不同贮藏条件下花生中黄曲霉毒素变化趋势.pdf

第7 卷第5 期 2 0 1 6 年5 月 食品安全质量检测学报 J o u r n a lo fF o o dS a f e t ya n dQ u a l it y V b l 7N o 5 M a y ，2 0 1 6 不同贮藏条件下花生中黄曲霉毒素变化趋势 刘冬梅，曹成，俎建英，张迪，尹海燕，李淑芳，贾斌，王敏， 马莹，刘继红+ ( 河南省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，河南省粮食质量安全与检测重点实验室， 农业部农产品质量安全风险评估实验室，郑州4 5 0 0 0 2 ) 摘要：目的探寻不同贮藏条件下花生中黄曲霉毒素含量的变化趋势。方法以远杂9 1 0 2 和豫花1 5 品种的 花生和花生仁为研究对象，采用免疫亲和层析净化高效液相色谱法测定其在不同储藏的条件下黄曲霉毒素的含 量。结果在整个贮藏过程中，远杂9 1 0 2 和豫花1 5 品种的花生和含水量低于l o 的花生仁的黄曲霉毒素含量为 0 ，而含水量高于1 0 的花生仁的黄曲霉毒素含量随着贮藏时间的延长而升高。在接菌量相同的条件下，同一品 种的花生仁黄曲霉毒素的含量随含水量增加而增高；在含水量相同的条件下，同一品种花生仁中黄曲霉毒素的 含量随接菌量的增加而增高。在相同的贮藏条件下，远杂9 1 0 2 花生仁中黄曲霉毒素含量极显著高于豫花1 5 。 结论在贮藏过程中，花生中黄曲霉毒素的含量与花生是否带壳、含水量、初始带菌量和品种之间具有相关性。 关键词：豫花1 5 ；远杂9 1 0 2 ；黄曲霉毒素；含水量；贮藏条件 V a r ia t io nt r e n do fa f l a t o x in sc o n t e n tinp e a n u tu n d e rd if f e r e n t s t o r a g ec o n d it io n s L I UD o n g M e i，C A OC h e n g ，Z UJ ia n - Y in g ，Z H A N GD i，Y I NH a i- Y a n ，L IS h u - F a n g ，J I AB in ， W A N GM in ，M A Y in g ，L I UJ iH o n g + ( I n s t it u t eo f Q u a l it yS t a n d a r da n dT e s t in gT e c h n o l o g y f o r A g r o - P r o d u c t s ，H e n a nA c a d e m yo f A g r ic u l t u r a lS c ie n c e ， H e n a nK e yL a b o r a t o r yo f G r a inQ u a l it ya n dS a f e t ya n dT e s t in g , L a b o r a t o r yo f Q u a l it y & S a f e t yR is k A s s e s s m e n t f o rA g r o - P r o d u c t s ( Z h e n g z h o u ) ，M in is t r yo f A g r ic u l t u r e ，Z h e n g z h o u4 5 0 0 0 2 ，C h in a ) A B S T R A C T ：O b j e c t iv e T oe x p l o r et h ev a r ia t io nt r e n do fa f l a t o x in sc o n t e n tinp e a n u tu n d e rd if f e r e n t s t o r a g e c o n d it io n s M e t h o d s U s in gp e a n u ta n dp e a n u tk e r n e lo fY U A N Z A 9 1 0 2 ( Y Z 9 1 0 2 ) a n dY U H U A l 5 ( Y H l 5 ) a ss t u d y o b j e c t s ，t h ec o n t e n t so fa f l a t o x in su n d e rd if f e r e n ts t o r a g ec o n d it io n sw e r ed e t e c t e db yim m u n ea f f in it yc h r o m a t o g r a p h y p u r if ic a t io n w it hh i【g hp e r f o r m a n c el iq u idc h r o m a t o g r a p h y R e s u l t s D u r in gt h ew h o l es t o r a g e ，t h ec o