HPLC测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量.doc

HPLC测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量 摘 要：盐酸小檗碱为黄色结晶性粉末，临床主要用于肠道感染及菌痢等。盐酸小檗碱对溶血性链球菌、金葡菌、霍乱弧菌、志贺痢疾杆菌、白喉杆菌等有抑制作用。本文采用高效液相测定了黄连上清片中盐酸小檗碱的含量，固定相为USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（5m，4?6mm250mm），乙腈-水（5446）（每100mL中加十二烷基硫酸钠0.34g与磷酸二氢钠0.17g，磷酸调pH3.0）为流动相；盐酸小檗碱在1.050mg范围内呈良好的线性关系。盐酸小檗碱的平均回收率为99.21%，RSD为0.95%；此方法简便、准确、重现性好，可用于黄连上清片中盐酸小檗碱的含量测定。 关键词：黄连上清片；盐酸小檗碱；高效液相 黄连上清片为糖衣片，主治清热通便，散风止痛。黄连上清片由黄连、栀子（姜制）、连翘、蔓荆子（炒）、防风、荆芥穗、白芷、黄芩、菊花、薄荷、酒大黄、黄柏（酒炒）、酒大黄等组成，常用于头晕目眩、咽喉肿痛、大便秘结、暴发火眼、口舌生疮、小便短赤。黄连，多年生草本植物，是一种常用中药，最早在神农本草经中便有记载。黄柏，为芸香科植物黄皮树或黄檗的干燥树皮，用于湿热泻痢，黄疸，带下，热淋，脚气，痿辟，骨蒸劳热，盗汗，遗精，疮疡肿毒，湿疹瘙痒。医学启源记载：“黄檗，治肾水膀胱不足，诸痿厥，腰无力，于黄芪汤中加用，使两膝中气力涌出，痿软即时去矣二制治上焦，单制治中焦，不制治下焦也。”盐酸小檗碱为黄色结晶性粉末，临床主要用于肠道感染及菌痢等。本文采用高效液相法对制剂中盐酸小檗碱进行含量测定，为黄连上清片的质量控制提供依据。 1 仪器与试药 LC-100数字化电脑智能控制高效液相色谱仪（上海伍丰科学仪器有限公司）；ULABO 实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）；UV-2200双单色器双光束紫外/可见分光光度计（北京北分瑞利分析仪器（集团）公司）；JLABO TW系列通用水浴槽（优莱博技术（北京）有限公司）；上海仪电科仪L系列紫外可见分光光度计（上海仪电科学仪器股份有限公司）；上海舜宇恒平AE124C内校电子分析天平（北京联合科仪科技有限公司）；SPCC-6-HTD数码可调超声波清洗机（东莞市谱标实验器材科技有限公司）；PI5100 台式pH计（安莱立思仪器科技（上海）有限公司）；ELGA超纯水器（上海澜锐仪器科技有限公司）。盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所提供）。甲醇（天津市北科化学品有限责任公司）、乙腈（天津市津东天正精细化学试剂厂）、十二烷基硫酸钠（宜兴奥瑞格医药科技有限公司）、磷酸二氢铵（天津市北科化学品有限责任公司）、冰醋酸（天津市津东天正精细化学试剂厂）、磷酸二氢钠（浙江省海宁市上峰化工有限公司）、磷酸（宜兴奥瑞格医药科技有限公司）。 2 含量测定 2.1 色谱条件 色谱柱为USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（规格4.6mm250mm，5m）；乙腈-水（5446）（每100mL中加十二烷基硫酸钠0.34 g与磷酸二氢钠0.17 g，磷酸调pH 3.0）为流动相；流速1.0mL?min-1；检测波长350nm；柱温：301-5。 2.2 供试品溶液的制备 精密量取黄连上清片适量置50mL量瓶中，加流动相适量，超声处理5分钟，放置至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45m）滤过，即得。 2.3 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，用甲醇配置成每1mL溶液中含盐酸小檗碱5.5mg。 2.4 阴性干扰试验 在处方中去黄连、黄柏，取栀子（姜制）、连翘、蔓荆子（炒）、防风、荆芥穗、白芷、黄芩、菊花、薄荷、酒大黄、酒大黄等原辅料，按方中比例和制备工艺方法制成阴性制剂，制成阴性对照溶液，用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制，观察在与盐酸小檗碱相同的保留时间处是否存在吸收峰，结果表明：选定的条件测定盐酸小檗碱无干扰，具有较强的专属性。 2.5 标准曲线的制备 制备浓度为1.0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0mg?mL-1的盐酸小檗碱对照品溶液，分别吸取上述对照品溶液10L注入HPLC，记录色谱图，以峰面积积分值A（g）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线。试验表明，盐酸小檗碱对照品在1.050.0mg范围内线性关系良好。 2.6 精密度试验 依照2.3项下方法制备对照品溶液，精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液10L重复进样5次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.83%。结果表明，本方法具有良好的精密度。 2.7 重现性试验 分别称取同批黄连上清片样品6份，依照2.2项下方法制备供试品溶液，按上述含量测定项下方法，分别精密吸取上述供试品10L注入HPLC，测定含量，并计算样品的RSD值为0.95%。结果表明，此含量测定方法的重现性良好。 2.8 稳定性试验 取黄连上清片样品，依照2.2相下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，精密吸取上述溶液10L，分别在0，4，8，10小时注入高效液相色谱仪，进样测定，供试品盐酸小檗碱峰面积积分值的RSD为0.65%，说明盐酸小檗碱至少在10小时内稳定。 2.9 回收率试验 采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的盐酸小檗碱对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.21%，RSD为0.95%。 3 讨论 本实验分别考察甲醇-水-冰醋酸（15850.1），乙腈-1%冰醋酸溶液（2278），乙腈-水（5446）（每100mL中加十二烷基硫酸钠0.34g与磷酸二氢钠0.17g，磷酸调pH3.0）不同比例的流动相，结果以乙腈-水（5446）（每100mL中加十二烷基硫酸钠0.34g与磷酸二氢钠0.17g，磷酸调pH3.0）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-水（5446）（每100mL中加十二烷基硫酸钠0.34g与磷酸二氢钠0.17g，磷酸调pH3.0）为流动相为流动相。本文对黄连上清片中的盐酸小檗碱进行含量测定的试验方法，结果表明该法不受其它成分的干扰，分离度好，精密度、重现性佳，回收率高，可用于黄连上清片中盐酸小檗碱的含量测定。 参考文献 1庞小雄，宋粉云，钟兆健，夏汉铭.HPLC法测定拈痛丸中盐酸小檗碱的含量J.广东药学院学报，2007（3）. 2江汉美，叶代望，熊维利，贺友安.反相高效液相色谱法测定葛根芩连片中盐酸小檗碱的含量J.湖北中医药大学学报，2011（1）. 3梁海春，石书江，李一圣，谭丽容，赖正权，苏子仁，曾惠芳.HPLC法测定加味胃