16）只 电容量：12.8Kw380v50Hz常水耗量：500毫升/瓶离子水耗量：200毫升/瓶 蒸馏水耗量：250毫升/瓶洗涤温度：50-606 、GFA1型灌封机主要用途：该机适用广泛，从50ml注射液至500ml制药，食品以及化工等行业的酊水、糖浆、酒水类一般乳状液和悬浮液等液体产品的灌装和封口，任何圆、扁、方瓶，小口瓶，细长瓶，高筒瓶等均可适用。技术参数：生产能力：20-60瓶/分适用规格：50-500ml灌装计量误差：0.5% 计量泵：4个外形尺寸：200015001800（长宽高）7 、上瓶机、卸瓶机、灯检机、贴签机7.1、上瓶机该机用于大输液生产线轧盖后将瓶子自动地推上灭菌车。采用进口可编程序器控制，自动推瓶、自动升降，动作准确可靠，速度可调。 7.2、XP型卸瓶机该机用于大输液灭菌冷却后将瓶子从灭菌车中自动卸到理瓶台上。采用可编程序器控制，自动推瓶，自动升降，动作准确可靠，速度可调。7.3、QCS清洗机主要用途:适用于医药行业（西林瓶、输液瓶）胶塞清洗、烘干或灭菌用。 主要技术参数： 适用范围：各种范围胶塞 生产能力：1-2.5万只/批 工作时间：约2小时/批 电容量：10Kw380v50Hz 外形尺寸：250016001900（长宽高） 机器净重：1800kg7、4 TNZ200型直线式贴标机主要用途：本机为直线式贴标机，适用于医药、食品、轻工、化工行业圆柱形容器瓶身贴标。特别适合圆柱形容器贴环形商标。 主要技术参数： 生产能力：60-200瓶/分 容器规格：20-1000ml圆柱形玻璃瓶或金属听 标签规格：120300mm（最大） 电机功率：2Kw380v50Hz 外形尺寸：28009501100（长宽高） 机器净重：800kg8、离子交换器水的硬度主要是有钙、镁离子所构成，当含有硬度离子的原水经过软水器内树脂层时，水中的钙镁离子被树指交换吸附，同时等物质释放出的钠离子。从软水器内流出的水就是去掉了硬度离子的软化水。当树脂吸收一定量的钙、镁离子之后，就必须进行再生。再生过程就是用盐箱中的食盐当冲洗树脂层，把树脂上的硬度离子再置换出来，随再生废液排出罐外，树脂就又恢复了软水交换的能力。八、柴胡注射液生产工艺研究1 、工艺流程图检验 检验检验瓶 外 洗石英砂过滤称 量清洁剂处理活性炭过滤浓 配铝盖贮存初 洗一级反渗透粗滤脱炭离子交换精 洗稀 配紫外线消毒漂 洗精 洗精 滤纯 化 水灌 装精 洗多效蒸馏水机盖 塞检验过 滤注射用水轧 盖包 材标 签灭 菌 检验包 装入 库贴 签灯 检100000级区10000级区100级区2、1 辅料的选择原则任何药剂在制备过程中都要选用一些辅料。在片剂的处方中除主药粉末外，还常常根据需要加入稀释剂、润滑剂（或助流剂）、崩解剂等附加剂。由于剂型因素对药物吸收及生物利用度等有很大的影响，片剂中药物及添入的附加剂均能影响片剂的崩解及主药的释放、吸收。因此辅料是制备片剂的重要材料，它不仅是原料赋形的基础，还由于本身具有的性质，对片剂的制备工艺、稳定性、安全性、产品质量、疗效等有重要影响。选择辅料一般基于如下原则：a) 加入辅料应增加药物的物理及化学稳定性。b) 辅料与药物混合后所得的混合物料应有适当的流动性和分散性。c) 选用辅料应能提高至少不妨碍制剂的药效d) 辅料的加入不会增添制剂的毒副反应，最好能改善制剂质量。2、2制药用水制备本工艺制备500 ml 5%葡萄糖输液，需要大量的注射用水，本工艺中以饮用水为原水，首先电渗析，运用离子交换技术，得到一定纯度的去离子水。再经过蒸馏操作，得到我们所需要的注射用水。2、3 .1去离子水制备采用离子交换方法，可以把水中呈离子态的阳、阴离子去除，以氯化钠(NaCl)代表水中无机盐类，水质除盐的基本反应可以用下列方程式表达： 1、阳离子交换树脂：R-H + Na+ = R-Na + H+ 2、阴离子交换树脂：R-OH + Cl- = R-Cl + OH- 阳、阴离子交换树脂总的反应式即可写成： RH + ROH + NaCl RNa + RCL + H2O 由此可看出，水中的NaCl已分别被树脂上的H+和OH-所取代，而反应生成物只有H2O，故达到了去除水中盐的作用。 2.3.2 纯水的蒸馏本工艺中采取蒸馏的方法，因为其上一原料已是去离子水，采取高温蒸馏后再回流的方式进行制备。其方法简单，回流的速率叫快，也比较节余能源，降低设备的费用，同时得到的水的质量也是有保证，可得到注射用水。对已制备好的水，采取高度洁净的储罐储存，保证注射用水不被污染。2.4 原材料的制备 大输液系直接静脉滴注的灭菌注射剂，其原材料和溶剂都要符合注射剂的质量要求，还应调整 pH值和渗透压，配制的过程分为，先浓配，再稀配的方法。