n t e n t so f a f l a t o x in sin2v a r ie t ie so f p e a n u t sa n dt h ep e a n u tk e m e lo f Y Z 9 1 0 2a n dY H l 5w it hw a t e rc o n t e n tl e s st h a n1 0 w e r e 0 ，w h il et h ec o n t e n to fa f l a t o x in sinp e a n u tk e r n e lw it hw a t e rc o n t e n tm o r et h a n1 0 in c r e a s e dw it ht h ep r o l o n g in go f s t o r a g et im e T h ec o n t e n to fa f l a t o x in sint h es a m ev a r ie t yo fp e a n u tk e r n e lin c r e a s e dw it ht h ein c r e a s eo fw a t e rc o n t e n t u n d e rt h es a m ec o n d it io no fin o c u l a t io nq u a n t it y ；a n dt h ec o n t e n to fa f l a t o x in sint h es a m ev a r ie t yo fp e a n u tk e m e l in c r e a s e dw it ht h ein c r e a s eo fin o c u l a t io nq u a n t it yu n d e rt h es a m ec o n d it io no fw a t e rc o n t e n t T h ec o n t e n to fa f t a t o x in s 基金项目：河南省财政预算项目( 花生中黄曲霉毒素控制技术研究) 、国家农产品质量安全风险评估项目( G J F P 2 0 1 6 0 0 7 1 F u n d ：S u p p o r t e db yF in a n c eD e p a r t m e n to fH e n a nP r o v e n c e ( P r o j e c to fS t u d yo nC o n t r o lT e c h n o l o g yo fA f l a t o x in sinP e a n u t ) a n dP r o j e c to f N a t io n a lA g r ic u l t u r a lP r o d u c tQ u a l it yS a f e t yR is kA s s e s s m e n t ( G J F P 2 0 1 6 0 0 7 ) + 通讯作者：刘继红，副研究员，主要研究方向为农产品质量安全检测技术。E m a il ：l j h a 3 1 0 0 1 6 3 t o m + C o r r e s p o n d in ga u t h o r ：L I UJ i- H o n g ，A s s o c ia t eR e s e a r c h e r , I n s t it u t eo fQ u a l it yS t a n d a r da n dT e s t in gT e c h n o l o g yf o rA g r o - p r o d u c t s H e n a n A c a d e m yo f A g r ic u l t u r a lS c ie n c e ，N o 1 1 6 ，H u a y u a nR o a d ，J in s h u iD is t r ic t ，Z h e n g z h o u4 5 0 0 0 2 ，C h in a E m a il ：l j h a 3 l o o 1 6 3 c o m 第5 期 刘冬梅，等：不同贮藏条件下花生中黄曲霉毒素变化趋势 1 9 2 l inp e a n u tk e r n e lo fY Z 9 1 0 2w a ss ig n if ic a n t l yh ig h e rt h a nt h a to fY H l 5 C o n c l u s io n D u r in gt h ew h o l es t o r a g e ，t h e c o n t e n to fa f l a t o x in sw a sc o r r e l a t e dw it hp e a n u ts h e l l ，w a t e rc o m e m ，t h ein it ia lq u a n t it yo f p a t h o g e na n dt h ev a r ie t y K E YW O R D S ：Y U H U A l 5 ；Y U A N Z A 9 1 0 2 ；a f l a t o x in s ；w a t e rc o n t e n t ；s t o r a g ec o n d it io n s 1 引言 黄曲霉毒素( a f l a t o x in s ，川丌) 是由黄曲霉( A s p e r g il l u s f l a v u s ) 和寄生曲霉( A s p e r g il l u sp a r a s it ic u s ) 产生的具有生物活 性的次生代谢产物的总称【l 】，常存在于发霉的粮油制品中。 天然产生黄曲霉毒素主要以5 种常见形式污染食品， 即黄曲霉毒素B 1 、G 1 、B 2 、G 2 、M 。；其中，以黄曲霉毒素 B l 最为常见，也毒性最强【2 】，具有很强致突变、致畸和致癌 作用【3 】，被世界卫生组织国际癌症研究机构列为I 类致癌物 【4 】，严重影响人们的健康甚至威胁着人们的生命安型5 1 。 黄曲霉毒素主要污染粮油制品，如花生、玉米、大米、 小麦和坚果等【6 】，其中以花生和玉米污染最为严重 】。近 年来，我国出口到欧盟的花生因黄曲霉毒素超标而遭退货 的事故屡有发生，这不仅影响了我国花生的出口，而且对 国内消费者的健康也构成严重威胁【8 】。因此，对贮藏条件 下如何防止和控制花生霉变污染的研究十分必要。由于出 口到欧盟国家的花生，会穿越赤道等高温高湿地区，其品 质很可能受到环境的影响。本研究模拟高温高湿的贮藏条 件，通过对2 个品种的花生和花生仁在不同含水量和不同 接菌量条件下黄曲霉毒素含量的变化趋势进行分析，为贮 藏花生的出口和安全控制提供理论参考。 2 材料与方法 2 1 实验材料 花生：远杂9 1 0 2 ( Y Z 9 1 0 2 ) 和豫花1 5 ( Y H l 5 ) 2 个品种的 花生均购自秋乐种业公司；黄曲霉菌株：为本实验室保存。 2 2 仪器与试剂 W a t e r s2 6 9 5 高效液相色谱仪( 沃特世科技( 上海) 有限公 司) ；A L 2 0 4 I C 电子天平( 美国M E T T L E RT O L E D O 公司) ； P Q X 3 3 0 B 3 0 H M 人工气候箱( 宁波莱福科技有限公司) ； D H G 9 0 7 0 A 电热鼓风干燥箱( 上海一恒科学仪器有限公司) 。 黄曲霉毒素B l 、G l 、B 2 和G 2 标准品：纯度 9 9 ，购 自美国S a n t a 公司；甲醇和乙腈( 色谱纯，美国M e e k 公司) ； 氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钾、吐温2 0 和 碘( 分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司) 。 2 3 试验方法 2 3 1 花生处理 将豫花1 5 ( Y H l 5 ) 和远杂9 1 0 2 ( Y Z 9 1 0 2 ) 2 个品种的花生 分别剥壳，测其花生仁含水量分别为6 和5 9 。然后将足量 的2 个品种的花生仁平均分成2 份，一份在无菌水中浸泡2h ， 另外一份浸泡4h ，用于以下实验处理。同时测定2 个品种的 花生仁在浸泡2 、4h 后的含水量，结果表明Y H l 5 的花生仁 在浸泡2 、4h 后的含水量分别为2 9 4 和3 5 3 ，9 1 0 2 的花生 仁在浸泡2 、4h 后含水量分别为2 5 3 和3 0 5 。 2 3 2 模拟实验设置 将分别浸泡O 、2 和4 h 的花生仁分成2 份，每份3k g ， 然后将每份花生仁分别接种黄曲霉菌株1I _ t g k g 和3 0 0 g g k g ；同时将2 个品种未去壳的花生分别接种黄曲霉菌株 l 肛g k g 和3 0 0 “g k g ，将上述实验处理花生在温度3 0 ， 相对湿度8 5 的人工气候箱进行贮藏，同时将未接菌的2 个品种的花生仁和花生为对照。每隔2 3d 取样1 0 0g ，用 于黄曲霉毒素含量的检测。 2 3 3 黄曲霉毒素测定方法 采用G B T1 8 9 7 9 - 2 0 0 3 食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法【9 】测定 花生样品中黄曲霉毒素的含量。 2 4 数据处理 实验数据采用E x c e l2 0 0 7 和S P S S1 9 0 软件对实验数 据进行处理。 3 结果与分析 3 1 同一品种花生不同贮藏条件下黄曲霉毒素含量 变化趋势 将不同处理的花生在人工气候箱( 温度3 0 ，相对湿 度8 5 ) 避光贮藏，每隔2 3d 取样对其黄曲霉毒素含量进 行测定。黄曲霉毒素总量变化趋势见图1 ，从图1 可知，远 杂9 1 0 2 ( 图lA ) 和豫花1 5 ( 图lB ) 2 个品种4 个处理的花生 仁( 含水量分别为2 9 4 、3 5 3 、2 5 3 和3 0 5 ) 黄曲霉毒 素的总含量随着贮藏时间的增加而升高，而2 个品种带壳 的花生和含水量为6 和5 9 的花生仁在整个贮藏过程中 黄曲霉毒素的含量均为0 。