2.4.1 浓配称取注射用葡萄糖溶于适量注射用水中，加热煮沸，使成 60%左右的浓溶液，并且再加入的同时，采用一定的搅拌装置搅拌。配液工序应具备10万级净化条件，防止外界空气污染，必要时用加入0.01%-0.5%的针剂用活性炭煮沸以吸附热原、杂质和色素。2.4.2 过滤过滤多采用加压过滤法，黏度较高时可采用保温过滤。在本工艺运用陶瓷滤棒或钛滤棒进行预滤，当最初的滤液澄清度不合要求时，可进行回滤。2.4.3 稀配将过滤好的葡萄糖原液进行稀配，加入已计算得到的合理水量使得达到5%的浓度，加入的是已经制备的注射用水。稀配同样也要搅拌。稀释时，原辅材料质量较好，杂质少、纯度高的注射剂的配制。2.4.4 粗滤和精滤 对稀配好的溶液进行以前的过滤时粗滤方法。采用砂滤棒进行粗滤，粗滤一般进行的时间较短，再精滤中，我们采用微孔滤膜和滤器组成的过滤器，是使大输液完全达到注射剂澄明度和微粒限度要求的最重要的一步。过滤再制剂工作中，是非常重要的。 再进行完粗滤和精滤过后，再对已配好的溶液进行pH调节，加入盐酸调至pH=3.2-5.5，不仅增加活性炭的吸附力，而且可使葡萄糖中的杂质糊精水解，以及微量蛋白质凝固。2.5 输液瓶的清洗输液罐应由无色、透明、耐酸、耐碱、耐高温高压的中性硬质玻璃制成，外观光滑、透明、均匀、端正，瓶口内无毛边。输液瓶的好坏直接影响大输液的质量和产量。2.5.1 瓶外清洗瓶外的清洗是保证大输液的质量的必须，对于产品的质量要求的最基本保证。在本工艺中采用外洗机对玻璃输液瓶的外表面进行清洗。玻璃输液瓶通过输送机送入外洗机内，快速旋转的毛刷对瓶外壁洗刷，并通过喷洒高压水冲洗瓶外壁，从而达到洗净目的。由于科技的发展，这部分的内容一般已采用机械快速，连续清洗已满足工业化的需求。2.5.2 清洁剂处理运用1%-2%洗涤剂刷洗瓶中内外壁，采用滚筒自动洗瓶机刷洗。洗涤剂一般多采用通用的玻璃洗涤剂。2.5.3 饮用水处理对于已用清洁剂清洗后的输液瓶，需要通过饮用水处理来出去输液瓶上残留的清洁剂或洗涤剂。在通过喷洒高压水冲洗瓶外壁，从而达到洗净目的。饮用水处理后已基本达到要求.2.5.4 纯水清洗由于饮用水处理已达到基本要求，但因为GMP的要求，水的质量还未达到应用的标准，所以在本步骤中运用的纯水来处理。纯水的要求已达到了要求。本部也是有必要。2.6 隔离膜的处理将涤纶薄膜逐张浸入于0.9%的氯化钠溶液中，煮沸15-30 min后，消除静电效应对异物的吸附。倾去盐酸，加入75%乙醇液，浸入6-12 h.倾去醇液，用滤去的蒸馏水洗涤，或用纯水洗涤也可，以满足GMP要求。直至洗液中无氯离子反应为止。将洗净的涤纶薄膜放入过滤的注射用水中浸泡漂洗，临时用洁净镊子夹起，迅速盖在输液瓶口上。2.7 橡皮塞的处理输液瓶盖上的胶是PE热收缩膜。在商品包装上通常有PVC（聚氯乙烯）PE（聚酯）POF（多元复合物）热收缩膜。这些热收缩膜在使用前是经过规定的拉伸力将其拉展。在包封时通过热空气吹拂，自然收缩达到紧密封口的作用。它的原料组成都会影响大输液的质量，因此，必须经过处理后，确保安全后，方可应用于实际生产使用。用常水浸泡揉搓，除去灰尘杂质等，并挑除破毁者。用1%氢氧化钠液或2%碳酸钠液浸泡并煮沸30min.除去碱液，用粗液常水冲洗。将胶塞再浸没于盐酸中约15-30min倾去酸液，用粗滤常水冲洗。用蒸馏水洗涤，直至洗液中无氯离子反应时止。再用过滤的注射用水洗涤1-2次，并浸泡再过滤的注射用水中，待用。用时再以过滤的注射用水漂洗，取出甩出的水分，立即用已垫好涤纶薄膜的瓶口中，并翻帽向下，压严。旧胶塞的处理，同上述步骤。2.8 灌装工序 在灌装前，先进行对以上各部的材料清洗。运用注射用水清洗后，才进行本工艺的关键步骤，灌装。灌装需要在洁净度为100级环境下进行。药液由砂滤棒粗滤，再经微孔滤膜过滤后，便进入到自动灌装机中，最先到的滤液，弃去1000-2000ml，以后便可以灌装了，要调整灌装速度与进瓶的速度，使其同步匹配。一个班次必须将药液灌封完毕，不得留待次日处理。灌装在现代的设备上与封装机合为一体，做到了精密合理，再生产线上，更要做到连贯。与各部原材料的产出统一同步生产。用灌封的工序由灌注药液、加膜、压胶塞、轧铝盖四步连续组成。除加膜工序还是手工操作外，其余各工序已采用旋转式自动灌装机、自动翻塞机、自动落盖轧口机的联动化完成整个灌封过程，灌封完毕后，应进行检查，剔除轧口不紧的输液，再进行灭菌处理。灌装压塞区域通常采用局部百级层流净化装置，并应定期检查。2.9 灭菌与质检工序 在生产中染菌，由不能及时，有效地灭菌，是导致热原的因素之一，因而输液从配制到灭菌，以不超过4小时为宜，根据输液的质量要求以及输液容器