这表明，花生壳在储藏过程中对 黄曲霉的侵染具有防护作用。在接菌量相同的条件下，同 一品种花生仁含水量越高黄曲霉毒素含量越高，这与郭静 佩【lo 】研究结果相一致。在含水量相同的条件下，接菌量越 多的花生仁中黄曲霉毒素含量越高。黄曲霉毒素的毒性为 氰化钾的1 0 倍，砒霜的6 8 倍【1 1 13 1 ，G B 2 7 6 1 2 0 1 l 食品安全 国家标准食品中真菌毒素限量【1 4 】中规定花生中黄曲霉 毒素B l 限量指标为2 0I _ t g k g ，含有黄曲霉毒素1m g k g 以 上的食品和饲料有剧毒。不同接菌量的2 个品种的花生仁 在高温高湿的贮藏条件下贮藏6d 时，黄曲霉毒素的含量 均超过lm g k g 。这表明，在高温高湿的贮藏条件 下，受黄曲霉菌污染的2 个品种的花生仁已经达到剧毒。 1 9 2 2 食品安全质量检测学报 第7 卷 3 2 不同品种花生同一种贮藏条件下黄曲霉毒素含 量差异比较 为了解不同品种花生在贮藏过程中黄曲霉毒素变化差 异，本实验选取了目前河南省主栽的花生品种远杂9 1 0 2 和 9 0 0 0 0 一8 0 0 0 0 盖7 0 0 0 0 罚6 0 0 0 0 笔5 0 0 0 0 垛4 0 0 0 0 锵3 0 0 0 0 痞2 0 0 0 0 1 0 0 0 0 3 d6 d 1 0 d l3 d l7 d 2 0 d 2 4 d 2 7 d 3 I d 3 4 d 3 8 d 4 I d 4 5 d 花生贮藏时间 3 0 0 雌他g 含水最2 53 3 0 0 I 吼g 含水量3 05 3 0 0 e C l , g 含水龄59 3 0 0p 眺g 带壳 1 I 眺g 含水世2 53 p g k g 含水甜3 05 1p 毋g 含水垃59 1p 叶g 带壳 豫花1 5 进行实验和分析，结果如图2 。从图2 ( A 和B ) 可知，2 个品种的花生仁在接菌量相同含水量相近的情况下，黄曲 霉毒素的含量存在极显著性差异( 尸 O 0 1 ) ，远杂9 1 0 2 品种的 花生仁中黄曲霉毒素的含量极显著高于豫花1 5 。 1 0 0 0 0 0 苎8 0 0 0 0 曲 蚓 如6 0 0 0 0 o 始 蔷4 0 0 0 0 耀2 0 0 0 0 3 d 6 d1 0 d 1 3 d 1 7 d 2 0 d2 4 d 2 7 d 3 l d 3 4 d 3 8 d 4 1 d 4 5 d 花生贮藏时间 3 0 0 g k g 含水赶2 95 3 0 0p 卧g 含水量3 54 3 0 0 “g k g 含水量59 3 0 0 以g 带壳 1 g k g 含水量2 95 I I g ，k g 含水量3 54 1 州k g 含水量59 I 叶g 带壳 图1远杂9 1 0 2 和豫花1 5 贮藏过程中黄曲霉毒素总量变化趋势 A ：远杂9 1 0 2 ( Y Z 9 1 0 2 ) ；B ：豫花1 5 ( Y H l 5 ) F 培1 T h ev a r ia t io nt r e n do fa f l a t o x in sc o n t e n to f2v a r ie t ie so fp e a n u t ( Y U A N Z A 910 2a n dY U H U A 15 ) u n d e rd if f e r e n ts t o r a g ec o n d it io n s A ：Y U A N Z A 9 1 0 2 ( Y Z 9 1 0 2 ) ；B ：Y U H U A l 5 ( Y H l 5 ) 1 4 0 0 0 0 _ 耍1 2 0 0 0 0 i1 0 0 0 0 0 。 也 襄8 0 0 0 0 攒 褥6 0 0 0 0 _ _ 堪 4 0 0 0 0 L 2 0 0 0 0 龟 、 j 刍 把 ：j 堪 越 褥 乏 粤 6 0 0 0 0 5 0 0 0 0 4 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 A 3 d6 d l O d1 3 dI7 d2 0 d2 4 d 2 7 d 3 l d 3 4 d 3 8 d 4 l d 4 5 d 花生旷藏时间 B 3 d 6 d 1 0 d1 3 d17 d2 0 d 2 4 d 2 7 d 3 1 d 3 4 d 3 8 d 4 1 d 4 5 d 花生贮藏时间 一3 0 0 B g k gY Z 9 1 0 2 含水量2 5 3 - 3 0 0p g k g Y H l 5 含水量2 9 5 _ 3 0 0B g k gY Z 9 1 0 2 含水量3 0 5 一3 0 0u 2 k g Y H l5 含水量3 54 1p g k gY Z 9 1 0 2 含水量2 53 - 1 “k gY H l 5 含水量2 95 1g g k g Y Z 9 1 0 2 含水量3 05 1u k gY H l 5 含水量3 54 图2 豫花15 和远杂9 1 0 2 贮藏过程中花生仁中黄曲霉毒素含量差异比较 A ：接菌量为3 0 0g g k g ；B ：接菌量为1g g k g F ig 2 C o m p a r is o no fa f l a t o x in sc o n t e n tb e t w e e n Y U A N Z A 9 1 0 2 ( Y Z 9 1 0 2 ) a n d Y U H U A l 5 ( Y H l 5 ) d u r in gs t o r a g e A ：t h ein o c u l a t io na m o u n tw a s3 0 0l _ t g k g ；B ：t h ein o c u l a t io na m o u n tw a slg g k g 注：+ 表示P 0 0 1 第5 期 刘冬梅，等：不同贮藏条件下花生中黄曲霉毒素变化趋势 1 9 2 3 4 结论 目前，出口到欧盟国家的花生，从装箱到到达目的地 通常需要1 个月或者1 个月以上的时间，这期间产品将穿 越赤道等高温高湿地区，此期间花生面临最主要的问题是 黄曲霉毒素的污染。本研究通过模拟在高温高湿的贮藏条 件下，对不同品种的花生和花生仁在不同的含水量和不同 的接菌量的条件下黄曲霉毒素含量变化趋势分析，得出在 高温高湿的贮藏条件下花生黄曲霉毒素的含量与花生是否 带壳、含水量、初始带菌量和品种具有相关性，为花生的 出口和安全贮藏提供了理论参考。 参考文献 【I 】M o y I l eA L ，S h e l b yR ，C l e v e l a n dT E ，e ta 1 B a c il l o m y c inD ：a nit u r in 诵t h a n t if a n g a la c t iv it ya g a in s tA s p e r g il l u s f l a v u s 【J 】JA p p lM ie r o b io l ，2 0 0 1 ， 9 0 ( 4 ) ：6 2 2 - 6 2 9 2 】M o s sM O R is k s e m tf o ra f l a t o x in sinf o o d s t u f f s J 】I n tl o d e t e r io r B io d e g r a d ，2 0 0 2 ，5 0 ：1 3 7 1 4 2 3 】李培武，马良，杨金娥，等粮油产品黄曲霉毒素B l 检测技术研究进 展【J 】中国油料作物学报，2 0 0 5 ，2 7 ( 2 ) ：7 7 8 1 L iP W ，M aL ，Y a n gJ E ，e la 1 Ar e v ie wo na n a l y t ic a lm e t h o d sf o r a f l a t o x inB iing r a in sa n do il s e e d sp r o d u c t s 【J 】C h inJO ilC r o pS c i，2 0 0 5 ， 2 7 ( 2 ) ：7 7 - 8 1 【4 】T h e u m e rM GL o p e zA GM a s t hD T e ta ll m m u n o b io l o g ic a le f f e c t so f A F B la n dA F B I F B Im ix t u r eine x p e r im e n t a ls u b c h r o n icm y c o t o x ic o s e sin r a t s J T o x ic o l o g y , 2 0 0 3 ，1 8 6 ( 1 ) ：1 5 9 1 7 0 【5 】Z h a n gY S e , H im m e lM E ，M ie l e n z 瓜O u t l o o kf o rc e l l u l o s eim p r o v e m e n t ： S c r e e n in ga n ds e l e e t io ns t r a t e g ie s J 】B io t e c h n o l o gA d v , 2 0 0 6 ，2 4 ： 4 5 2 - 4 8 1 6 】张文玲，袁涛，李书国近1 0 年粮油食品中黄曲霉毒素检测技术的研 究进展 J 】粮食加工，2 0 1 2 ，3 7 ( 1 ) ：7 7 8 1 Z h a n gW L ，Y u a nT L iS GT h er e s e a r c hp r o g r e s so fd e t e r m in a t io n t e c h n o l o g yo fA F Tinc e r e a la n do ilf o o dt h er e c e n t1 0y e a r s 【J 】G r a in P r o c ，2 0 1 2 ，3 7 ( 1 ) ：7 7 - 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